卵巢癌ES-2、SK-OV3和JHOS-3细胞系TSLC1基因启动子区甲基化状态与表达

TSLC1(tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1)属肿瘤抑制基因,研究发现,恶性肿瘤中存在TSLC1基因表达降低或缺失,并且与肿瘤侵袭转移密切相关[1];并且TSLC1基因表达缺失多与启动子甲基化状态相关[2].卵巢癌是女性常见生殖系统肿瘤,较早发生侵袭和转移,严重威胁妇女的健康.本研究旨在探讨TSLC1基因在卵巢癌细胞系中CPG位点的甲基化状态及该基因的表达情况,为寻找卵巢癌基因治疗的靶点提供理论依据.     

膀胱尿路上皮癌中原肌球蛋白5的表达及其临床意义

目的研究原肌球蛋白5（TM5）在膀胱尿路上皮癌（BUC）中的表达,探讨TM5与膀胱癌生物学行为之间的关系。方珐采用免疫组化SP法和Western-blot技术,检测48例膀胱尿路上皮癌及8例正常膀胱黏膜组织中TM5的表达。结果①8例正常膀胱黏膜组织TM5蛋白全部阴性表达,48例膀胱癌标本中,TM5蛋白表达阳性者44例,阳性率为91．67％,二者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;②TM5在膀胱癌中的表达水平与肿瘤的临床分期、分化程度、有无淋巴结转移等生物学行为显著相关。结论TM5在膀胱尿路上皮癌中过度表达,在膀胱癌的发生发展中起重要作用。     

H5N1亚型禽流感病毒抗原成份免疫活性的分析研究

目的 分离H5N1亚型禽流感病毒抗原成份并分析其免疫活性.方法 本研究采用SDS-PAGE和Western-blot这两种方法对H5N1亚型禽流感病毒的抗原成份进行分离分析.结果 我们发现该病毒主要有14种多肽成份,其中有有11种蛋白组成成份被禽流感多克隆阳性血清特异性识别,经免疫酶联反应后,在醋酸纤维膜上可以清晰看到棕色的条带.结论 在14种H5N1亚型禽流感病毒蛋白中有11条具有抗原性和免疫活性.     

醒脑开窍针刺法对缺血性中风模型大鼠基底节14—3-3tau的影响

目的：观察醒脑开窍针刺法对缺血性中风模型大鼠基底节14—3—3tau蛋白表达水平的影响。方法：成年雄性Wister大鼠随机分为醒脑开窍组、针刺对照组、假手术组、模型组，每组分为6h、24h两个时间段；除假手术组不插入线栓之外，其余各组均采用脑膜中动脉阻塞法复制缺血性中风大鼠模型，清醒之后经行为学评分合格者，醒脑开窍组选用人中穴、内关穴，针刺对照组选用曲池穴、足三里穴各针刺1次，6h组在处死之前10min再针刺1次，24h组在12h、处死前10min时分别针刺1次；各组在规定时间取缺血侧基底节，用Western—blot对结果进行分析。结果：各组针刺前后、各个时间段之间的14—3-3tau表达水平并无显著性差异。结论：①14—3-3tau在缺血性中风中也许并不参与神经的降解过程；②14-3-3tau参与缺血性中风中的神经损伤过程，表达部位不在基底节。③在缺血性中风的6h、24h时间段的病理过程中，14—3-3tau蛋白参与此病理过程，但是表达水平很低，需要进一步的手段才能进行检测。     

对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后Survivin基因变化的研究

目的通过对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后观察Survivin基因的变化。方法设计两条针对Survivin基因CDS区不同位点的siRNA片段并构建shRNA表达载体,重组质粒使用阳离子脂质体法转染结肠癌细胞株HT-29。RT-PCR,Western-blot检测转染后mRNA及蛋白表达。结果转染shRNA重组质粒可有效抑制HT-29细胞Survivin的表达,Survivin mRNA和蛋白表达下调,表明Survivin基因沉默效果较高;两个转染组之间相比pshRNA1组Survivin基因的表达量低于pshRNA2组。结论人结肠癌细胞株中的Survivin基因表达率可通过shRNA重组质粒转染而发生变化;siRNA1和siRNA2序列中Survivin基因表达量存在统计学意义,提示我们在今后有关Survivin基因靶向治疗研究中是否需要考虑到序列的选择以提高作用效果。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑海马区NCAM-1表达影响的研究

目的：通过检测灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致癫痫大鼠脑海马神经细胞黏附分子1（NCAM-1）表达的影响,进一步探讨灵芝孢子粉对减轻癫痫症状的机制。方法：健康雄性Wistar大鼠30只．随机分为空白对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉用药组,每组10只。模型组和用药组复制癫痫模型。采用Western—blot方法检测大鼠脑海马区NCAM-1的表达。结果：模型组NCAM-1表达明显高于对照组（0．85±0．07vs0．36±0．08．P〈0.01）,用药组明显低于模型组（0．54±0．07vs0．85±0．07．P〈0．01）,高于对照组（0.54±0．07vs0．36±0．08,P〈0．05）。结论：灵芝孢子粉能有效降低癫痫大鼠NCAM-1的过度表达。从而降低NCAM-1对中枢神经系统的毒性损害。     

胃癌组织Wnt10b的表达及意义

目的：检测胃癌及癌旁组织中 Wnt10b 的表达,探讨其与临床病理参数的关系。方法收集25例胃癌患者手术切除的癌组织及对应的癌旁组织,用实时荧光定量 PCR检测 Wnt10b mRNA的表达,Western-blot技术检测 Wnt10b蛋白的表达,分析 Wnt10b mRNA在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系。结果胃癌组织中 Wnt10b mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织（P〈0.001）,胃癌组织中 Wnt10b mRNA 表达阳性率与肿瘤远处转移相关（P〈0.05）,但与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、分化程度和浸润深度无关。结论 Wnt10b在胃癌组织中呈活化状态,可能参与胃癌的发生发展。     

Clinical experimental study of Arnebia root oil promoting histological change and up-regulating bFGF expression in the wound

Objective： To explore the molecular biological mechanism of Arnebia root oil promoting wound surface healing by observing histological change and bFGF expression in wound surface tissue as well as wound surface healing rate. Methods： Raw surface in patients were randomly divided into 2 groups. Experimental group was treated by Arnebia root oil and control group was treated by petrolatum gauze, then the tissular structure of raw surface was observed by histology, histochemistry, electron microscope and raw surface healing rates was compared either, bFGF expression in wound surface tissue was also evaluated by Western-blot. Results： Raw surface healing rate of experimental group and control group had obvious difference（P〈0.05）. Raw surface of experimental group had more fibroblast, collagen and blood capillary, bFGF was expressed in both groups, and the level of bFGF expression in experimental group was higher than that in control group in every period. There were significant differences between 2 groups in gray-density value （ P〈0. 05）. Being as an internal control, no significant change was found for β-actin expression, although it occured in various phases. Conclusion： Arnebia root oil plays an important regulative role in the course of healing of wound and it can promote skin raw surface repair and accelerate wound surface healing, which are caused by enhancing bFGF in the wound tissue.     

消化道肿瘤自身抗体检测

目的探讨消化道肿瘤患者针对肿瘤细胞的自身抗体的存在。方法收集肠癌患者及胃癌患者术前血清96份和健康体检人群血清62份，分组后采用Western印迹分析法定性检测消化道肿瘤患者术前血清中的自身抗体。结果正常健康人群和正常肝细胞株96％（212／220）的反应条无显色带，而97％（60／62）的肠癌患者肠癌细胞株、89％（39／44）的胃癌患者胃癌细胞株反应条均出现多个阳性带。结论健康人群体内很少产生针对肿瘤细胞的自身抗体，而大部分消化道肿瘤患者体内产生针对肿瘤相关抗原的自身抗体，这为消化道肿瘤的病因，早期诊断，预后监测及分子靶向治疗等研究提供了一个很好的线索。     

汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用

目的 应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧光法了解重组NP（rNP）表达及与特异性免疫反应情况,SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况。建立免疫印迹法检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较。结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带,此抗原仅与HFRS患者血清起反应。经双盲试验,两法检测血清143份,HFRS阳性符合率为97.67%。结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统。所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。