免疫印迹法测定Tp47蛋白与梅毒患者血清的免疫反应性

目的克隆Tp47基因、构建原核表达载体、表达并纯化Tp47蛋白,通过免疫印迹法(Western-Blot)检测其免疫反应活性。方法聚合酶链反应扩增Tp47基因,将Tp47克隆至pGEX-6P-1载体,构建重组表达质粒pGEX-6P1-Tp47,经测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经诱导表达后,用亲和层析方法纯化重组蛋白,鉴定正确后采用Western-Blot检测重组蛋白与梅毒阴性、阳性血清的免疫反应性。结果成功构建pGEX-6P1-Tp47原核表达质粒,表达、纯化后获得了相对分子质量约为71×103的重组蛋白;Western-Blot检测显示其能与梅毒阳性患者血清发生特异性反应,而与梅毒阴性患者血清无交叉反应性。结论成功克隆、表达、纯化Tp47重组蛋白,其与临床各期梅毒患者血清具有较好的免疫反应性,为Tp47重组蛋白用于梅毒早期诊断提供了理论依据。     

Utilidad de los estudios serológicos en los centros de Atención Primaria para el diagnóstico precoz de la enfermedad de Lyme

Objective

The main aim of this study was to determine the usefulness of an early diagnosis of Lyme disease (LD) in Primary Health Care Centres (PHCC) using the ELISA test as serological screening technique.

CD44在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达及意义

目的：检测干细胞相关因子CD44在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法：选择人胃癌细胞株MKN45。在含有纤维生长因子-2及表皮生长因子无血清培养液中培养,观察球体形成情况;采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹分析法,检测干细胞相关基因CD44在球体细胞及原代贴壁细胞两组细胞中的表达差异。结果：胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中CD44的相对表达量高于原代贴壁细胞（P〈0．05）。结论：悬浮球培养法在胃癌细胞株MKN45中培养形成的球体细胞富集类肿瘤干细胞。该方法是分选和鉴定肿瘤干细胞的行之有效的方法。     

前列宁胶囊调控MMP-2影响细胞外基质对良性前列腺增生治疗的影响

目的:观察前列宁胶囊(QC)对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)介导的细胞外基质(ECM)的影响,探讨QC对BPH的治疗机制。方法:SD大鼠随机分为空白组,BPH模型组,QC低、中、高观察组,建立BPH模型,QC干预,ELISA法检测大鼠血清MMP-2、FN、Collagen IV、LN; BPH-1细胞培养,分别加入MMP-2和未加MMP-2刺激因子,QC干预,MTT法观察细胞活性,Q-PCR及Western-Blot分别检测MMP-2、FN、Collagen IV、LN基因及蛋白表达(未加MMP-2),加入MMP-2组检测FN、Collagen IV、LN。结果:QC各剂量组大鼠血清中的FN、LN、Collagen IV含量降低,MMP-2升高(P 0. 05 or P 0. 01);BPH-1细胞培养QC干预,加入及未加入MMP-2刺激因子细胞活力均有下降,以48 h后最明显;加入MMP-2刺激因子FN、Collagen IV、LN基因及蛋白表达明显低于未加MMP-2刺激因子,差异有统计学意义。结论:QC对BPH具有治疗作用,QC调控MMP-2介导细胞外基质FN、Collagen IV、LN基因和蛋白表达可能是其治疗BPH机制之一。     

细粒棘球蚴重组抗原B的表达提取及其血清学检测初探

用基因工程技术制备出的细粒棘球绦虫重组抗原B（rAgB）表达载体,经诱导表达、亲和层析纯化获得具生物活性的重组蛋白质rAgB,用Western-Blot法检测病人血清。结果显示rAgB敏感性为91．6％（44／48）,特异性为93．8％（30／32）,其中10例泡球蚴（AE）病人及10例肿瘤病人血清均无交叉反应。说明rAgB具有较高的敏感性及特异性,可用于包虫病的常规血清学诊断,rAgB在宿主菌JM109内稳定表达,因此可在实验室内大量制备用于血清学诊断的rAgB。     

Runx3基因甲基化与大肠癌发生和转移的关系

目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系。方法 采用蛋白印迹技术（Western-Blot）检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3mRNA的表达，同时用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果 30例大肠癌组织标本中Runx3基因的表达（6409．1042±298．2028）较肿瘤周围正常组织中表达明显下调（34565．3921±1108．2163），差异有统计学意义（P〈0．01）。正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化，30例大肠癌组织中有16例检测到Runx3基因启动子的甲基化，大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高（P〈0．05）。大肠癌标本中Runx3蛋白的表达与其病理临床特征密切相关，在低分化和有淋巴结转移大肠癌组织标本中Runx3蛋白的表达显著下调（P〈0．05）。结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一，并且与大肠癌的发生发展密切相关。     

Human Rickettsia felis infection, Canary Islands, Spain

We report the first cases of human infection by Rickettsia felis in the Canary Islands. Antibodies against R. felis were found in 5 adsorbed serum samples from 44 patients with clinically suspected rickettsiosis by Western blot serology. Fleas from 1 patient's dog were positive for R. felis by polymerase chain reaction.     

铝暴露对大鼠海马的影响及其机制研究

目的:通过观察铝暴露后大鼠记忆行为学、电生理长时程增强(LTP)、神经生化(ERK含量)变化,探讨铝物质对学习记忆的影响作用机制,并为中医理论"脑主神明"提供可靠的实验依据。方法:实施铝暴露:给大鼠自由饮用不同剂量AlCl3溶液。观察鼠Morris水迷宫行为学表现、细胞外微电极记录各组海马DG-CA3途径的LTP(长时程增强)、蛋白免疫印迹(Western-Blot)方法测定细胞外信号调节激酶(ERKs)活性。结果:对照组、低剂量组、高剂量组的行为学表现、LTP、Western-Blot ERKs表达比较有显著差异(P0.05)。结论:铝在体内蓄积可以影响大鼠的学习记忆,并为中医理论"脑主神明"提供实验依据。     

小细胞肺癌Nrf2与c-myc癌基因表达的相关性研究

目的：探讨小细胞肺癌c-myc癌基因的表达对Nrf2表达的影响,分析c-myc与Nrf2表达的相关性。方法：选用两株耐药性不同的肺小细胞癌肿瘤细胞株,小细胞肺癌药物敏感株H69及耐药株H69AR,Westem-B10t方法比较Nrf2,c-myc在两株细胞间的表达差异;H69细胞通过Lipofectamine2000脂质体转染过表达c-myc,Western-Blot方法检测过表达c-mvc前后Nrf2蛋白表达变化;H69AR细胞通过Lipofectamine2000脂质体转染c-mvcsiRNA,Westel33-B10t方法检测c-mycsiRNA前后Nrf2的蛋白表达变化。结果：与H69细胞相比,H69AR细胞株中c-myc及Nrf2高表达;H69细胞c-myC转染后,Nrf2表达上调;H69AR细胞c-mycsiRNA干扰后,Nrf2表达下调。结论：小细胞肺癌中Nrf2的表达与c-mvc表达呈正相关。     

CTHRC1基因在胃癌组织中的表达

目的:通过检测三螺旋重复胶原蛋白Ⅰ(CTHRC1)在胃癌组织中的表达水平,初步研究其在胃癌发生发展中的意义.方法:应用Western-Blot方法,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,分别检测胃癌组织及与其相对应的远癌正常胃组织中CTHRC1的相对表达水平.结果:33例胃癌组织中CTHRC1的相对表达量为0.315±0.234,与其对应的33例远癌正常胃组织中的CTHRC1的相对表达量为0.500±0.148,差异有统计学意义(t=6.482,P<0.01).结论:CTHRC1在胃癌组织中的表达显著降低,提示CTHRC1可能与胃癌的发生、发展有关.