人era的结构特点分析及其定点突变体的构建

目的：构建最近克隆的人era基因的定点突变体。方法：利用数据库对era的结构特点进行分析，在此基础上用改良的重叠延伸法分别构建人EraN端和C端的定点突变体。结果：获得了分别针对人EraN端TGP结合结构域（位于29－36氨基酸残基）和C端具有RNA结合活性的 KH结构域（位于297－340氨基酸残基）的定点突变体。结论:人era定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

大块骨组织体视学研究的图像采集与分析

大块骨组织由于不脱钙切片制作技术难度高,应用体视学对大块骨组织整体形态进行图像定量分析的研究资料较少。随着生物材料、人工金属植入材料在骨科临床的大量应用,如何获取高质量的大块骨组织整体图像,并应用体视学原理进行较为精确的图像分析变成了迫切需要解决的问题。目的:寻求大块骨组织实用和有效的数字图像采集方法,使之应用体视学原理进行较为精确的图像分析。材料与方法:普通玻片上的大组织标本、硬组织切片机切取的不脱钙塑料包埋大块骨组织标本及旋转切割机切取的含金属植入物的塑料包埋磨片标本。分别采用普通显微镜、大视野显微镜、自动显微镜及图像拼接软件采集,同时采用胶片扫描仪、台式背透扫描仪及高分辩数码相机进行采集比较。结果:上述各方法在一定程度均能满足大块骨组织图像采集及体视学分析需求,同时在标本适应性、视野规模、成像质量方面总结出各自优、缺点以及相应技术方法。     

全自动显微镜及图像分析系统处理免疫组化图像

目的 :探索全自动显微镜及图像分析系统处理免疫组化图像的新方法。方法 :利用全自动显微镜及图像分析系统采集肩袖撕裂患者肩峰下滑囊(SAB)及正常对照组白细胞介素6(IL-6)免疫组化染色切片图像,建立统一的图像采集、分割及处理标准,并对其分析,采用积分光密度评价阳性表达结果。传统的方法为手动显微镜及早期的图像分析处理软件,取其平均光密度,并对两种方法所测结果进行比较。结果 :新方法与传统方法均能够得出撕裂患者阳性表达数据,但新方法成像质量高,分析结果差异更为显著。结论: 新方法采集的图像质量较高,标准统一,误差较小,人为因素大为减少,结果更为准确,有更好的重复性和可比性。积分光密度与平均光密度相比将面积因素考虑在内,测量物质含量结果更为准确。     

人骨髓基质干细胞在不同诱导环境下向软骨细胞的分化

目的：探索重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导建系的人骨髓基质干细胞（hBMSC，专利名缩写为MSCxj）生成软骨的可行性、最佳剂量及适宜的诱导环境。方法：rhBMP-2分为六组：空白组、100ng／ml组、200ng／ml组、400ng／ml组、600ng／ml组和800ng／ml组。血清浓度分为三组：无血清组、2％血清组和5％血清组。根据rhBMP~和血清不同浓度间的组合，设计18种诱导模式。一部分Mscxj制成微球，模拟三维模式进行细胞爬片培养，另一部分MSCxj直接用96孔板培养，10d后，检测MSCxj的数量、总蛋白生成量和碱性磷酸酶生成量，并行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原mRNA检测，利用MPS60病理图像软件分析各组Ⅱ型胶原mRNA染色后的灰度，比较各组Ⅱ型胶原mRNA的生成量。结果：血清浓度越高细胞生成的数量越多，细胞合成的总蛋白无显著差异，rhBMP-2对细胞数量和总蛋白的合成无明显影响。2％的血清浓度比其他血清浓度更利于软骨生成。在该血清浓度下rhBMP-2为400ng／ml时，细胞特异性基质Ⅱ型胶原生成最多（F=19．56，P〈0．05）。结论：rhBMP-2能诱导Mscxi生成软骨，在血清浓度为2％、自身浓度为400ng／ml水平下诱导Mscxj生成软骨能力最强。     

"骨与关节十年"与中国

随着人类社会的发展和人口老龄化的进程,骨关节疾病已成为危害人类健康的严重疾患,其危害性日益受到世界各国的广泛关注.为了积极应对骨与关节疾病的严峻挑战、全面改善人类健康状况和提高生活质量,在联合国支持下建立了"骨与关节十年(Bone and Joint Decade 2000～2010,简称BJD)"国际性合作组织,得到世界上很多国家和地区的响应.2000年1月世界卫生组织(WHO)正式宣布实施"骨与关节十年"计划,2002年9月在巴西里约热内卢召开"骨与关节十年"国家协调员会议,回顾了BJD自发起以来所取得的成就并提出今后的工作重点.作者作为BJD中国协调员分别代表中国与亚洲在"骨与关节十年2000～2010全球宣言"上签字,大会还确定2003年"骨与关节十年"会议在中国北京召开.本文就"骨与关节十年"的缘起和发展,结合我国骨关节疾病的实际,从人口、医疗资源配置、骨关节疾病预防和监测、骨关节创伤、骨质疏松性骨折、类风湿性关节炎、腰痛等方面阐述了我国"骨与关节十年"的现状及发展;进一步大力推进我国"骨与关节十年"事业的发展必将对全面提高我国国民健康素质作出积极贡献.     

双相陶瓷生物活性骨的制备及其细胞相容性研究

[目的]制备一种双相陶瓷牛物活性骨,并了解其细胞相容性.[方法]分离培养兔骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),将浓度为1×106/ml目的第3代MSCs接种于复合有Ⅰ型胶原、骨形态发生蛋白(bone morphogenetk protein,BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)目的双相陶瓷生物骨(bniphask ceramic bioiogic bone,BCBB)上,联合培养,用倒置差显微镜、扫描电子显微镜观察,测定光密度(OD)值,了解双褶陶瓷牛物活性骨BCBB/BMP/bFGF目的细胞相容性.[结果]BCBB孔内充满Ⅰ型胶原、BMP及bFGF.MSCs在双相陶瓷生物活性骨BCBB/BMP/bFGF上黏附生长,第6 d时细胞在材料表面形成致密细胞层,增殖达稳定状态.[结论]该研究制备目的双相陶瓷生物活性骨BCBB/BMP/bFGF具有良好目的细胞相容性.     

改进螺钉设计提高骨质疏松条件下椎弓根螺钉稳定性的研究进展

椎弓根螺钉内固定系统是脊柱外科常用的后路内固定技术之一。骨质疏松患者由于椎体骨密度（bone mineraldensity,BMD）降低,骨小梁变薄,常导致螺钉松动甚至断裂。有研究表明：BMD与轴向拔出力呈正相关,BMD的降低会严重影响螺钉的稳定性。为了提高椎弓根螺钉在体内的稳定性,国内外学者在通过改进螺钉的设计提高螺钉的把持力方面做了大量的研究,笔者对近年来这方面的研究进展作一综述。     

转壁生物反应器中动态分化组织工程软骨的实验研究

目的 :在转壁生物反应器动态环境中分化骨髓间充质干细胞 (bMSC) ,制备立体组织工程软骨。方法 :穿刺吸取成年兔骨髓 ,分离扩增bMSC ,复合于纤维蛋白凝胶制成圆柱状三维组织 (细胞密度2 0× 10 7/ml) ,置于转壁生物反应器中进行分化培养 ,同时设单纯静止培养组。 5周后观测大体形态和组织学形态、Ⅰ和Ⅱ型胶原免疫组织化学表达 ,测量分化组织的细胞活力。结果 :动态培养可以有效保持材料大体形态 ,甲苯胺兰染色阳性 ,无明显Ⅰ型胶原表达 ,大量表达Ⅱ型胶原 ,人工组织的细胞活力显著高于单纯静止培养方法。结论 :转壁生物反应器培养明显改善组织工程软骨的活力 ,有利于进行三维材料体外软骨分化。     

腺病毒介导NT-3基因在雪旺细胞的表达

目的观察腺病毒介导的NT-3基因在培养雪旺细胞(Schwann cells, SCs)的表达.方法在293细胞中培养扩增NT-3重组腺病毒(adenovirus vector for NT-3,Ad-NT-3),用组织培养半数感染量法测定其滴度.然后用Ad-NT-3感染原代培养的SCs,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测NT-3基因的表达.结果 Ad-NT-3扩增后获得了较高滴度的病毒.SCs经NT-3重组腺病毒感染24 h后有NT-3 mRNA的转录.结论腺病毒介导的NT-3基因可转入培养的SCs并高效表达.