EGFP Kallikrein重组真核表达载体的构建及其在兔内皮祖细胞中的表达

目的：构建携带人组织激肽释放酶（tHK）基因，以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入内皮祖细胞(EPCs)中表达，验证tHK基因修饰EPCs用于血管病治疗的可行性。方法：PCR扩增tHK目的基因，将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP N3上，构建重组质粒载体。并利用脂质体转染体外培养的EPCs，在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察tHK EGFP融合蛋白在细胞中的表达；用RT PCR 方法验证tHK在mRNA水平的表达；用ELISA方法验证tHK蛋白水平的表达。结果：酶切和测序证实pEGFP Kallikrein重组质粒构建正确，重组质粒载体在EPCs 中获得了表达,表达的融合蛋白具有tHK 和EGFP 的双重活性。结论：通过基因克隆方法成功构建了pEGFP Kallikrein重组质粒载体，并且在EPCs 中稳定表达，为进一步研究tHK基因修饰EPCs双重治疗血管病的技术策略奠定了基础。     

减重手术的心血管保护效应:减点体重,少些心痛

肥胖显著增加心血管疾病的风险与负担,减重手术能有效、稳定地控制体重,改善代谢紊乱。同时多项临床研究表明减重手术可明显改善代谢综合征,减少动脉粥样硬化斑块与心肌梗死,缓解心力衰竭,减轻心血管炎症,最终减少心血管事件与病死率。现对减重手术对心血管系统的保护效应的研究进展做一综述。     

心脏骤停与复苏调查的现状及展望

心脏骤停是常见的严重临床事件，因其发病率高，生存率低，仍是我国当下面临的重要公共卫生问题之一。我 们亟需开展中国人群心脏骤停发病率、病死率及危险因素调查，基于我国心脏骤停的流行病学数据，早期识别心脏骤 停，尽早开始心肺复苏，可明显改善院内和院外心脏骤停患者的结局。文章对心脏骤停的定义、院内外心脏骤停的流 行病学现状、国内外差距及展望进行介绍。     

早期应用替罗非班对急诊冠脉介入术后心肌微循环再灌注的影响

目的:探讨早期应用替罗非班对直接经皮冠脉介入术(PCI)术后心肌微循环再灌注的影响。方法:初发ST段抬高急性心肌梗死(STEMI)拟行直接PCI术病人131例,A组(n=32,阿司匹林、氯吡格雷和替罗非班),B组(n=99,阿司匹林和氯吡格雷)。全部病人即刻嚼服阿司匹林300 mg,后100 mg·d~(-1);口服氯吡格雷300 mg,后75 nag·d~(-1)。A组再给予替罗非班注射液10μg·kg~(-1)负荷剂量,推注3 min,而后0．15μg·kg~(-1)·min~(-1)持续静脉滴注48 h。入选后即刻测定血小板聚集率、活化状态及心电图,24 h和72 h复查。结果:入选24 h后,A组血小板聚集率及活化状态较B组明显下降(P＜0．05),ST段完全回落率明显高于B组(P＜0．05)。与B组相比,A组梗死相关动脉(IRA)狭窄程度较轻[(69±s 11)％vs (87±8)％,P=0．03]。PCI术后心肌梗死溶栓试验(TIMI),血流3级A组高于B组(97％vs 82％, P=0．045),TIMI血流灌注分级(TMPG),3级A组高于B组(63％vs 42％,P=0．048)。治疗期间轻度血小板减少和出血A组高于B组(9％vs 1％,P=0．045)。随访30 d,2组死亡率无差异,但主要不良心脏事件(MACE)发生率A组低于B组(6％vs 27％,P=0．013),进一步分析A组严重心绞痛(6％vs 21％,P＜0．05)及靶血管再次血运重建术(6％vs 25％,P=0．021)较B组显著降低。结论:在阿司匹林和氯吡格雷基础上早期应用替罗非班,可进一步抑制血小板功能,减少STEMI再灌注后无再流或慢血流的发生,改善心肌微循环再灌注及病人预后。     

siRNA沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的研究siRNA干扰沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响 方法体外化学合成肝素酶特异性小干扰RNA（siRNA），用脂质体2000转染至T24膀胱移行细胞癌细胞内，常规分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和转染实验组进行实验，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况，反转录聚合酶链法（RT-PCR）检测肝素酶基因的表达，免疫细胞化学方法检测MMP 2的表达。结果RNA干扰沉默T24膀胱移行细胞癌细胞肝素酶基因后，T24细胞增殖活力下降，三个不同干扰组细胞活力分别下降了(28.55±3.66)%、(27.20±3.25)%和(37.29±4.82)%。肝素酶mRNA表达下降，膀胱移行细胞癌细胞中MMP-2（明胶酶A）的表达亦明显下降（P均＜0.05）。结论RNA干扰肝素酶基因后，细胞活力及肝素酶mRNA表达水平下降并且明显抑制膀胱癌细胞中MMP-2的表达。     

9-顺式维甲酸协同γ-干扰素诱导神经母细胞瘤分化、凋亡及生长抑制的实验研究

目的 观察9-顺式维甲酸（9-cis retinoic acid，9-cis RA）联合γ干扰素（gammm interferon，γ-IFN）在体外诱导神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）SK-N-SH细胞分化、凋亡过程中细胞形态、周期的变化，探讨其协同作用的效果及其机制。方法 将细胞分为A（对照组）、B（9-cisRA用药组）、C（γ-IFN用药组）和D（9-cisRA和γ-IFN联合用药组）4组，在处理后适当的时间分别观察细胞形态学变化，进行分化神经节细胞计数，用Hoechst-PI荧光染色法观察细胞的凋亡和死亡，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定NB细胞抑制率，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）检测细胞周期分布及其凋亡和死亡。结果 联合用药组细胞形态学分化明显，神经节细胞分化率显著高于其他各组（P〈0．01）；MTT法测定显示联合用药能显著提高NB细胞抑制率并明显优于单独用药；Hoechst-PI荧光染色及FCM钙依赖性磷脂结合蛋白V和碘化丙啶（annexin V／PI）染色法检测一致显示联合用药对于诱导NB细胞早期凋亡和坏死具有显著的协同作用；FCM细胞周期动力学分析发现联合用药组C0-G1期细胞比率增加，S期细胞比率减少。结论 9-cisRA联合γ-IFN在体外对NB细胞的分化、凋亡和生长抑制能产生明显的协同作用，为其联合应用于临床提供理论依据和指导。     

2006年美国心脏病协会心肌病的新定义与分型

心肌病是以心肌病变为表现的一组疾病。公众及医务工作者对于该病的认识长期以来一直为其定义及分型所困扰。该病的分型（既往已有许多）对于进一步理解该病是十分重要的；而且对该病应用精确的语言加以描述也是非常必要的。     

动脉硬化兔血管壁组织中LOX-1的表达

目的 研究动脉硬化兔血管壁组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的表达情况,探讨氟伐他汀干预对其表达的影响.方法 24只新西兰大白兔随机分为正常饮食组、高脂饮食组及高脂饮食加氟伐他汀干预组(n=8).应用RT-PCR法和免疫组化法分别检测各组动物胸主动脉血管壁组织中LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并进行统计学分析.结果 高脂饮食组及高脂饮食加氟伐他汀干预组兔胸主动脉血管壁组织中均有LOX-1 mRNA及蛋白表达,而正常饮食组无表达;高脂饮食加氟伐他汀干预组LOX-l mRNA及蛋白表达水平均明显低于高脂饮食组(P＜0.05).结论 动脉硬化兔胸主动脉血管壁组织中LOX-1表达明显升高,而氟伐他汀干预能够显著下调其表达水平.     

急性高血糖:心肌梗死时一个新的危险因素

无论是糖尿病患者还是非糖尿病患者,在急性心肌梗死发生时常伴有血糖的升高,血糖升高可以加重心肌的损害,也是增加心肌梗死发病率和死亡率的独立危险因素.因此,提高对急性心肌梗死时的高血糖产生原因,高血糖加重心肌梗死的机制及其防治的认识,具有重要的意义.本文就急性心肌梗死与应激性高血糖的关系以及强化胰岛素治疗的研究进展作一综述.     

局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠外周血内皮祖细胞数量的变化

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是成年干细胞的一种,存在于成人骨髓和外周血中,参与血管生成和修复损伤内皮细胞的过程[1],被证实参与脑梗死发生后缺血部位新血管的生成[2-3].因此利用EPCs治疗脑梗死成为可能,但目前缺乏其改变情况及调控机制的研究.