OPG在骨病临床研究中的应用

骨保护素(osteoprotegerin,OPG),又称破骨细胞生成抑制因子等,属于肿瘤坏死因子受体(tumornecrotic factor receptor,TNFR)超家族成员之一,自被发现以来,在骨病临床研究中得到了广泛的应用。1OPG的发现及命名1997年OPG分别被两家实验室同时发现,命名为破骨细胞生成抑制因子(ost     

试论椎间盘是奇恒之腑

《素问·五藏别论》日：“脑、髓、骨、脉、胆、女子胞，此六者，地气之所生也，皆藏于阴而象于地，故藏而不泻，名日奇恒之腑。”椎间盘位于脊柱上下椎体间，是一种纤维软骨复合体结构，包括髓核、纤维环和上下软骨终板，有缓冲震荡，同时传递应力之作用。古代医书并无对“椎间盘”单独论述。本文从椎间盘的结构、功能、发生学等方面试论述椎间盘与奇恒之腑的关系。     

化瘀补肾方对卵巢切除小鼠骨折愈合的作用

目的观察化瘀补肾方对卵巢切除小鼠骨折愈合的作用。方法 3月龄雌性C57BL/6小鼠48只分为假手术组、模型组和化瘀补肾方组各16只。模型组和化瘀补肾方组小鼠采用双侧卵巢切除术(OVX)建立骨质疏松症模型。术后12周,各组小鼠建立左侧胫骨中段骨折模型。术后给予化瘀补肾方组小鼠化瘀补肾方灌胃,给予假手术组与模型组小鼠等体积生理盐水灌胃,至骨折术后4周取材。检测各组小鼠血清雌二醇水平,采用Micro-CT检测小鼠第4腰椎及左侧胫骨的骨密度,检测左侧胫骨最大应力,对左侧胫骨石蜡切片进行阿尔辛蓝/橙黄G染色,观察骨组织形态学变化。结果 OVX后4周开始,模型组小鼠体重明显升高,并持续高于假手术组(P0.01)。骨折术后4周,模型组小鼠血清雌二醇和第四腰椎骨密度(BMD)明显低于假手术组(P0.01),化瘀补肾方组小鼠血清雌二醇水平和第四腰椎BMD高于模型组(P0.01)。Micro-CT三维重建显示,模型组左侧胫骨仍有明显的骨折线,骨痂生长不明显,化瘀补肾方组骨折线模糊,骨痂形成明显。与假手术组相比,模型组小鼠的BV/TV(P0.01)、Tb.Th(P0.05)和Tb.N(P0.01)均明显降低,Tb.Sp明显升高,化瘀补肾方组小鼠的BV/TV(P0.05)、Tb.Th(P0.05)相较于模型组则显著升高,但Tb.N、Tb.Sp差异无统计学意义。与假手术组比较,模型组小鼠胫骨的最大应力在骨折术后28 d时显著低于假手术组(P0.01),化瘀补肾方组小鼠胫骨的最大应力显著高于模型组(P0.01)。阿尔辛蓝/橙黄G染色显示,假手术组和化瘀补肾方组骨痂组织处于塑形期,可见明显骨小梁结构,而模型组骨痂组织内见大量脂肪组织,骨小梁稀疏。结论化瘀补肾方能有效促进去卵巢小鼠的骨折愈合,改善愈合骨组织的生物力学性能。     

不同剂量蛇床子素对OPG基因敲除小鼠和去卵巢骨质疏松大鼠作用疗效的比较研究

目的 观察不同剂量蛇床子素对OPG基因敲除小鼠和去卵巢骨质疏松大鼠的影响。方法 选择3种不同剂量的蛇床子素作用于OPG基因敲除小鼠和去卵巢骨质疏松大鼠,以双能X骨密度仪检测动物全身骨密度的变化;将动物腰椎做硬组织切片,并进行骨形态计量学分析其骨小梁的变化。结果 对于OPG基因敲除小鼠,蛇床子素能提高其全身BMD,以中剂量（10mg/（kg?d））组提高最为明显,低剂量（5mg/（kg?d））次之,而高剂量（15mg/（kg?d））组效果最差。蛇床子素能提高OPG基因敲除小鼠腰椎骨小梁体积分数,增加骨小梁数目,增加骨小梁厚度,降低骨小梁分离度,其中以5mg/(kg?d)组作用最明显,其次为10mg/(kg?d)组,而15mg/(kg?d)组则效果最差;对于去卵巢骨质疏松大鼠,不同剂量的蛇床子素均能显著提高大鼠全身BMD,其中以中剂量（100mg/（kg?d））组为最佳。蛇床子素能显著提高大鼠腰椎骨小梁体积分数,以100mg/（kg?d）组最明显。显著增加大鼠腰椎骨小梁数目,以75mg/（kg?d）组最明显。蛇床子素100mg/（kg?d）组能增加大鼠腰椎骨小梁厚度。不同剂量的蛇床子素均能显著降低大鼠腰椎骨小梁分离度,其中以75mg/（kg?d）组和100mg/（kg?d）组最明显。结论 蛇床子素能促进骨形成,抑制骨吸收,从而起到抗骨质疏松的作用,其疗效与给药剂量密切相关。     

益气化瘀补肾通络中药联合抑制剂对椎间盘软骨细胞增殖率的影响

目的:观察益气、化瘀、补肾、通络中药以及联合使用抑制剂Genistein、Calyculin A、Na3Vo4干预后,对自然退变软骨细胞增殖率变化的影响。方法:建立大鼠颈椎间盘软骨细胞自然退变模型,使用益气、化瘀、补肾、通络中药血清,并进一步分别加入上述抑制剂干预后,MTT测定软骨细胞增殖率变化。结果:益气化瘀方含药血清直接作用48h后,可明显促进退变软骨细胞增殖,较模型组有显著差异(P<0.01);其它组对退变软骨细胞增殖率无明显影响;化瘀方则可抑制细胞增殖,较模型组有显著差异(P<0.05)。抑制剂作用7d后,继以含药血清作用48h,益气化瘀方血清均可明显促进退变软骨细胞增殖;益气方血清在Genistein加入组可促进退变软骨细胞增殖;化瘀方、补肾方、通络方在抑制剂加入组对退变软骨细胞增殖无明显影响(P>0.05)。析因分析结果表明,益气方与化瘀方有交互作用,在软骨细胞增殖率的调节方面,存在协同作用。结论:益气化瘀方可以促进体外自然退变椎间盘软骨终板软骨细胞增殖,有效拮抗抑制剂对软骨细胞的抑制作用;益气与化瘀二法的有机结合,才能更好发挥促进软骨细胞增殖的效应。单用补肾、通络中药难发挥促软骨细胞增殖及有效拮抗抑制剂的作用。     

嗅鞘细胞的原代培养

目的：探讨大鼠嗅鞘细（olfactory ensheathing cells，OECs）培养纯化方法并对其形态学进行研究。方法：取材后采用差速贴壁法和NGFRp75免疫吸附法相结合的纯化培养方法培养嗅鞘细胞，并分不同阶段进行观察和NGFRp75免疫组化染色鉴定。结果：成功培养出高纯度的嗅鞘细胞，胞体呈梭形、多突起形及油煎蛋形三种类型，突起细长编织成网状为其特点。结论：用差速贴壁法和NGFRp75免疫吸附法相结合的纯化培养方法得到的嗅鞘细胞纯度达95％以上，证实是一种简单经济而又有实效的嗅鞘细胞培养方法。     

兔风寒湿痹证型颈椎病模型的建立

目的：模拟自然界不同强度风寒湿刺激，建立中医风寒湿痹证型颈椎病动物模型。 方法：选择24只8月龄雄性新西兰白兔，随机分为正常对照组以及轻、中和重度刺激组。基本刺激条件是6级风力（10．8～13．8m／s），（5±0．5）℃，100％湿度，按轻、中、重度刺激组的不同要求，分别给予32、64和128h的间断重复刺激，每日刺激4h。HE染色，光学显微镜下观察椎间盘组织形态改变，放射免疫法检测前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）、6-酮-前列腺素F1α（6-ketone—prostaglandin F1α，6-K—PGF1α）和血栓素B2（thromboxane B2，TXB2）含量，免疫组织化学ABC法检测Fas和Bcl-2表达情况，逆转录-聚合酶链反应法检测白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF—α）和转化生长因子β（transforming growth factor β，TGF—β）mRNA表达情况。 结果：轻、中度刺激组椎间盘髓核收缩，重度刺激组纤维疏松断裂，软骨终板增厚。与正常对照组比较，轻度刺激组椎间盘组织PGE2有所升高，中度和重度刺激组PGE2、6-K—PGF1α和TXB2升高，IL-1β、TNF—α mRNA和Fas表达明显增加，TGF—βmRNA和Bcl-2表达明显降低。重度刺激组Fas表达进一步增加，Bcl-2表达进一步降低。 结论：中、重度风寒湿刺激可以导致家兔颈椎间盘明显退变，可用于建立风寒湿痹证型颈椎病动物模型。     

中医学说学派的研究与探讨

对近年来中医学说学派研究领域的期刊文献进行分析，从医家学说的起源与形成、汉代张仲景学说、晋隋唐宋医家、金元医家、明清医家、近代医家等方面进行了归纳，并讨论了研究的现状和发展的思路。     

益气化瘀方及其拆方对大鼠椎间盘纤维环细胞凋亡相关因子的作用

目的:研究益气化瘀方及其拆方药理血清对大鼠诱导凋亡椎间盘纤维环细胞bcl-2、Bax及半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8)表达的影响.方法:用细胞免疫化学和积分光密度分析等方法比较分析益气化瘀方及其拆方益气方、化瘀方药理血清,以及胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1, IGF-1)对抗-Fas抗体(anti-Fas antibody)诱导凋亡大鼠椎间盘纤维环细胞bcl-2、Bax及caspase-8表达的影响.结果:益气化瘀方、益气方、化瘀方及IGF-1血清处理组与凋亡模型组相比,bcl-2表达升高,Bax及caspase-8表达降低,均有统计学意义(P<0.01);益气化瘀方组与益气方、化瘀方组比较,Bax表达明显降低,有统计学意义(P<0.05).结论:益气化瘀方及其拆方可以调控大鼠椎间盘纤维环细胞内Bax、bcl-2和caspase-8表达,其延缓椎间盘退变的机制可能与调控细胞的凋亡相关因子有关.