大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中Notch信号与RhoA/Rho激酶信号的协同作用

目的 探讨Notch信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中与RhoA/Rho激酶信号的协同作用.方法 实验分为无血清培养基对照组和盐酸法舒地尔组.采用盐酸法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经细胞.RT-PCR检测Hes1的表达变化;免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经微丝蛋白亚单位(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化.结果 ①盐酸法舒地尔组MSCs的Hes1 mRNA转录下降(P<0.05).②盐酸法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化,NSE、NF-M的阳性表达率显著高于无血清培养基组(P<0.05).结论 盐酸法舒地尔在诱导大鼠MSCs向神经细胞分化过程中,可能存在Notch信号通路与RhoA/Rho激酶通路信号的协同作用,共同促进MSCs向神经细胞分化. Abstract： Objective To investigate the cross-talk between notch and Rho/Rho GTPase signaling on rat bone marrow mesenchymal stem cells differentiating into neurons. Methods The experiments were divided into serum-free medium control group and fasudil hydrochloride group. Fasudil hydrochloride induces MSCs differentiating into neurons. The expression of Hes1 mRNA was detected by RT-PCR. The expression of neuron-specific enolae(NSE), neurofilament M (NF-M) and glial fibrillary acidic protein (GFAP)was detected by immunocytochemical method. Results ①The Hes1 mRNA expressed by MSCs of fasudil hydrochloride group was significantly decreased(P<0.05).②Fasudil hydrochloride can induce MSCs differentiating into neurons and there was higher expression of neuron-specific enolae(NSE) and neurofilament-M (NF-M) than the serum-free medium control group(P<0.05).Conclusions There may be cross-talk between notch signaling and RhoA/Rho GTPase signaling on differentiation of rat bone marrow stromal cell into neurons induced by fasudil hydrochloride and they jointly promoted the differentiation of MSCs into neurons.     

核因子-κB在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的作用

目的探讨核因子-κB信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经元分化中的作用。方法实验分为无血清培养基对照组、盐酸法舒地尔组。采用盐酸法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经元。免疫细胞化学法检测神经元烯醇化酶（NSE）、神经微管结合蛋白（MAP-2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化及核因子-κB亚基p65核移位情况。结果①盐酸法舒地尔可以诱导MSCs向神经元分化,NSE、MAP-2的表达率高,但对照组无类似情况（P〈0．05）。②盐酸法舒地尔组MSCs的p65核移位明显受抑制,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论盐酸法舒地尔可以抑制核因子-κB活化,可能有利于MSCs向神经细胞分化。     

P2Y1受体介导Aβ25-35所致大鼠星形胶质细胞活化

目的: 观察嘌呤受体P2Y₁在Aβ_25-35所致的大鼠星形胶质细胞活化中所起的作用。方法: 体外分离培养大鼠星形胶质细胞,按空白对照、Aβ_25-35和P2Y₁受体阻断剂MRS2179+Aβ_25-35和MRS2179分组干预后,通过免疫细胞化学、免疫荧光法和Western blotting方法观察GFAP和P2Y₁表达的变化。结果: 各组细胞数量无明显变化。与对照组相比,Aβ_25-35组GFAP荧光强度明显增加;MRS2179+Aβ_25-35和MRS2179组均降低,两组间无明显差异。Western blotting显示GFAP在各组间表达与免疫荧光法有相似趋势;与对照组相比,P2Y₁表达在Aβ_25-35组明显增多(P＜0.05)和MRS2179+Aβ_25-35和MRS2179组无明显变化(P＞0.05)。结论: Aβ_25-35通过P2Y₁受体活化激活星形胶质细胞。     

麝香提取物对大鼠皮层神经细胞炎性损伤的保护作用

目的研究麝香提取物(musk extract,ME)对脂多糖(LPS)诱导大鼠大脑皮层神经细胞炎性损伤的保护作用及其可能机制。方法分别培养新生大鼠大脑皮层神经细胞和星形胶质细胞(AC),使用终浓度为10mg/LLPS及ME18mg/L、36mg/L、72mg/L、144mg/L的分别作用于纯化的星形胶质细胞24h,收集条件培养液(ACM)。在神经细胞培养体系中分别加入ACM,采用MTT法及AO/EB染色法测定神经细胞存活率和凋亡率;ELISA法检测ACM中所含炎症因子的变化。结果 ME18mg/L、36mg/L、72mg/L及144mg/L组的神经细胞存活率(%)分别为52.55±3.52、55.77±2.36、64.89±3.45及73.67±1.80,较模型组(43.62±4.51)均显著提高(P0.05);细胞凋亡率(%)分别为68.11±2.16、44.27±3.68、32.56±2.14及21.89±2.46,与模型组(71.33±3.25)比较,均显著下降(P0.05,P0.01);ME组ACM中IL-6呈指数降低,且均呈剂量依赖性。结论麝香提取物对脂多糖所致神经细胞炎性损伤具有显著的保护作用,以144mg/L浓度最佳,其可能通过减少星形胶质细胞分泌IL-6起作用。     

盐酸法舒地尔对体外培养大鼠神经干细胞分化的影响

目的观察盐酸法舒地尔对体外培养神经干细胞（NSCs）分化的影响。方法体外分离培养NSCs,通过不同浓度的盐酸法舒地尔干预后,采用免疫细胞化学及流式细胞技术检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果分离培养的NSCs具有自我复制、增殖能力,可以表达Nestin;诱导分化后的细胞可以表达NSE和GFAP。免疫细胞化学染色提示,盐酸法舒地尔干预组NSE阳性细胞显著高于对照组（P〈0．05）,但是不同浓度盐酸法舒地尔之间元统计学差异（P〉0．05）。流式细胞仪检测结果显示,盐酸法舒地尔干预组NSE阳性细胞比例明显增加,与对照组相比有统计学差异（P〈0．05）。结论盐酸法舒地尔可以促进NSCs向神经细胞方向分化。     

天麻素对海人酸干预的大鼠神经干细胞分化的影响

目的:研究天麻索对海人酸干预的神经干细胞分化的影响及其机制.方法:体外分离并培养新生Wistar大鼠神经千细胞,通过免疫组织化学法和免疫荧光法进行鉴定.将神经干细胞分为3组:第1组不加药为空白对照组,第2组加入不同浓度梯度的海人酸,第3组加入天麻素和不同浓度梯度海人酸.计算分化后神经元和胶质细胞比例.结果:培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能,是神经干细胞.海人酸可以有效诱导神经十细胞向胶质细胞分化,天麻素可在一定程度上阻断海人酸的作用,诱导神经干细胞向神经元分化.结论:天麻素可减少海人酸兴奋性的影响,诱导神经干细胞向神经元分化.     

EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡中的表达及天麻素的影响

目的： 探讨EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中的表达变化,及天麻素对EphA4表达的影响。方法：提取新生大鼠大脑皮层神经元体外培养,7 d后随机分为对照组、海人酸模型组、海人酸+天麻素干预组;采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,Hoechst 33258荧光染色、AO/EB荧光染色、LDH活性测定检测神经元凋亡和坏死情况,CY3荧光染色检测EphA4表达变化。结果：海人酸模型组较对照组神经元凋亡率显著升高（P<0.01）,EphA4表达显著增高（P<0.01）;海人酸+天麻素干预组较海人酸模型组神经元凋亡率显著下降,EphA4表达上调显著受抑。结论：海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中EphA4表达增高,天麻素在这一过程中抑制EphA4表达,对神经元具有一定保护作用。     

Notch信号在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中的作用

目的 探讨Notch1信号通路在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经细胞分化中的作用。方法 实验分为未转染组、转染组（转染Rn-Notch1-siRNA）、阳性对照组（转染Rn-MAPK-1 Control siRNA）及阴性对照组（转染Negative Control siRNA）等4组。采用盐酸法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经细胞。倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况;RT-PCR检测Notch1、Hes1和MAPK1 mRNA的表达变化;免疫细胞化学法检测Notch1、神经元巢蛋白（Nestin） 、神经微丝蛋白亚单位(NF-M) 和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化;MTT方法检测细胞存活率。结果 1. siRNA转染72h,MSCs荧光表达最强, 转染率可达91.3%±4.2%;同时,转染组MSCs的Notch1和Hes1 mRNA转录下降（P<0.05）;MTT提示转染组细胞存活率也显著减少（P<0.05）。2. 盐酸法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化,其中以转染组诱导效果最佳,Nestin、NF-M的表达率显著的高于其它各组（P<0.05）。结论 盐酸法舒地尔在诱导大鼠MSCs向神经细胞分化过程中,可能存在Notch信号通路与RhoA/Rho激酶通路信号的协同作用,共同促进MSCs向神经细胞分化。     

DSCAM在大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的表达变化

目的：研究唐氏综合征细胞粘附分子（DSCAM）在大鼠骨髓间质干细胞（MSCs）分化为神经细胞中的作用。方法：在建立黄芩苷诱导大鼠MSCs分化为神经细胞的基础上,采用免疫细胞化学法、Western blot法等检测DSCAM的表达变化;同时采用RNA干扰技术,观察DSCAM-siRNA转染MSCs后诱导分化情况。结果：诱导前大鼠MSCs不表达DSCAM;预诱导液诱导24 h,MSCs开始少量表达DSCAM（1.71±0.67）%;黄芩甙诱导 6 h,部分表达DSCAM（15.79±4.24）%;诱导后3 d,DSCAM表达最高（53.16±5.94）%;诱导后 6 d,DSCAM表达明显下降（28.99±6.72）%。DSCAM-siRNA转染MSCs,DSCAM表达显著下降。而且,诱导前MSCs不表达神经细胞特异性标记蛋白β-III-tubulin;诱导6 h,β-III-tubulin表达为（1.40±0.79）%,诱导3 d达到（41.59±3.17）%,诱导 6 d 为（59.11±4.76）%。但是, DSCAM-siRNA转染MSCs,诱导3 d,6 d,β-III-tubulin蛋白的表达显著下降,分别为（28.57±2.91）%和（43.90±12.31）%。结论：DSCAM可能在MSCs分化为神经细胞中起到重要的作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（6）：486-489］     

天麻素对海人酸致大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨天麻素对海人酸致大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用及可能机制.方法 提取新生大鼠大脑皮质神经元体外培养,7d后随机分为对照组、海人酸模型组、不同浓度天麻素干预组(12.5、25、50mg/L);采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,AO/EB荧光染色检测神经元凋亡,LDH活性测定检测胞膜稳定性,CY3荧光染色检测EphA4表达变化.结果 与海人酸模型组相比,各天麻素干预组神经元凋亡率、LDH活性显著下降(P<0.01),EphA4表达上调显著受抑(P<0.01),以25mg/L天麻素效果最明显.结论 天麻素对海人酸诱导大鼠大脑皮质神经元损伤具有保护作用,以中浓度效果最佳,可能与抗凋亡、稳定细胞膜、抑制细胞活化蛋白EphA4的表达上调等因素相关.