天舒胶囊对电刺激硬脑膜诱导偏头痛模型大鼠神经递质的影响

目的 研究天舒胶囊对电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜诱导偏头痛模型的影响,并探讨其作用机制。方法 雄性SD大鼠,脑部电极植入术后,ig给予天舒胶囊(1.08、0.36、0.18 g/kg),阳性药对照组ig琥珀酸舒马普坦片(9.72 mg/kg),除对照及假手术组外,行电压10 V、频率3 Hz、脉宽0.25 ms、时间1 h电刺激,对照组不予手术,并于刺激0、30、60 min进行眼眶采血,采血后取脑组织。采用放射免疫法检测血浆和脑组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质和去甲肾上腺素(NE)水平。结果 假手术组与对照组比较大鼠脑组织中CGRP、P物质和NE水平均无显著性差异;与假手术组相比,模型组大鼠脑组织中CGRP明显升高、P物质和NE水平明显降低(P<0.05),提示模型成功。与模型组相比,天舒胶囊可以显著提高大鼠血浆和脑中NE水平(P<0.05),降低CGRP水平(P<0.05),阳性药舒马普坦可以明显降低血浆中CGRP水平(P<0.05)。结论 天舒胶囊对电刺激上矢状窦区硬脑膜大鼠脑部损伤具有显著改善作用,其作用机制之一为调节神经递质释放。     

毒蕈胆碱M_1受体激动剂的高通量筛选模型

目的　建立毒蕈碱样胆碱M1 受体激动剂的高通量筛选模型 ,以此模型进行M1 受体激动剂筛选。方法　将M1 受体基因质粒 (M1 /pCDNA3 1 )与报告基因质粒 (3×CRE/ 3×MRE/SRE LUC)按 1∶5的比例共转染HEK2 93 ,建立了一个稳定的M1 受体激动剂报告基因筛选细胞株。配体与细胞表面M1 受体结合后 ,激活相应的信号通路 ,调节报告基因的表达 ,通过测定荧光酶素报告基因表达水平的变化 ,评估配体激活M1 受体的生物活性。结果　通过对筛选条件 ,如细胞数目、荧光素酶表达时间、底物浓度的优化 ,建立了可靠的筛选方法 ,并对多种抗衰老中药水提物进行了筛选 ,找到 3种对M1 受体有活性的中药。结论　该系统能准确、稳定、有效地应用于M1 受体激动剂的高通量筛选     

银杏内酯K调节缺氧诱导因子-1α通路抑制氧糖剥离再灌注诱导的神经血管单元损伤

目的确定银杏内酯K(ginkgolide K,GK)对缺血性脑卒中诱导的神经血管单元损伤的保护作用及调节缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)通路机制。方法采用小鼠小胶质细胞BV-2及人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926氧糖剥离再灌注(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)模型模拟脑缺血引起的神经血管单元损伤。细胞OGD 4 h后再灌注并给予GK干预。给药24 h时检测BV-2细胞上清中炎症因子水平及EA.hy926细胞损伤情况;Western blot检测BV-2细胞给药1 h后p-Akt、p-Erk和6 h后HIF-1α水平,并应用LY294002验证,同时检测EA.hy926细胞给药1 h后p-Akt及6 h后HIF-1α等蛋白变化。结果GK明显抑制BV-2细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β分泌,激活p-Akt、抑制p-Erk并下调HIF-1α,且LY294002共同干预后,GK调节作用下降;同时,增加EA.hy926细胞活力和抑制LDH释放,上调p-Akt、HIF-1α、HO-1、VEGF并下调cleaved caspase-3/9水平。结论GK可多效应减少缺血性脑卒中诱导的神经血管单元损伤,其机制可能与针对不同细胞HIF-1α调节作用不同有关。     

银杏二萜内酯葡胺注射液通过下调calpain信号通路抑制脑缺血神经细胞凋亡

研究银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection,DGMI)对缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用及其机制。采用试剂盒、Fluo-3 AM法、Western blot检测SH-SY5Y细胞氧糖剥离损伤4 h后,与药物一起复氧1 h细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量、胞浆游离钙离子浓度以及calpain、cleaved caspase-12蛋白量的变化。结果显示DGMI能极显著降低OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞LDH的漏出量,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,下调细胞内游离钙离子浓度、calpain和cleaved caspase-12蛋白量,抑制calpain凋亡信号通路保护神经细胞。DGMI对OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内Ca²⁺/calpain/caspase-12/capase-3信号通路有关。     

连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察

目的：建立连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用。方法：CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放,超氧化歧化酶活性（SOD）,丙二醛含量（MDA）,荧光探针负载法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）荧光强度。结果：连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性。与模型组比较,提取物组细胞的LDH 释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca²⁺]i荧光强度均减弱。结论：泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用。     

G-蛋白偶联受体的功能测定和高通量药物筛选

G 蛋白偶联受体家族是药物开发中最大的一类药物靶点 ,高通量药物筛选是开发药物早期阶段的最重要工具之一。根据G 蛋白偶联受体与配体结合及激发的信号通路 ,人们设计了各种可行的功能测试方法 ,用于G 蛋白偶联受体为药靶的高通量药物筛选 ,如 :微体积荧光数字图像测定技术 (Fluorometicmicrovolumeassaytechnology ,FMAT)、荧光偏振 (Fluoresencepolarization ,FP)、竞争性ELISA (Com petitiveenzyme linkedimmunosorbent)、闪烁邻近测定法(Scintillation proximityassay ,SPA)、载黑色素细胞测定法(Melanophoreassay)、报告基因测定法 (Reportergeneassay)和钙离子测定法等测定方法。在这些方法中 ,报告基因测定法和钙离子测定法占了主导地位。非放射性、无需底物和辅助剂的报告基因测定方法和荧光钙离子指示剂的钙离子测定方法可能是将来G 蛋白偶联受体的功能分析和高通量药物筛选的发展方向     

羌活化学成分研究

目的对羌活Notopterygium incisum的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、HPLC以及Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,并结合现代波谱学技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从羌活的70%乙醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为7-羟基香豆素(1)、5,7-二甲氧基香豆素(2)、紫花前胡内酯(3)、佛手酚(4)、佛手柑内酯(5)、异虎耳草素(6)、比克白芷内酯(7)、(+)-顺式凯林内酯(8)、(-)-反式凯林内酯(9)、茴香酸对羟基苯乙酯(10)、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯(11)、阿魏酸(12)、异欧前胡素(13)和异补骨脂素(14)。结论化合物2、7~9和11为首次从羌活属植物中分离得到。     

不同组方加味藿香正气软胶囊对脂多糖诱导小鼠原代骨髓巨噬细胞炎症相关因子表达的影响

本研究考察不同组方加味藿香正气软胶囊对脂多糖诱导小鼠原代骨髓巨噬细胞炎症相关因子表达的影响。采用原代小鼠骨髓单核细胞用M-CSF诱导成骨髓巨噬细胞,经鉴定后,用脂多糖（LPS）诱导其产生各种炎症因子（TNF-a、IL-6、IL-12p40,NO）,加入不同组方的加味藿香正气软胶囊,收集上清检测各种炎症因子含量。结果显示,原代小鼠骨髓细胞单核细胞经诱导成成熟巨噬细胞,LPS（1μg?mL^-1）能刺激其产生炎症因子,不同组方加味藿香正气软胶囊均能一定程度降低LPS诱导的炎症因子的释放,尤其是苍术代替白术后效果更明显。不同组方藿香正气软胶囊均可降低LPS刺激的炎症因子的产生,减轻其炎症反应,可能是加味藿香正气软胶囊治疗肠道炎症的重要机制之一。     

神经介素NMU2R受体激动剂的高通量筛选模型研究

 目的 建立神经介素Neuromedin U 2 Receptor（NMU2R）激动剂的高通量筛选模型，从中药中筛选NMU2R受体激动剂。方法 将人NMU2R受体基因质粒（hNMU2R/pCDNA3.1）与报告基因质粒（MRE/CRE/LUC）按1∶5的比例共转染到HEK293细胞，通过G418筛选，建立稳定的hNMU2R受体激动剂筛选细胞株。利用CRE的激活剂Forskolin和NMU2R内源激动剂Neuromedin U探索和优化荧光素酶表达时间、每孔细胞数目、荧光素酶底物浓度等筛选条件，建立可靠的筛选方法，并对部分中药水提液进行筛选。结果 已建立了一个稳定的hNMU2R受体激动剂筛选细胞株和可靠的筛选方法，其Z′-因子为0.75，荧光素酶表达时间为6～8 h，细胞密度为每孔4×10⁴～8×10⁴个。结论 该系统能够有效地应用于NMU2R受体激动剂的高通量筛选，能从中药中筛选出NMU2R受体的激动剂。     

近30年来中药羌活化学成分研究进展

该文综述了近30年来中药羌活的化学成分研究进展,中药羌活的化学成分主要为香豆素类、聚烯炔类、倍半萜类、酚酸类,另外还有甾体、黄酮等,但报道较少。该文对从中药羌活中报道的每个化合物,都利用SciFinder进行了确认和校正,列出了每个化合物的中文名、英文名和CAS号,以便于为今后中药羌活的研究和开发利用提供参考。羌活中是否有哥伦比亚苷有待于进一步确证。