应激损伤糖尿病细胞模型的建立及不同浓度逍遥散含药血清对其生存率的影响

目的以大鼠胰岛β细胞瘤细胞(RIN-m5f细胞)为研究对象建立应激损伤糖尿病细胞模型,并探索不同浓度逍遥散含药血清对其生存率的影响。方法将RIN-m5f细胞用不同浓度葡萄糖(11mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、400mmol/L)分别培养5h、12h、24h、48h,建立高糖损伤状态细胞模型,再利用各个浓度的皮质酮(CORT)(64μmol/L、320μmol/L、1600μmol/L)干预,诱导应激损伤糖尿病细胞模型。造模完成后,用含10%、20%、30%、60%的逍遥散含药血清培养细胞,检测各组的细胞生存率。结果随着葡萄糖浓度的增加、培养时间的延长和皮质酮浓度升高,细胞存活率呈下降趋势。当含50mmol/L葡萄糖培养基培养12h后,INS分泌值较其他各浓度组是最高的,而细胞生存率较正常组稍有下降。当皮质酮浓度为320μmol/L时,细胞存活率约为60%。逍遥散血清组细胞活性普遍高于空白血清组,且当含血清比例为30%时,前者与后者细胞活性差值最大,血清比例高于30%以后,两组细胞活性均增长滞缓,进入平台期。结论含50mmol/L葡萄糖培养基培养12h的RIN-m5f细胞建立了高糖损伤状态的细胞模型;在高糖基础上,添加320μmol/L皮质酮能诱导出应激损伤状态糖尿病细胞模型;逍遥散含药血清能提高应激损伤状态糖尿病细胞的活性。     

基于中医四诊和脑肠肽的腹泻型肠易激综合征中医证候判别研究

目的从计量诊断学的角度研究腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D),构建IBS-D中医证候的判别函数,以降低IBS-D中医证候诊断和鉴别诊断中的主观因素干扰。方法采用《肠易激综合征临床信息采集表》对439例IBS-D患者进行中医临床流行病学调查,运用聚类分析获取初始证候,以四诊信息和患者血清脑肠肽为变量,运用逐步判别法进行分析。结果聚类为肝郁脾虚证、脾胃虚弱证、肝郁气滞证、脾肾阳虚证、脾胃湿热证和寒湿困脾证,其中肝郁脾虚证最多,有效百分比为34.2%,寒湿困脾证最少,有效百分比为5.5%;逐步法所得肝郁脾虚证、脾胃虚弱证、肝郁气滞证、脾肾阳虚证及脾胃湿热证5个判别函数,回顾性误判概率4.1%(16/390),交叉验证误判率为15.4%(60/390)。结论建立的判别函数,对ISB-D的中医证候的客观诊断及鉴别诊断有一定的参考价值。     

逍遥散影响慢性应激T2DM大鼠糖脂代谢机制的初步研究

目的研究比较慢性应激对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)和糖脂代谢相关指标的影响及逍遥散的干预作用。方法以高糖高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM大鼠为研究对象,建立慢性心理应激动物模型。将成模的T2DM大鼠随机分为模型对照组、逍遥散组、应激对照组、应激加逍遥散组等4组。观察比较各组大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)的水平。结果与模型对照组相比较,应激对照组的体重和ISI下降(P﹤0.01),BG及Hb A1c升高(P﹤0.01),逍遥散组大鼠BG降低(P﹤0.01),血脂水平降低(P﹤0.01,P﹤0.05),与应激对照组相比较:应激加逍遥散组体重增加(P﹤0.05),BG降低(P﹤0.05),Hb A1c与ISI均显著降低(P﹤0.01),TC、TG降低(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论慢性应激能显著加剧T2DM大鼠IR和糖脂代谢紊乱;逍遥散能影响慢性应激大鼠的糖脂代谢,其机制可能与提高慢性应激T2DM大鼠的胰岛素敏感性有关。     

21位国医大师治疗慢性泄泻的经验撷菁

目的:整理和总结21位国医大师治疗慢性泄泻的经验,以提高理论水平和临床疗效。方法:建立医案和经验方数据库,运用Excel 2007进行分析。结果:获得证候、治法、方剂的构成比和前54味药物的使用频次、性味归经。结论:国医大师治疗慢性泄泻经验丰富,疗效显著,对临床有指导意义,值得继承发扬。     

逍遥散对应激损伤大鼠糖皮质激素受体(GR)的调控

目的用逍遥散和GR-受体阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其海马区糖皮质激素受体(GR)亚型表达情况。方法以逍遥散(5.265 g.kg-1)和糖皮质激素受体(GR)受体阻滞剂RU-38486(12.5 g.kg-1)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给予实验药物,3周后停止刺激,于第22天处死大鼠取材。采用荧光免疫组织化学法,测定各组大鼠海马区GR表达。结果 GR受体阻滞剂RU-38486与中药复方逍遥散可显著上调慢性应激损伤大鼠海马区GR阳性表达。结论逍遥散可以通过促进慢性应激损伤大鼠海马区NR表达上调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠HPA轴负反馈功能的作用,起到缓减诸应激症状的疗效。     

逍遥散对慢性应激损伤大鼠NR受体亚型表达的影响

目的:本研究用逍遥散和糖皮质激素受体(GR)阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其海马区NR受体亚型表达情况。方法:以逍遥散(5.265g/kg)和GR受体阻滞剂RU-38486(12.5g/kg)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给予实验药物,3周后停止刺激,于第22天处死大鼠取材。采用荧光免疫组织化学法,测定各组大鼠海马区NR表达。结果:GR受体阻滞剂RU-38486与中药复方逍遥散可显著下调慢性应激损伤大鼠海马区NR阳性表达。结论:逍遥散可以通过促进慢性应激损伤大鼠海马区NR表达下调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺(HPA)轴负反馈功能的作用,起到缓解诸应激症状的疗效。     

肝肾“藏泄互用”内涵发微

肝肾藏泄互用关系通常指肝主疏泄与肾主藏精对人体生殖功能的协同调控作用。认为成体干细胞是先天之精的物质基础;对于肝藏象理论的深入研究证实,中医学中肝藏象的功能与以＂下丘脑—垂体＂为核心的＂神经—内分泌—免疫＂网络密切相关。肝肾藏泄互用的关系不仅体现在维持人体正常生殖功能方面,更广泛的生理意义体现在维持人体正常的生长发育及机体疾病或损伤后的修复过程。     

逍遥散对慢性心理应激大鼠空间学习记忆能力的影响

目的研究慢性心理应激对学习记忆功能的损害及逍遥散的保护作用.方法 Wistar大鼠随机分为空白对照组、病理对照1组、病理对照2组、治疗1组、治疗2组,每组10只.采用慢性多相性应激模型,以Morris水迷宫对大鼠空间学习记忆能力进行测试.结果各组大鼠的平均潜伏期无明显差异;空间觅向时间:与正常对照组相比,病理对照1组及病理对照2组大鼠明显减小(P<0.01);而治疗1组及治疗2组大鼠的空间觅向时间则无明显差异(P>0.05).与病理对照1组相比,治疗1组及治疗2组明显增大(P<0.05,P<0.01);与病理对照2组相比,治疗2组增大(P>0.05),治疗1组无明显变化.结论慢性心理应激可以损伤大鼠的空间学习记忆能力,这种损伤可能是部分可逆的.逍遥散对慢性心理应激损伤大鼠学习记忆力具有一定的保护作用.     

逍遥散含药血清影响RIN-m5f细胞活性及胰岛素分泌的机制探讨

目的研究逍遥散含药血清对应激损伤状态糖尿病细胞模型[大鼠胰岛β细胞瘤细胞(RIN-m5f)]的活性、胰岛素(INS)分泌的影响及其干预机制。方法用高浓度葡萄糖(50 mmol·L-1)和皮质酮(CORT,320μmol·L-1)诱导培养RIN-m5f细胞12 h,制备应激损伤状态糖尿病细胞模型,再用30%逍遥散含药血清干预,并设立空白血清对照。共分为7组:①正常组:RIPM1640+10%FBS;②高糖组(G组):①+50 mmol·L-1的葡萄糖;③应激组(GCo组):②+320μmol·L-1的CORT;④空白血清高糖组(GC组):②+30%空白组大鼠血清(30%C)⑤逍遥散血清高糖组(GX组):②+30%逍遥散组大鼠血清(30%X);⑥空白血清应激组(GCoC组):③+30%C;⑦逍遥散血清应激组(GCoX组):③+30%X。干预12 h后,采用CCK-8法检测细胞活性;酶联免疫法(ELISA)检测细胞INS分泌水平;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞活化转录因子6(ATF-6)、肌醇需酶1(IRE-1)mRNA表达;Western Blot法检测细胞Caspase-12、CHOP蛋白表达。结果与正常组比较,G组细胞活性和ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平显著下降(P 0.05,P 0.01),INS水平显著升高(P 0.01)。与G组比较,GCo组细胞活性显著降低(P 0.01),INS水平和ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平均明显上调(P 0.05,P 0.01)。与GC组比较,GX组的细胞活性明显升高(P 0.05),ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12蛋白表达水平均明显上调(P 0.05,P 0.01),但INS水平、CHOP蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。与GCoC组比较,GCoX组的细胞活性、INS水平明显升高(P 0.05),IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平明显下降(P 0.05,P 0.01),但ATF6mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论高浓度葡萄糖和CORT能降低应激损伤状态糖尿病RINm5f细胞的活性,升高INS水平,加重胰岛素抵抗(IR)程度。逍遥散含药血清能缓解细胞IR水平,其作用机制可能与调控内质网应激(ERS)相关。     

逍遥散对慢性心理应激损伤大鼠海马神经元的影响

目的:观测逍遥散对多相性应激大鼠海马神经元结构的影响,探究逍遥散抵抗应激损伤大鼠海马神经元结构的机制.方法:大鼠采用慢性多相性应激模型,造模后取材进行Nissl体染色观测海马神经元内Nissl体及Sevier-Munger海马神经纤维,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2 浓度.结果:造模组Nissl体数量明显减少,神经元胞体溃变、减少,神经纤维减少、排列紊乱;逍遥散治疗组Nissl体及神经元胞体及神经纤维数量有明显增加,排列更整齐;海马突触体内Ca2 浓度均明显升高.结论:多相性应激使大鼠海马神经元损伤从而致神经元内Nissl体减少,这种损伤是可逆或部分可逆的,逍遥散能明显抑制应激对大鼠海马神经元造成的损伤及神经元内Nissl体的减少.海马神经元细胞内Ca2 超载可能是慢性心理应激损伤大鼠空间学习记忆重要的神经机制,逍遥散也可能是通过抑制海马神经元细胞外Ca2 大量内流,阻止Ca2 超载,从而改善应激大鼠的学习记忆状况.