溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型细胞增殖的影响

目的:观察溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型细胞增殖的影响.方法:应用三硝基苯磺酸灌肠法复制溃疡性结肠炎大鼠模型,3d后采集血液,分离血清,作为损伤剂作用于Caco-2细胞一段时间,模拟细胞炎性损伤模型,MTT法观察不同浓度溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型细胞增殖的影响.结果:与模型血清组比较,10％,5％,2.5％,1.25％,0.625％溃结灵含药血清作用Caco-2细胞损伤模型24h后,有促进其增殖的作用,尤以10％溃结灵含药血清效果最佳(P＜0.05).结论:溃结灵含药血清可促进Caco-2细胞炎性损伤后细胞增殖.     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。     

逍遥散对慢性应激大鼠模型血清肿瘤标志物的影响

目的探讨逍遥散对慢性应激模型大鼠血清肿瘤标志物的影响。方法 Wistar大鼠30只,随机分作模型组、空白组和治疗组,常规饲养,模型组在常规饲养基础上另外给予对应的慢性应激刺激,治疗组在模型组处理基础上给予中药逍遥散煎剂灌胃,21天后采血清,Elisa法测定血清CEA、CA19-9、CA724、AFP。统计学处理,用线性回归分析肿瘤标志物与慢性应激的相关性,方差分析比较三组血清肿瘤标志物差异。结果肿瘤标志物测定值如下,空白组:CEA:9.07±1.43,CA19-9:321.01±35.95,CA724:8.43±1.02,AFP:7.20±0.80;模型组:CEA:22.73±1.6,CA19-9:729.11±57.68,CA724:18.66±1.11,AFP:15.83±0.89;治疗组:CA19-9:521.16±34.73,CA724:12.91±1.18,AFP:7.63±1.20。回归分析提示CA19-9、CA724、AFP与慢性应激有相关性,且以AFP相关性最高。方差分析三组间比较,CA19-9、CA724、AFP三组间差异均有统计学意义(P0.01);LCE-T检验两两组间比较,CA19-9、CA724治疗组与空白组,治疗组与模型组,模型组与空白组之间差异均有统计学意义(P0.01),AFP治疗组与模型组,模型组与空白组之间差异均有统计学意义(P0.01),治疗组与空白组之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论慢性应激损伤能刺激大鼠血清肿瘤标志物升高,有直接诱发肿瘤发生的可能性。慢性应激可能与消化系统肿瘤(特别是肝癌)的发生,关系较为密切。中药方剂逍遥散能够有效降低慢性应激诱发的肿瘤标志物升高,有望预防慢性应激诱发的癌变。     

丹栀逍遥散含药血清对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响

目的:观察丹栀逍遥散含药血清通过诱导自噬对乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法:大鼠ig 8.99 g·kg^-1丹栀逍遥散,制备含药血清,取对数生长期MCF-7细胞,以1×10⁵个/mL密度接种于96孔板,每孔100μL,分为空白血清组和含药血清组,每组设3个复孔,分别作用12,24,48,72 h,噻唑蓝(MTT)法测定其对MCF-7细胞生长的抑制作用,单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色观察细胞自噬泡的形成情况,免疫印迹法(Western blotting)检测自噬蛋白(Beclin1)的表达。结果:与空白血清组比较,15%丹栀逍遥散含药血清具有显著抑制MCF-7细胞生长的作用,确定其最佳作用时间为48 h。丹栀逍遥散含药血清作用细胞48 h后能够增强MDC染色荧光强度,增加自噬泡的形成并显著上调Beclin1的表达。结论:丹栀逍遥散含药血清能够显著抑制MCF-7的细胞生长,诱导细胞自噬性死亡可能是其抗乳腺癌的机制之一。     

逍遥散含药血清影响RIN-m5f细胞活性及胰岛素分泌的机制探讨

目的研究逍遥散含药血清对应激损伤状态糖尿病细胞模型[大鼠胰岛β细胞瘤细胞(RIN-m5f)]的活性、胰岛素(INS)分泌的影响及其干预机制。方法用高浓度葡萄糖(50 mmol·L-1)和皮质酮(CORT,320μmol·L-1)诱导培养RIN-m5f细胞12 h,制备应激损伤状态糖尿病细胞模型,再用30%逍遥散含药血清干预,并设立空白血清对照。共分为7组:①正常组:RIPM1640+10%FBS;②高糖组(G组):①+50 mmol·L-1的葡萄糖;③应激组(GCo组):②+320μmol·L-1的CORT;④空白血清高糖组(GC组):②+30%空白组大鼠血清(30%C)⑤逍遥散血清高糖组(GX组):②+30%逍遥散组大鼠血清(30%X);⑥空白血清应激组(GCoC组):③+30%C;⑦逍遥散血清应激组(GCoX组):③+30%X。干预12 h后,采用CCK-8法检测细胞活性;酶联免疫法(ELISA)检测细胞INS分泌水平;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞活化转录因子6(ATF-6)、肌醇需酶1(IRE-1)mRNA表达;Western Blot法检测细胞Caspase-12、CHOP蛋白表达。结果与正常组比较,G组细胞活性和ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平显著下降(P 0.05,P 0.01),INS水平显著升高(P 0.01)。与G组比较,GCo组细胞活性显著降低(P 0.01),INS水平和ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平均明显上调(P 0.05,P 0.01)。与GC组比较,GX组的细胞活性明显升高(P 0.05),ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12蛋白表达水平均明显上调(P 0.05,P 0.01),但INS水平、CHOP蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。与GCoC组比较,GCoX组的细胞活性、INS水平明显升高(P 0.05),IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平明显下降(P 0.05,P 0.01),但ATF6mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论高浓度葡萄糖和CORT能降低应激损伤状态糖尿病RINm5f细胞的活性,升高INS水平,加重胰岛素抵抗(IR)程度。逍遥散含药血清能缓解细胞IR水平,其作用机制可能与调控内质网应激(ERS)相关。     

不同浓度石斛合剂含药血清对β-Tc-6细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度石斛合剂Ⅰ方和Ⅱ方含药血清对小鼠胰岛素瘤细胞株β-Tc-6增殖及凋亡的影响。方法将长满80%培养瓶的β-Tc-6消化后,接种于96孔板,1×104个细胞/孔,采用MTT法测吸光值A490,连续10d,绘制生长曲线;分别用20%、10%和5%的石斛合剂Ⅰ方或Ⅱ方含药血清作用于对数生长期细胞,48h后采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果β-Tc-6在第5前缓慢增殖,到第6天进入对数生长期,第9天后进入平台期。与对照组相比,10%石斛合剂Ⅰ方组可显著促进细胞增殖(P0.05);与对照组相比,三种不同浓度的石斛合剂Ⅰ方组及10%Ⅱ方组显著抑制细胞凋亡(P0.05,P0.01),与10%Ⅰ方组相比,20%Ⅰ方组和5%Ⅰ方组抑制凋亡更为显著,差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。与对照组相比,20%Ⅱ方组显著促进细胞凋亡(P0.05)。结论石斛合剂Ⅰ方具有促进增殖及抑制凋亡的作用,其最佳作用浓度为10%;石斛合剂Ⅱ方对细胞增殖无显著性促进作用,但对细胞凋亡则依据不同浓度有显著性促进或抑制作用。     

丹栀逍遥散含药血清对D-半乳糖致原代培养神经元损伤的影响

目的:探讨丹栀逍遥散(DZXYS)对D-半乳糖致原代培养神经元损伤的保护作用机制。方法:在原代培养第6d,以50mM D-半乳糖(D-gal)作用神经元72h造成自由基损伤模型,用10％DZXYS药物血清防治损伤。倒置显微镜下观察神经元的生长发育形态,MTT法在酶标仪上检测神经元代谢率,PI染色在流式细胞仪上检测神经元凋亡构成比,HE染色观察神经元形态、形态计量神经突起密度,RT-PCR检测糖醛还原酶信使RNA(AR-mRNA)含量。用/检验比较正常对照神经元、受D-gal攻击神经元和受D-gal攻击同时得到DZXYS防治神经元之间的差别。结果:受D-gal攻击而受损伤的神经元代谢率显著降低(P<0.01),高、中、低剂量DZXYS防治均可使其明显回升(P<0.O5或P<0.01);凋亡构成比增高(P<0.01),高、中低剂量DZXYS防治均可使其回降(P<0.01);攻击后出现变性坏死的形态变化。DZXYS防治使其好转、但神经突起浆质中出现均匀、细小的颗粒;神经突起密度显著降低(P<0.01),高、中、低剂量DZXYS防治使其明显回升(P<0.05或P<0.01);消除胶质细胞的原代培养神经元无AR-mRNA表达。结论:DZXYS可试用于老年性痴呆的防治。     

加味桃核承气汤不同提取方法大鼠含药血清对糖尿病VSMC细胞周期及细胞凋亡的影响

目的:探讨不同提取方法加味桃核承气汤含药血清对胰岛素(Regular insulin,RI)诱导兔血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的细胞周期及细胞凋亡的影响.并探讨其可能的作用机制,寻找本方抗糖尿病动脉粥样硬化的最佳提取方法.方法:采用兔主动脉平滑肌细胞株,以RI诱导VSMC增殖,以不同提取方法制备桃核承气汤含药血清,采用碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)单染色法,以流式细胞仪检测VSMC的凋亡率及细胞周期.结果:各组在各细周期的DNA含量比较,总体差异显著(P<0.01);模型组、美迪康组细胞凋亡最少;罗格列酮组、乙酸乙酯组细胞凋亡较多.罗格列酮组、乙酸乙酯组促进凋亡作用(Sub-G0期)较加味桃核承气汤全方组显著(P<0.01).结论:促进糖尿病VSMC凋亡的药物有效成分,更大的可能存在于罗格列酮组、乙酸乙酯组当中.在促进糖尿病VSCM凋亡的机制方面,罗格列酮组、乙酸乙酯组均可能与G0/G1、G2M期阻滞有关.     

驱铅扶正方含药血清对染铅PC-12细胞生存率的影响研究

目的观察驱铅扶正方含药血清对具有神经特性的PC-12细胞的影响。方法制备驱铅扶正方含药血清,运用MTT法首先检测不同浓度醋酸铅对PC-12细胞的影响,确定醋酸铅浓度后检测不同浓度、不同采血时间的驱铅扶正方含药血清对染铅PC-12细胞的影响。结果采血时间为2 h、浓度为10%含药血清能明显提高以浓度为100μmol/L的醋酸铅100μL刺激24 h条件下铅中毒PC-12细胞的生存率。结论驱铅扶正方含药血清对经浓度为100μmol/L的醋酸铅100μL刺激24 h后的PC-12细胞生存率具有提高作用。     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区FGFR1的影响

目的:研究逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区FGFR1基因表达及翻译的影响,探讨其改善慢性应激损伤的可能机制。方法:以120只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、慢性应激慢性应激模型组、逍遥散干预组、西药(开克)对照组4组,每组30只。造模方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)大鼠模型,逍遥散干预组和西药(开克)对照组在造模同时分别给予逍遥散10 mL/Kg、开克10 mL/Kg,并设定三种造模时间21 d、28 d、35 d。连续造模后,分别于第22天、第29天、第36天处死大鼠并取材。采用荧光定量RT-PCR检测及Western-Blot检测方法测定各组大鼠海马区FGFR1基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激慢性应激模型组大鼠海马区FGFR1mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种下调的表达变化。结论:成纤维细胞生长因子受体1的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致的损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

鸡血藤含药血清对L1210细胞的影响

目的：观察鸡血藤（SS）对白血病L1210细胞株的影响。方法：以白血病L1210细胞株为研究对象，以昆明小鼠含药血清为药物，用MTT法观察SS含药血清对白血病细胞株L1210细胞增殖的抑制作用。结果：SS含药血清对L1210细胞有抑制作用，其结果具有统计学意义。结论：SS含药血清具有一定抑制L1210肿瘤细胞增殖及其诱发的移植性肿瘤作用。     

益心康胶囊含药血清对氧应激所致线粒体损伤的保护作用

目的和方法：应用羟自由基损伤体系（Fe2 /H2O2)在体外与大鼠心肌线粒体共同孵育30min,观察了氧应激对心肌线粒体的影响,探讨益心康胶囊（H303）含药血清对氧应激损伤的保护机制,结果：不同浓度Fe2 /H2O2可使反应体系中脂质过氧化产物明显升高,线粒体超微结构发生明显改变;线粒体肿胀度增加;线粒体GSH含量明显降低,H303含药血清可明显减轻上述损伤,表现为显著抑制线粒体脂质过氧化和GSH含量的降低,改善线粒体超微结构,减轻线粒体肿胀度,结论：氧应激可造成心肌线粒体结构和功能损伤,H303抗心肌缺血损伤的作用机制是通过防止线粒体脂质过氧化,保护内源性抗氧化物,改善线粒体结构等作用而实现的。     

四逆散、应激血清/脑脊液对皮质酮损伤的海马神经元生存率的影响

目的以皮质酮损伤的海马神经元细胞为研究对象,探讨四逆散、应激血清/脑脊液对其生存率的影响。方法离体培养原代海马神经元细胞并用Map-2鉴定,采用皮质酮(CORT)建立慢性应激损伤神经元细胞的体外模型。造模完成后,用含10%、20%、30%应激血清/脑脊液、应激四逆散血清/脑脊液,检测各组的生存率。结果皮质酮浓度为200μM、400μM、600μM时,细胞生存率显著下降(P0.01),当皮质酮浓度为200μM时,细胞生存率约为60%。与空白组比较,模型组细胞生存率降低(皮质酮200μM)(P0.01),10%应激血清组细胞生存率高于相应浓度的空白血清组(P0.05); 20%、30%应激血清组细胞生存率低于相应浓度的空白血清组(P0.05);10%、20%、30%应激四逆散血清组细胞生存率高于相应浓度的空白血清组(P0.05);20%、30%应激脑脊液组细胞生存率大于相应浓度空白脑脊液组(P0.05)。结论 200μM皮质酮培养24h建立海马神经元细胞慢性应激损伤状态模型;应激四逆散血清可以提高皮质酮损伤的海马神经元细胞的生存率。     

清脉饮含药血清对体外TNF-α损伤EAhy-926细胞的影响

目的:研究清脉饮含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(Ehay926)的影响。方法:制备含药血清;将体外培养的EAhy-926细胞,随机分为正常对照组、清法组、活血组、全方组、软坚组、西药组、TNF-α损伤组等;清脉饮含药血清与TNF-α共同处理血管内皮细胞24h后,光学显微镜(下称光镜)下观察细胞的形态变化,电子显微镜(下称电镜)下观察细胞的细胞器改变。结果:1光镜下细胞大体形态变化:清脉饮含药血清与TNF-α共同处理的细胞,各组损伤均较少,细胞数量多,活血组细胞数量相对较少;2电镜下细胞结构的改变:清脉饮含药血清与TNF-α共同处理的细胞器损害较单纯TNF-α损伤组的细胞小,其中以中剂清法组、软坚组、西药组对细胞器的损伤最少,细胞的超微结构与正常对照组比较没有明显差异。结论:清脉饮含药血清可一定程度上对TNF-α损伤的血管内皮细胞保护作用,减少其对细胞器的损害,且含药血清对细胞的保护作用存在血清浓度差异,其机制可能与抑制TNF-α的促炎作用以减少其对细胞器的损害有关。     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区Cacnb4基因表达的影响

目的:本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况。方法:以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只。造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2m L/(只·d),连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化。结论:电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

不同浓度麝香含药血清对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度麝香对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和定向成骨、成脂诱导分化的影响。方法 60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组及空白对照组,每组15只。麝香高、中、低剂量组分别给予麝香16. 8、8. 4、4. 2μl/100 g灌胃,每日1次,连续8天,分别制备不同浓度麝香含药血清及空白血清。另取15只SD大鼠利用全骨髓贴壁筛选法分离BMSCs,培养至第3代,通过细胞形态学观察、细胞表型鉴定、成骨及成脂诱导分化方法鉴定BMSCs。利用不同浓度麝香含药血清和空白血清干预BMSCs,检测各组细胞不同时间细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原免疫荧光染色、钙化结节数及脂肪细胞转化率。结果与空白血清组同时间比较,麝香低剂量血清组在第2、3、4、5、7天,麝香中剂量血清组在第1、5天细胞增殖率均升高;麝香低剂量血清组在第2、4、6、8天,麝香中剂量血清组在第4、8天,麝香高剂量血清组在第2、8天ALP活性升高;除麝香高剂量血清组钙化结节数外,各组钙化结节数和脂肪细胞转化率亦升高(P 0. 05或P 0. 01)。与麝香低剂量血清组比较,麝香高剂量血清组在第1、3、5、7天,麝香中剂量血清组在第1、5天细胞增殖率降低,在第6、8天ALP活性降低,钙化结节数及脂肪细胞转化率亦降低(P 0. 05)。麝香高、中、低剂量血清组Ⅰ型胶原细胞阳性表达依次增强,空白血清组细胞阳性表达很弱或几乎未见。结论麝香可以促进BMSCs增殖并诱导其定向分化,以4. 2μl/100 g浓度效果最好。     

钩藤散含药血清对PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨钩藤散含药血清对PC12细胞损伤的保护作用。方法:分别采用谷氨酸及过氧化氢造成PC12细胞损伤模型,以MTT法及LDH活性观察钩藤散含药血清对PC12细胞损伤模型的影响。结果:发现钩藤散含药血清对PC12细胞损伤所致的细胞形态改变有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性。结论:钩藤散含药血清可对抗谷氨酸及过氧化氢造成的PC12细胞损伤,对细胞有明显的保护作用。     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响

目的研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)生长及其细胞周期分布的影响。方法应用MTT比色法检测肿瘤细胞活性,流式细胞仪分析细胞周期相对分布。结果西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)有较强的抑制作用,其抑制率与含药血清浓度呈直线相关。流式细胞仪周期分析结果显示含药血清处理24 h,S期细胞比例增加,G2/M期细胞减少;处理48 h后,G0/1期细胞增多,S期细胞减少。结论西黄丸含药血清可抑制人乳癌细胞系(MCF-7)细胞生长,并可干扰其细胞周期。     

逍遥散对慢性心理应激损伤大鼠海马神经元的影响

目的:观测逍遥散对多相性应激大鼠海马神经元结构的影响,探究逍遥散抵抗应激损伤大鼠海马神经元结构的机制.方法:大鼠采用慢性多相性应激模型,造模后取材进行Nissl体染色观测海马神经元内Nissl体及Sevier-Munger海马神经纤维,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2 浓度.结果:造模组Nissl体数量明显减少,神经元胞体溃变、减少,神经纤维减少、排列紊乱;逍遥散治疗组Nissl体及神经元胞体及神经纤维数量有明显增加,排列更整齐;海马突触体内Ca2 浓度均明显升高.结论:多相性应激使大鼠海马神经元损伤从而致神经元内Nissl体减少,这种损伤是可逆或部分可逆的,逍遥散能明显抑制应激对大鼠海马神经元造成的损伤及神经元内Nissl体的减少.海马神经元细胞内Ca2 超载可能是慢性心理应激损伤大鼠空间学习记忆重要的神经机制,逍遥散也可能是通过抑制海马神经元细胞外Ca2 大量内流,阻止Ca2 超载,从而改善应激大鼠的学习记忆状况.     

桂枝附子含药血清对类风湿关节炎模型的影响

目的通过液质联用(LC-MS)技术分析桂枝附子温通经脉配伍灌胃后胶原关节炎(CIA)大鼠的血清移行成分,考察桂枝附子含药血清对类风湿关节炎模型的影响。方法选取雄性Wistar大鼠25只随机取6只分为正常组、桂枝附子组,每组3只,其余大鼠采用Ⅱ型胶原造模。将造模成功的6只CIA大鼠随机平均分为模型组、造模桂枝附子组,每组3只。予20倍给药剂量的桂枝附子配伍灌胃给药,正常组和模型组大鼠予生理盐水灌胃,60 min后经肝门静脉取血,采用甲醇沉淀法处理血清,予LC-MS技术对其进行分析。通过将含药血清与相同条件下测定的模型组血清、正常组血清、供试品以及对照品图谱比较,分析大鼠给药后血清中的移行成分。结果桂枝附子组含药血清中产生了10个移行成分,均为代谢产物;造模桂枝附子组含药血清产生了25个移行成分,其中8个为原形成分,17个为代谢产物。结论造模后大鼠的含药血清中移行成分明显增加,成分浓度也较高。由此可见,CIA大鼠病理模型选择性的吸收了桂枝附子含药学清中的成分,从基础层面探讨中医"有是病用是药"理论。