丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激

【目的】 探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】 将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸（400 μmol/L）组,丹参酮 ⅡA 20 μmol/L组和棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20 μmol/L组考察通路激活状态。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78（GRP78）、转录激活因子4（ATF4）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞 GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶 RNA 样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核生物翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）的蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著升高（P <0.01）,H9c2 细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK 和 p-eIF2α/eIF2α 比例也显著增大（P < 0.01）,凋亡相关分子 Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01）。不同浓度丹参酮 ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组细胞存活率显著升高（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著降低（P < 0.01）,H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低（P < 0.01）,均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮 ⅡA 10 μmol/L组（P < 0.05）和棕榈酸+丹参酮 ⅡA 20 μmol/L 组（P < 0.05）变化显著。加入 PERK 通路激活剂 CCT020312 作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P < 0.05）;再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈酸+CCT020312组比较,棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著回降（P < 0.05）。【结论】 丹参酮ⅡA可减轻心肌细胞脂毒性损伤,其机制与其通过抑制PERK信号通路活化来减轻棕榈酸诱导的心肌H9c2细胞凋亡,并且控制内质网应激反应有关。     

脊髓康通过IRE1-XBP1通路抑制内质网应激诱导的PC12细胞凋亡

目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康(JSK)抑制内质网应激(ERS)诱导的PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞为神经元样细胞并通过流式细胞技术鉴定;诱导后细胞分为空白组(无干预措施)、模型组[2μmol/L毒胡萝卜素(TG)]、脊髓康组(2μmol/L TG及0.0521 g/mL JSK水提物冻干粉,合生药0.625 g/mL);CCK8法检测各组细胞24、48、72 h增殖活性,流式细胞技术检测各组细胞凋亡状态,Western Blot与q-PCR检测1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、X盒结合蛋白1(XBP1)、葡萄糖调节蛋白78(Grp78)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白及mRNA表达情况,透射电镜扫描各组细胞观察细胞及内质网形态学特征。结果与空白组比较,模型组NGF诱导的神经元样PC12细胞增殖活性显著降低(P0.05),晚期凋亡明显增高(P0.01),电镜扫描显示其细胞粗面内质网结构肿胀,囊泡化,呈典型的细胞凋亡形态;Grp78、CHOP蛋白表达显著升高(P0.05),XBP1及IRE1蛋白表达也有微微上调,但差异无统计学意义(P0.05);Grp78、CHOP、XBP1及IRE1 mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,JSK组24、48、72 h PC12细胞增殖活性升高(P0.05),晚期凋亡及早期凋亡均明显降低(P0.05,P0.01);Grp78、CHOP的蛋白及mRNA表达均降低(P0.05),XBP1及IRE1蛋白及mRNA表达明显上调(P0.05)。透射电镜观察JSK组内质网结构仍存在,存在完整的外膜,内质网膜破损较轻,可见部分凋亡形态学改变。结论 JSK可能通过活化IRE1-XBP1途径改善TG诱导的内质网应激状态,从而抑制ERS导致的神经元样PC12细胞凋亡,这可能是其有效改善脊髓损伤后神经元功能修复的机制。     

电针结合脑内注射血管内皮生长因子对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激反应相关蛋白ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP的影响

目的:观察电针及电针结合脑内注射血管内皮生长因子(VEGF)对脑缺血后再灌注损伤(CIRI)大鼠内质网应激反应(ERS)相关蛋白转录激活因子6(ATF 6)、肌醇需求酶1(IRE 1)、X盒结合蛋白1(XBP 1)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的影响,探讨电针结合脑内注射VEGF对CIRI的修复作用。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、VEGF组、电针+VEGF组,每组8只。采用线栓法制备CIRI模型。VEGF组及电针+VEGF组大鼠于造模完成24h后,向侧脑室内注入10!L VEGF(0.025!g/!L)。电针组及电针+VEGF组电针"百会"、左侧"曲池""足三里",1次/d,每次30min,共14d。对各组大鼠进行神经功能评分;尼氏染色法观察大鼠CIRI区域的组织形态学变化;Western blot法检测大鼠脑梗死区组织ERS相关蛋白ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP的表达;荧光定量PCR法检测大鼠梗死区组织ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显升高(P0.05);与模型组比较,电针组、VEGF组、电针+VEGF组神经功能评分均明显降低(P0.05);与电针组、VEGF组比较,电针+VEGF组神经功能评分明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组CIRI区域尼氏小体数明显减少(P0.05);与模型组比较,电针组、VEGF组、电针+VEGF组CIRI区域尼氏小体数均明显增多(P0.05);与电针组、VEGF组比较,电针+VEGF组尼氏小体数明显增多(P0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠CIRI区域ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05);与模型组比较,电针组、VEGF组、电针+VEGF组CIRI区域ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP蛋白及mRNA表达均明显降低(P0.05);与电针组、VEGF组比较,电针+VEGF组ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05)。结论:电针结合脑内注射VEGF可促进CIRI组织修复,其机制可能与下调ERS相关蛋白ATF 6、IRE 1、XBP 1、CHOP的表达有关,且其效果比单纯电针或单纯脑内注射VEGF更具优势。     

参芪益心方抑制阿霉素诱导大鼠H9c2细胞凋亡的机制研究

目的?基于心肌细胞内质网应激观察参芪益心方对大鼠H9c2心肌细胞内Ca2+及半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase）-3、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白-78（GRP78）、增强型蛋白同源蛋白（CHOP）、肌质网钙离子ATP酶（SERCa2a）蛋白和mRNA表达的影响。方法?SD大鼠制备参芪益心方含药血清。体外培养H9c2心肌细胞，用阿霉素诱导凋亡建立模型，将细胞分为模型组（8%空白血清）、高剂量组（8%含药血清）、中剂量组（4%含药血清+4%空白血清）、低剂量组（2%含药血清+6%空白血清）和卡托普利（1×10-5 mol/L）组，另设空白组（8%空白血清）。Real-time PCR及Western Blot分别检测Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP、SERCa2a mRNA及蛋白的表达，Fluo-3AM流式细胞仪检测H9c2细胞内Ca2+荧光强度。结果?与空白组比较，模型组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的蛋白、mRNA表达及Ca2+荧光强度增加，SERCa2a 蛋白及mRNA表达下降（均P<0.01）。与模型组比较，各干预组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低，Ca2+荧光强度降低，SERCa2a蛋白及mRNA表达增加（P<0.01）。与卡托普利组比较，中药高剂量组SERCa2a蛋白及mRNA表达升高，Ca2+荧光强度升高（P<0.01）。结论?参芪益心方可通过降低Ca2+浓度，下调Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的表达，上调SERCa2a的表达，减轻内质网的过度应激，抑制心肌细胞凋亡。     

补肾助孕方对黄体功能不全模型大鼠卵巢内质网应激的调节

目的 探讨补肾助孕方对米非司酮诱导的黄体功能不全（LPD）模型大鼠卵巢内质网应激（ERS）的调控机制。方法 使用随机数表法将50只SD大鼠分为空白组，模型组，地屈孕酮（0.02 g·kg^-1）组，补肾助孕方低（0.08 g·kg^-1）、高剂量（0.24 g·kg^-1）组。使用蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠卵巢免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK），肌醇必需酶-1（IRE-1），活性转录因子6（ATF6），C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白和mRNA表达水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清孕酮（P）和雌二醇（E₂）水平。结果 与空白组比较，模型组BIP，PERK，CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01），PERK及CHOP mRNA表达明显下降（P<0.05）；而IRE-1，ATF6蛋白表达，IRE-1，BIP，ATF6 mRNA表达，血清E₂，P水平差异无统计学意义。与模型组比较，地屈孕酮组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白表达，PERK，IRE-1，BIP，ATF6，CHOP mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方低剂量组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平明显升高（P<0.05），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白和mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方高剂量组PERK，BIP，CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平显著升高（P<0.01），而IRE-1和ATF6蛋白表达，PERK，IRE1，BIP，ATF6 mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义。结论 补肾助孕方可以改善黄体功能不全，其机制可能与缓解内质网应激作用有关。     

清热化淤方对脑缺血预处理大鼠ATF4、Caspase-12表达的影响

目的 观察清热化淤方对脑缺血预处理大鼠缺血再灌注后ATF4、Caspase-12 mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠160只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)、清热化淤方干预组(QRHY)四组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d四个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点ATF4、Caspase-12 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 ①MCAO组12h ATF4mRNA及其蛋白表达均达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降;BIP组较MCAO组ATF4mRNA及其蛋白表达均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);QRHY组较BIP组进一步降低其表达(P ＜0.05,P＜0.01).②MCAO组12 h Caspase-12 mRNA及其蛋白表达均达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降(P ＜0.01);BIP组较MCAO组Caspase-12mRNA及其蛋白表达均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);QRHY组较BIP组进一步降低其表达(P＜0.05,P＜0.01).结论 清热化淤方可通过下调大鼠脑缺血预处理后ATF4、Caspase-12表达发挥其神经保护作用.     

蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞凋亡的保护作用研究

该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)所致肝细胞凋亡的保护作用。体外培养L-02细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分别采用Western和q PCR法检测相关蛋白和mRNA的表达情况。研究发现,TM能够以时间和剂量依赖的方式降低L-02细胞的存活率,与正常组相比,模型组中L-02细胞的凋亡率和ERS相关因子GRP78,PERK,e LF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白水平均显著升高(P0.05,P0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平均显著下降(P0.05,P0.01)。与模型组相比,不同浓度的EWAs处理后,L-02细胞的存活率显著增加,细胞凋亡显著减少,ERS相关因子GRP78,PERK,e LF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.05,P0.01),且呈剂量依赖性。这些结果表明,EWAs对TM诱导L-02细胞ERS所致的肝细胞凋亡具有显著的保护作用,其机制可能与下调ERS相关因子GRP78,PERK,ATF4,e LF2α,CHOP,Bax的表达,减轻L-02细胞的ERS,上调Bcl-2的表达,促进受损细胞增殖有关。     

针刺血清调控内质网应激反应对无镁诱导培养大鼠海马神经元惊厥性损伤的保护作用

目的:观察针刺血清对无镁诱导惊厥样放电海马神经元凋亡数及内质网应激伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸蛋白酶蛋白-12(Caspase-12)表达的影响,探讨针刺血清对海马神经元惊厥性损伤的保护机制。方法:SD大鼠腹腔注射戊四唑诱发急性惊厥后分为针刺组及对照组。针刺组取"百会""大椎"针刺,每日1次,共7d。末次针刺后,针刺组大鼠取血清作为针刺血清,对照组取血清作为非针刺血清。以无镁诱导惊厥样放电的原代培养胎鼠海马神经元为模型,根据对培养10d海马神经元的不同处理分为正常细胞外液组(简称正常组)、无镁细胞外液组(简称无镁组)、针刺血清组和非针刺血清组。正常组将无血清培养液换成细胞外液培养3h后换液培养,其他各组用无镁细胞外液培养3h后换液培养。4组分别于换液培养2、12、48h3个时间点采用TUNEL法和Western blot法分别检测海马神经元凋亡情况及GRP 78、CHOP和Caspase-12蛋白表达情况。结果:正常组仅见少量凋亡海马神经元;无镁组3个时间点凋亡海马神经元数均较正常组明显增加(P0.01);针刺血清组3个时间点凋亡海马神经元数与无镁组比较明显减少(P0.05,P0.01),与非针刺血清组12、48h比较凋亡海马神经元数明显减少(P0.01)。与正常组比较,无镁组3个时间点海马神经元CHOP和Caspase-12蛋白表达均明显增强(P0.05,P0.01),2h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达明显增强(P0.05);与无镁组比较,针刺血清组3个时间点神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P0.01,P0.05),12、48h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P0.05,P0.01),3个时间点神经元Caspase-12蛋白表达均显著减少(P0.05,P0.01);与非针刺血清组相比,针刺血清组2、12h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P0.01,P0.05),12、48h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P0.05),3个时间点海马神经元Caspase-12蛋白表达均明显减少(P0.01,P0.05)。结论:针刺血清能明显减少海马神经元凋亡数,上调GRP 78蛋白表达,下调CHOP和Caspase-12蛋白表达,发挥维持内质网稳定性的重要作用。     

益气补肾调脂方对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏内质网应激相关基因mRNA的影响

目的:观察中药复方益气补肾调脂方对高脂高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠的肝脏内质网应激相关基因m RNA的影响。方法:高脂高果糖饮食诱导16周,建立NASH小鼠模型,在造模第5周开始,分别予以益气补肾调脂方高、中、低三种剂量干预12周,在16周末处死小鼠。采用ELISA法检测血清游离脂肪酸(FFAs)的水平,real time-PCR法检测肝组织内质网应激相关基因mRNA的表达水平。结果:模型组血清FFAs、肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA的表达水平较正常组升高(P0.05,P0.01),肝组织X-盒结合蛋白1(XBP1)mRNA的表达水平较正常组下降(P0.05)。经益气补肾调脂方干预后,小鼠血清FFAs水平、肝组织GRP78、ATF6、CHOPmRNA较模型组下降(P0.05),肝组织XBP1mRNA表达较模型组有所上升(P0.05)。结论:益气补肾调脂方可能通过改善肝脏内质网应激来发挥抗NASH的作用。     

逍遥散对雷公藤致急性肝损伤大鼠肝脏组织Bcl-2、Bax蛋白表达及Caspase-3活性的影响

目的探讨逍遥散防治雷公藤致急性肝损伤的可能作用机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组,每组10只。逍遥散组大鼠造模前4天灌胃逍遥散6.75 g/(kg·d),正常组和模型组给予等体积蒸馏水,每天1次。第5天模型组和逍遥散组大鼠灌胃雷公藤水煎剂3.75 g/(kg·d)连续4天,建立大鼠急性肝损伤模型。比较各组大鼠肝脏指数及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,检测肝脏组织B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性。结果与正常组比较,模型组大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST水平明显升高,肝脏组织Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax值明显下降,Bax蛋白表达和Caspase-3活性明显升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,逍遥散组大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST水平明显降低,肝脏组织Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax值明显升高,Bax蛋白表达和Caspase-3活性明显下降(P0.05或P0.01)。结论逍遥散对雷公藤致大鼠急性肝损伤的防控作用可能与其上调肝脏组织Bcl-2蛋白水平和下调Bax蛋白水平、Caspase-3活性,从而改善肝细胞凋亡有关。     

鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致肝细胞损伤的保护作用研究

该研究旨在探讨鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的肝细胞损伤的保护作用及机制。衣霉素诱导L02细胞建立内质网应激损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致L02细胞损伤的存活率;Western blot法检测内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、转录因子激活蛋白4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)的表达水平,同时检测加入内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)和shRNA沉默CHOP因子后上述表达情况;免疫荧光法检测L02细胞中GRP78、PERK、CHOP的表达水平。结果显示,鬼针草乙酸乙酯提取物显著提高内质网应激所致L02细胞损伤的存活率(P0.05或P0.01),并在一定范围内呈时间剂量依赖性。给药组的GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.05或P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01);加入内质网应激抑制剂和shRNA沉默CHOP因子后,GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01)。免疫荧光结果显示GRP78、PERK、CHOP表达情况与Western blot法检测结果一致。综上,鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的L02细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,下调PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路所介导的细胞凋亡有关。     

心衰合剂对大鼠心肌细胞肥大模型内质网应激因子Grp78、Caspase-12表达的影响

目的观察心衰合剂对大鼠体外心肌细胞肥大模型细胞内质网应激因子Grp78及Caspase-12表达的影响。方法培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)建立肥大心肌细胞模型(模型组),分别用心衰合剂(10%含药血清组)卡托普利(卡托普利组)干预细胞。Western-blot测定胞内Grp78及Caspase-12表达的蛋白表达水平。结果模型组心肌细胞Grp78、Caspase-12蛋白表达水平明显上调(P0.01);与模型组比较,10%含药血清组及卡托普利组可以显著下调Grp78、Caspase-12蛋白表达水平(P0.01),2组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论心衰合剂可下调内质网应激相关蛋白Grp78、Caspase-12表达水平,提示心衰合剂通过减轻内质网应激防止细胞发生凋亡,保护心肌细胞。     

葛根素对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡及CHOP通路的影响研究

目的:探讨葛根素对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡及CHOP通路的影响。方法:设置MC3T3-E1组,葛根素低、中、高剂量组。MC3T3-E1组常规培养,葛根素低、中、高剂量组分别用浓度为20.0μg/mL、40.0μg/mL、80.0μg/mL的葛根素溶液干预培养。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)法测定各组MC3T3-E1细胞增殖水平,流式细胞法测定各组MC3T3-E1细胞凋亡水平,逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定各组MC3T3-E1细胞转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP) RNA表达水平,Elisa法测定各组MC3T3-E1细胞ATF4、CHOP、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)蛋白表达水平。结果:与MC3T3-E1组比较,葛根素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达水平均升高(P0.05)。与葛根素低剂量组比较,葛根素中、高剂量组凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达均升高(P0.05)。与葛根素中剂量组比较,葛根素高剂量组凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达水平均升高(P0.05)。结论:葛根素能拮抗高糖对MC3T3-E1成骨细胞的增殖抑制作用和凋亡促进作用;其机制与葛根素抑制ATF4、CHOP RNA及蛋白的表达拮抗了高糖环境引起的成骨细胞内质网应激,进而减轻成骨细胞氧化应激反应有关。     

栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注模型大鼠皮质内质网应激相关因子表达的影响

目的探讨栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注损伤模型大鼠皮质内质网应激相关因子m RNA表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,假手术组除不插入线栓外其余操作相同。将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。低、中、高剂量组分别予不同剂量的栝楼桂枝汤灌胃,阳性对照组给予尼莫地平混悬液灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,每日1次,连续干预7 d。采用Longa神经学评分法评定大鼠神经功能损伤程度,RTq PCR法检测大鼠缺血侧皮质组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录活化因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及其B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白-3(Caspase-3)m RNA的表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能损伤评分及大鼠皮质组织中GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3 m RNA表达明显提高(P0.01,P0.05),Bcl-2 m RNA表达降低(P0.05);与模型组比较,阳性对照组和低、中、高剂量组神经功能损伤评分及大鼠皮质组织中GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3 m RNA表达明显下降(P0.01,P0.05),Bcl-2m RNA表达提高(P0.05)。结论栝楼桂枝汤对MCAO模型大鼠具有较好的治疗作用,其作用机制可能与调控内质网应激相关因子的表达,降低内质网应激水平有关。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对受损神经元的影响

目的:从内质网应激的角度观察淫羊藿苷对受损神经元的影响,并探究其修复受损神经元的部分机制。方法:采用神经生长因子(NGF)将PC12细胞诱导分化为神经元,并使用流式细胞术测定微管相关蛋白2(MAP2)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性率进行鉴定。实验分为4组,空白组为PC12诱导分化的神经元细胞;溶剂组为PC12诱导分化的神经元+0.1%二甲基亚砜(DMSO);毒胡萝卜素组为PC12诱导分化的神经元+2μmol·L^-1毒胡萝卜素;淫羊藿苷组为PC12诱导分化的神经元+2μmol·L^-1毒胡萝卜素+0.1μmol·L^-1淫羊藿苷,使用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),葡萄糖调节蛋白78(Grp78)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CHOP,Grp78 mRNA表达。结果:与溶剂组比较,毒胡萝卜素组可抑制经NGF诱导的神经元样PC12细胞的增殖活性,可促使细胞凋亡,并能够上调CHOP,Grp78的表达(P<0.05,P<0.01);与毒胡萝卜素组比较,淫羊藿苷组可缓解毒胡萝卜素对神经元增殖活性的抑制,减少神经元凋亡,并能够下调CHOP,Grp78的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿苷可通过下调CHOP和Grp78的表达抑制内质网应激,促进受损神经元的修复。     

龙蛭汤对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞内GRP78和CHOP的影响

目的探讨龙蛭汤对衣霉素(TM)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内质网应激及其标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和特异性蛋白C增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法制备龙蛭汤含药血清,体外培养HUVEC细胞株,分为对照组(10%空白血清),TM组(10%空白血清+3μg/mL TM),TM+龙蛭汤组(10%含药血清+3μg/mL TM),龙蛭汤组(10%含药血清),继续培养6 h。使用CCK-8法比较各组细胞活力,细胞免疫荧光法和Western Blot比较各组GRP78和CHOP蛋白表达,RT-PCR法比较各组GRP78和CHOP mRNA表达。结果与对照组比较,TM组HUVEC细胞活力下降,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达增加(均P0.05);与TM组比较,TM+龙蛭汤组、龙蛭汤组HUVEC细胞活力升高,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低(均P0.05)。结论龙蛭汤可通过下调GRP78、CHOP表达,减轻细胞过度的内质网应激反应,提高HUVEC细胞活力。     

肾炎康血清对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨中药复方肾炎康含药血清对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的足细胞损伤的保护作用。方法:原代培养大鼠足细胞,随机分为正常组,模型组,肾炎康低、中、高剂量组,阳性药(厄贝沙坦)组。除正常组外,其余各组分别予以嘌呤霉素氨基核苷血清+正常大鼠血清、肾炎康低、中、高剂量血清、厄贝沙坦血清干预48 h。原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,实时定量PCR方法检测p53、Caspase-3 mRNA表达,Western blot检测细胞p53、Caspase-3蛋白变化。结果:嘌呤霉素氨基核苷作用下的各组足细胞凋亡率、p53、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常组(P0.05,P0.01);药物干预各组足细胞凋亡率、p53、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著低于模型组(P0.05,P0.01);肾炎康高剂量组足细胞凋亡率、p53、Caspase-3 mRNA及蛋白表达与厄贝沙坦组相当(P0.05)。结论:中药复方肾炎康对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与抑制p53、Caspase-3表达有关。