康复中心住院患者医院感染发病率及危险因素

目的探讨康复中心住院患者医院感染发病情况及其危险因素。方法回顾性分析某院康复中心2018年1—12月住院患者的临床资料,分析医院感染发生情况、感染部位及病原体种类,采用单因素及多因素logistic回归分析患者医院感染的危险因素。结果共收治住院患者4 118例,发生医院感染88例,95例次,医院感染发病率为2.14%,医院感染例次发病率为2.31%。脑出血患者医院感染发病率最高,为5.41%,例次发病率为6.21%。医院感染部位位于前3位的为泌尿道、下呼吸道、上呼吸道,分别占49.47%、27.37%、15.79%。95例次医院感染病例共分离出76株病原体,其中革兰阴性(G-)菌56株(占73.68%),革兰阳性(G+)菌15株(占19.74%)。多因素logistic回顾分析显示,男性、侵入性操作、意识障碍、低蛋白血症是康复科住院患者医院感染的独立危险因素(均P0.05)。结论男性患者、意识障碍、侵入性操作及低蛋白血症是康复中心住院患者医院感染的危险因素,应采取针对性预防控制措施,减少医院感染的发生。     

重组人β淀粉样蛋白1-42小规模发酵及小量纯化工艺的摸索

目的研究重组人β淀粉样蛋白1-42(rh Aβ1-42)在5 L摇瓶中的高密度发酵实验,以及小量纯化工艺的方法。方法分别从甲醇浓度、p H、诱导时间等方面对毕赤酵母重组菌株产生rh Aβ1-42的发酵过程进行了优化;通过硫酸铵沉淀目的蛋白、透析、脱盐和阴离子交换层析,对rh Aβ1-42小量精确的纯化方法进行了研究。结果确定rh Aβ1-42在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件为:在p H 6.0的条件下,以0.5%甲醇诱导72 h,经过硫酸铵沉淀目的蛋白、透析、脱盐和阴离子交换层析,rh Aβ1-42纯度可达94%以上。结论确定了rh Aβ1-42在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件,建立了小量纯化rh Aβ1-42的新方法。     

人胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

目的研究人胚胎神经干细胞的培养条件及体外分化情况。方法将新鲜分离的胚胎(自然流产胎儿4~6周,经志愿者知情同意)无菌条件下取海马,采用无血清培养基进行培养,原代培养的细胞增殖成神经干细胞球,倒置显微镜观察细胞的形态学,并用免疫荧光方法对神经干细胞进行自我更新能力(Brd U)的鉴定及特异性抗原Nestin的检测。结果培养5~7d的神经干细胞球呈桑葚样悬浮生长,呈明显的Brd U阳性反应,其具有增殖能力;神经干细胞表达了Nestin抗原阳性。结论人胚胎神经干细胞具有神经干细胞的基本特征,可进一步用于基础及临床研究。     

人碱性成纤维细胞生长因子cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

目的：克隆和表达人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF),以便进一步研究其功能。方法：从人神经胶质瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法,扩增出hbFGF cDNA片段,与pMD18-T载体连接后作DNA序列分析,并用亚克隆的方法构建pPICZα-hbfFGF,将测序正确的重组质粒用SacI线性化后电转化至毕赤酵母X-33,经PCR法、SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物,从而筛选出能够稳定、高效分泌表达hbFGF的酵母工程菌。结果：经测序证实获得的hbFGF序列与GenBank（登录号NM002006）报道的完全一致,甲醇诱导表达后培养液上清的SDS-PAGE凝胶电泳显示在相对分子质量约18 000有一蛋白条带,Western blotting结果显示表达产物与抗人碱性成纤维细胞生长因子抗体产生特异性条带,证明rhbFGF蛋白的表达。结论：成功克隆了hbFGF 基因,并在毕赤酵母体系中进行了表达。     

重组人β-淀粉样蛋白1-42在毕赤酵母中的表达与鉴定

目的：探索在毕赤酵母中表达人β-淀粉样蛋白1-42 (hAβ_1-42)的可行性。方法：以含有hAβ_1-42基因的质粒为模板，采用PCR方法扩增所需DNA片段，与毕赤酵母表达载体pPICZα连接，构建重组质粒pPICZα-hAβ_1-42 并进行DNA测序分析。将其电击转化毕赤酵母菌株X-33，经SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果：经测序证实，获得的hAβ_1-42序列与基因合成的完全一致。SDS-PAGE显示，在约4 000处有一蛋白带，Western blotting证明表达产物与抗hAβ_1-42抗体有特异性免疫反应。结论：本研究在毕赤酵母中成功地重组表达hAβ_1-42。     

rhTRAIL对黑色素瘤A-375细胞凋亡的影响

目的：研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（rhTRAIL）对黑色素瘤A-375细胞生长及诱导细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法：将培养的黑色素瘤A-375细胞分为对照组和rhTRAIL低、中、高剂量组（0.25、0.50、1.00 mg•L^-1），经不同剂量rhTRAIL作用后，观察细胞形态；MTT法检测细胞存活分数；TUNEL法检测细胞凋亡率；流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化。 结果：对照组细胞呈梭形贴壁或半贴壁生长，rhTRAIL组一部分细胞变圆，贴壁不佳，细胞数低于对照组。与对照组比较，rhTRAIL明显抑制黑色素瘤A-375的生长，1.00 mg•L^-1 组的生长抑制率最高，0.50 mg•L^-1 组次之，0.25 mg•L^-1 组最低，3组间比较差异有显著性（P<0.05 )。流式细胞检测结果显示，rhTRAIL蛋白可诱导A-375细胞凋亡，rhTRAIL低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为6.68 %、24.59 % 和28.91 %，且凋亡率随剂量增大而升高，3组间比较差异有显著性（P<0.05 )。rhTRAIL低、中、高剂量组细胞处于G₁期的百分率（45.26%、60.67%和69.10 %）明显高于对照组（37.41 %）（P<0.05 )。结论： rhTRAIL对A-375细胞生长有显著的抑制作用,呈剂量依赖性，其机制可能与细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡有关。     

重组人β-淀粉样蛋白1-42大规模发酵及纯化工艺

目的:在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达人β-淀粉样蛋白1-42(hAβ_1-42),用80 L的发酵罐大量制备hAβ_1-42。方法: 在成功构建表达载体pPICZα-hAβ_1-42并电转化至毕赤酵母X-33的基础上,筛选高表达hAβ_1-42工程菌,对发酵液的pH值、溶解氧、甲醇流加速度以及诱导表达的时间等发酵条件进行系统优化,通过阳离子交换层析和反向疏水层析对其进行纯化,实现其大规模制备。结果: 筛选出的高表达工程菌采用80 L发酵罐甲醇诱导补料批式发酵,在pH 4.0、溶解氧浓度20 %～30 %、罐内压力为10 psi、甲醇诱导48 h时产量最高可达150 mg•L^-1;纯化的hAβ_1-42经SDS-PAGE分析显示单一区带,相对分子质量约为4 200。结论:构建、筛选出高效表达hAβ_1-42的毕赤酵母工程菌,并建立稳定的发酵和纯化制备工艺。     

β淀粉样蛋白1～42促进U87细胞凋亡作用的研究

目的研究重组人β淀粉样蛋白(Aβ)1~42对人神经胶质瘤细胞U87毒性作用机制。方法用MTT检测代谢率,倒置显微镜、投射电镜以及流式细胞术技术研究Aβ1~42对U87细胞的损伤作用机制。结果用Aβ1~42处理U87细胞24 h后,Aβ1~42剂量依赖性地引起U87细胞的MTT代谢率减少。倒置显微镜及透射电镜观察发现经Aβ1~42处理的U87细胞表现出凋亡细胞的特征。流式细胞仪检测表明10、20、50μmol/L的Aβ1~42组U87细胞的凋亡率分别为35.6%,42.2%,58.1%。结论 Aβ1~42致U87细胞发生损伤主要是通过细胞凋亡的途径。     

Leo自膨式支架结合弹簧圈栓塞宽颈动脉瘤10例

目的总结Leo自膨式支架结合弹簧圈栓塞宽颈动脉瘤的技术和经验。方法回顾分析10例颅内宽颈动脉瘤病人的病例资料，瘤颈为3～5mm，宽颈不规则动脉瘤7例，梭形动脉瘤3例。均采用Leo自膨式支架结合弹簧圈栓塞技术治疗。结果9例完全栓塞，1例大部分栓塞。1例术后复查头CT发现颅内血肿，予以开颅清除血肿。6例随访3～6个月。结论在栓塞颅内宽颈动脉瘤时应用Leo自膨式支架结合弹簧圈技术，能够提高宽颈动脉瘤栓塞的安全性，阻止弹簧圈向载瘤动脉内突人，从而提高疗效。     

甲型流感病毒M2e与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

目的 将甲型流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)基因与人血清白蛋白(HSA)基因融合,以构建高效分泌表达的毕赤酵母菌株.方法 通过RT-PCR扩增HSA基因,构建pPICZα-HSA质粒,将人工合成的M2e序列与pPICZα-HSA质粒分别经BstBI 和KpnI 酶切消化后连接,构建真核表达载体pPICZα-HSA/M2e,线性化后电转化毕赤酵母X-33.用PCR法筛选Zeocin抗性阳性的克隆,SDS-PAGE和Western印迹法筛选高表达HSA/M2e菌株.结果 经RT-PCR法克隆的HSA基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致,构建的pPICZα-HSA/M2e真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆.SDS-PAGE和Western印迹分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HSA/M2e,分子量约为68 kD.结论 成功构建了分泌表达重组HSA/M2e融合蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究其生物学活性奠定了基础.