基于蛋白质组学分析色胺酮抑制小鼠乳腺癌的作用机制

目的:采用非标记定量(Label-free)蛋白质组学技术研究色胺酮抗小鼠体内乳腺癌的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-质谱联用技术检测色胺酮抗小鼠乳腺癌的表达蛋白,选择Ionoptics nano UPLC C18色谱柱(0.075 mm×250 mm,1.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脱,正离子模式,扫描范围m/z 100～1 700,使用MaxQuant 1.6.5.0进行数据库检索。采用Label-free高分辨质谱的蛋白质组学技术筛选4T1乳腺癌小鼠模型组与色胺酮(100 mg·kg~(-1))口服给药组之间的差异表达蛋白,进行色胺酮抗乳腺癌的蛋白质组学研究。结果:共鉴定出3 997个蛋白质,其中有2 911个蛋白可定量。模型组与色胺酮组共750个差异表达蛋白,其中286个蛋白上调,464个蛋白下调。基因本体分析表明,这些差异表达蛋白主要参与增殖、细胞迁移、凋亡、免疫、血管生成和炎症调节等生物学过程。京都基因与基因组百科全书通路分析进一步表明,这些蛋白主要集中于T细胞受体,B细胞受体,Toll样受体,核转录因子-κB(NF-κB),Ras蛋白,白细胞介素-17,肿瘤坏死因子,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路。结论:与色胺酮抗4T1乳腺癌作用密切相关的差异表达蛋白包括上调蛋白白细胞分化抗原14(CD14),前列腺素G/H合酶2(PTGS2),泛素蛋白连接酶E3和下调蛋白CD44,70 kDa热休克蛋白1A(HSPA1A),巨噬细胞移动抑制因子(MIF),NF-κB,核糖体蛋白S6激酶α-4(RPS6KA4)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1),提示色胺酮主要通过调节肿瘤炎症微环境来达到抑制小鼠乳腺癌的作用。     

小建中汤组方配伍效应规律分析

目的 通过正交拆方研究,分析小建中汤配伍效应规律.方法采用3因素2水平的正交实验设计交互作用分析的研究方法;以化学物质致痛和实验性脾虚模型肠推进率为检测指标;分析处方各因素水平的影响.结果镇痛作用分析以白芍甘草药对作用最强;肠推进率实验以生姜大枣作用最强;综合指标分析结果提示,小建中汤全方为最佳处方组合.结论小建中汤全方为综合分析的最佳组方.     

环维黄杨星D对实验性脑缺血的保护作用

目的：探讨环维黄杨星D(Cycloirobuxiure D，CVB-D)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤及PC12细胞缺氧性损伤的保护作用。方法：采用线栓法制成局灶性脑缺血再灌注大鼠模型和连二亚硫酸钠(Na2S2O4)引起的PC12细胞缺氧损伤模型，探讨CVB-D对模型大鼠神经行为、脑梗塞范围、脑含水量、脑指数的影响，以及其对PC12细胞缺氧样损伤的保护作用。结果：CVB-D能降低模型大鼠神经行为学评分、脑梗塞率、脑指数、脑含水量，抑制Na2S2O4造成的PC12细胞缺氧样损伤，降低LDH的漏出，增加细胞存活率。结论：CVB-D对实验性脑缺血有保护作用。     

西红花酸对压力超负荷所致大鼠心肌肥厚的影响

目的研究西红花酸对压力超负荷所致大鼠心肌肥厚的影响。方法腹主动脉部分狭窄术致心肌肥厚,采用试剂盒测定Na⁺-K⁺ ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺ ATPase的活力及羟脯氨酸的含量,SDS-PAGE检测MMPs的活力。结果 模型组ATPase活性降低更加明显,羟脯氨酸的含量明显增加,MMPs活力明显增强。西红花酸能显著提高心肌组织的ATPase活力,降低胶原的含量,抑制MMPs的活力。结论西红花酸对压力超负荷所致大鼠心肌肥厚具有一定的改善作用,抑制MMPs的活性可能是其作用机制之一。     

西红花酸对去甲肾上腺素所致原代培养心肌细胞能量代谢和凋亡的影响

目的研究西红花酸对去甲肾上腺素(NE)诱导原代培养心肌细胞能量代谢障碍和细胞凋亡的保护作用。方法1 μmol·L^-1 NE损伤原代培养的心肌细胞,检测细胞培养上清液的LDH、心肌细胞ATPase、线粒体琥珀酸脱氢酶(MSDH)的活力,线粒体膜电位的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,观察西红花酸保护作用。结果模型组细胞培养上清液LDH增加,心肌细胞MSDH和ATPase的活力降低,线粒体膜电位降低,心肌细胞凋亡率增加。西红花酸明显降低培养上清液LDH增加,提高MSDH和ATPase的活力、线粒体膜电位的水平,对心肌细胞的凋亡具有明显的保护作用。结论西红花酸对NE所致的心肌细胞能量代谢障碍和凋亡具有明显的保护作用。     

木豆枝叶的化学成分研究(Ⅱ)北大核心

目的:研究木豆枝叶的化学成分。方法:采用结晶、重结晶、正相硅胶色谱、ODS、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱、MCI柱、大孔树脂柱及HPLC等技术对木豆枝叶进行分离纯化,并采用核磁共振氢谱、碳谱及质谱等波谱学方法对所得到的化合物进行结构鉴定。结果:从木豆枝叶醇提物中分离得到11个化合物,分别鉴定为:叶黄素(1)、3β,23,28-trihydroxy-12-oleanene-23-caffeate(2)、3β,23,28-trihydroxy-12-oleanene-3β-caffeate(3)、白桦脂醇(4)、5,22-二烯-7-酮-3β-羟基豆甾烷(5)、7-oxo-β-sitosterol(6)、(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(7)、alternamide B(8)、n-butyl-β-D-fructofuranoside(9)、leonuriside A(10)、(2S)-1-O-heptatriacontanoyl glycerol(11)。结论:化合物1~11均为首次从该植物中分离得到。     

Notch信号通路在漆姑草醇提物诱导NB4细胞分化中作用

目的探讨Notch信号通路在漆姑草(HSJ)醇提物诱导人急性早幼粒白血病细胞(NB4)分化中的作用。方法实验设对照组和低、中、高剂量漆姑草组(30、60、120μg/m L);作用NB4细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB4细胞增殖抑制率;Wright-Giemsa染色法观察NB4细胞形态;Real time-PCR检测Jagged1、Notch1、c-myc m RNA表达;Western blot法检测Jagged1、Notch1、c-myc蛋白表达。结果漆姑草作用NB4细胞后,细胞增殖受到明显抑制;与对照组比较,漆姑草组NB4细胞形态向成熟细胞改变,可见核/浆比例减小,核形呈肾形核或分叶核;与对照组比较,30、60、120μg/m L漆姑草组NB4细胞中Jagged1 m RNA表达量[分别为(0.78±0.10)、(0.32±0.15)、(0.07±0.02)]降低,Notch1 m RNA表达量[分别为(1.27±0.14)、(1.39±0.23)、(1.53±0.30)]升高,c-myc m RNA表达量[分别为(0.88±0.05)、(0.67±0.02)、(0.47±0.16)]降低,差异均有统计学意义(均P0.05);与对照组比较,30、60、120μg/m L漆姑草组NB4细胞中Jagged1蛋白表达量[分别为(0.95±0.10)、(0.69±0.02)、(0.59±0.01)]降低,Notch1蛋白表达量[分别为(0.56±0.08)、(0.81±0.03)、(1.33±0.14)]升高,c-myc蛋白表达量[分别为(0.82±0.14)、(0.70±0.07)、(0.65±0.20)]降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论漆姑草能诱导NB4细胞向成熟细胞方向分化,其分化诱导作用机制可能与Notch信号通路有关。     

整合素αvβ3抑制剂Cyclo-RGDfK对纤连蛋白诱导乳腺上皮细胞间质转化的影响

目的本研究探讨整合素αvβ3抑制剂(Cyclo-RGDfK)对纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A上皮间质转化的影响。方法体外传代培养MCF-10A细胞,采用FN诱导建立上皮间质转化(EMT)模型。Western blot实验检测αv integrin、β3 integrin、上皮标志物E-cadherin和间充质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白表达;划痕修复实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 Western blot结果显示FN作用48 h后可明显增强αv integrin、β3 integrin、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,在给予Cyclo-RGDfK作用后,FN诱导的N-cadherin和Vimentin表达上调和E-cadherin表达下调被明显逆转;划痕修复实验和Transwell小室实验结果表明,FN能显著增强MCF-10A细胞迁移和侵袭能力,Cyclo-RGDfK能显著抑制FN的诱导作用。结论 Cyclo-RGDfK能抑制FN诱导乳腺上皮细胞MCF-10A的EMT过程,降低细胞的侵袭和迁移能力,其可能是治疗乳腺癌转移的潜在药物。     

基于 p-Akt/eNOS 信号的阿司匹林对 ox-LDL 诱导的人主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究阿司匹林对氧化低密度脂蛋白（ ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞（ HAEC）损伤的保护作用及对p-Akt/eNOS信号系统的影响。方法：体外传代培养HAEC,分为空白对照组、模型组及阿司匹林组,建立ox-LDL（150 mg/L,24 h）诱导的 HAEC细胞损伤模型,阿司匹林组在建模前用阿司匹林预处理1 h,利用MTT法检测HAEC存活率、LDH外漏率分析细胞损伤,测定细胞培养上清液一氧化氮（ NO）含量,蛋白印迹法及RT-PCR方法检测p-Akt、eNOS蛋白及mRNA表达。结果：与空白对照组比较,ox-LDL诱导损伤后细胞MTT值显著降低,LDH外漏明显增加,内皮细胞NO分泌与释放减少,p-Akt、eNOS的蛋白及mRNA表达下调,阿司匹林干预后能显著改善上述指标。结论：阿司匹林对ox-LDL诱导的HAEC损伤具有保护作用,其机制可能与其调控激活p-Akt/eNOS信号通路密切相关。     

哌唑嗪对去甲肾上腺素诱导心肌细胞凋亡的影响

目的：研究α受体拮抗剂哌唑嗪对去甲肾上腺素诱导的原代培养心肌细胞凋亡的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）法分析原代培养心肌细胞存活率;乳酸脱氢酶（LDH）外漏实验和吉姆萨染色实验观察原代心肌细胞损伤;JC-1免疫荧光实验检测线粒体膜电位变化;Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：NE（100 μmol·L^-1）作用于原代培养心肌细胞48 h,细胞存活率降低;LDH外漏增加;细胞形态改变,细胞数减少、胞体膨大、胞核居中、胞间间隙增大,呈明显病理学特征;线粒体膜电位降低;心肌细胞凋亡率增加。哌唑嗪明显改善去甲肾上腺素诱导的原代培养心肌细胞损伤,增加MTT值、降低LDH外漏量、改善心肌细胞病理形态、增加心肌细胞线粒体膜电位、降低心肌细胞凋亡率（P<0.05或P<0.01）。结论：哌唑嗪能显著抑制去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,本实验为α受体阻断剂改善高交感诱导心肌细胞凋亡提供实验基础与理论指导。