hTERT反义cDNA对人脑胶质瘤细胞的抑制作用

目的探讨人端粒酶催化亚基(hTERT)反义cDNA(pAdeasy-hTERT)在体外对胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法将腺病毒介导的pAdeasy-hTERT作用于人胶质瘤细胞系U251,用MTT法检测细胞存活率、端粒酶重复序列扩增法测定端粒酶活性、Westem杂交鉴定hTERT蛋白的表达、RT-PCR法检测hTERT cDNA水平、PCNA观察肿瘤细胞的凋亡情况以及用流式细胞仪对转染后肿瘤细胞的周期进行分析。结果pAdeasy-hTERT在体外明显抑制肿瘤细胞生长,降低端粒酶活性,抑制hTERT表达。结论pAdeasy-hTERT显著抑制人胶质瘤细胞生长,可成为恶性胶质瘤基因治疗的靶基因。     

膀胱肿瘤组织中端粒酶催化亚基和c-myc的表达

目的 研究膀胱肿瘤组织中端粒酶催化亚基(hTERT)和c-myc间的表达及关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对27例膀胱肿瘤组织、16例癌旁组织和16例正常膀胱粘膜同时测定hTERT和c-myc表达,分析两指标在3种组织的表达差异和相关性。结果 TCC组织hTERT和c-myc的表达阳性率分别为100.0％(27/27)和66.7％(18/27);癌旁组织两指标的阳性率均为 37.5％,而正常膀胱粘膜分别为 0和 25.0％;hTERT和c-myc两指标在膀胱肿瘤组织中的阳性表达有相关性(P<0.01)。结论 hTERT较c-myc作为TCC的诊断指标更灵敏和特异;两指标在TCC中的阳性表达具有相关性。     

川芎嗪对银屑病皮损端粒酶的影响

目的：研究川芎嗪(TMP)对银屑病皮损端粒酶的影响；方法：采用免疫组织化学方法检测川芎嗪对银屑病患者皮损端粒酶的表达；结果：与病例组比较，川芎嗪(40mg／kg)可使银屑病患者皮损处端粒酶表达降低；结论：川芎嗪能明显抑制银屑病皮损端粒酶的表达。     

力尔凡联合顺铂对恶性腹腔积液临床疗效及端粒酶活性的影响

目的探讨力尔凡对恶性腹腔积液的临床治疗价值及对端粒酶活性的影响。方法48例恶性腹腔积液患者分为治疗组和对照组。治疗组(28例)采用力尔凡联合顺铂腹腔内注入,对照组(20例)单用顺铂腹腔内注入。分别在治疗前,治疗后1周、2周及3周,观察腹腔积液消失情况,评定疗效,采用半定量TRAP-银染法检测腹水细胞端粒酶活性。结果治疗组临床治疗有效率89.3%,对照组为60.0%(P<0.01),随着治疗时间的延长,端粒酶活性逐渐下降。结论力尔凡联合顺铂治疗恶性腹腔积液具有协同作用,其对端粒酶活性的抑制可能参与了以上机制,检测端粒酶活性可作为评价其疗效的敏感生物学指标。     

端粒酶活性在人膀胱肿瘤组织中表达的临床意义

目的：探讨不同临床病理类型的膀胱肿瘤及癌旁组织端粒酶活性表达及临床意义，方法：以改良TRAP法测定91例膀胱肿瘤组织标本端粒酶活性表达。结果：83例膀胱移行细胞癌组织中78例检测到端粒酶活性，阳性率为94％，其对应的癌旁组织也有14％的检出率，8例膀胱乳头状瘤组织中4例检测到端粒酶活性，阳性率为50％，其对应的癌旁组织检出率为12％，端粒酶活性在不同临床病理类型的膀胱肿瘤及癌旁组织中表达差异无显著性意义（P＞0．05），结论：膀胱肿瘤及癌旁组织端粒酶活性的检测对肿瘤的诊断有重要意义。     

端粒酶突变体对肝癌细胞端粒酶活性的作用

目的　观察端粒酶突变体对肝癌细胞端粒酶活性和生长抑制的作用。方法　利用质脂体转染法在培养的肝癌细胞中导入端粒酶突变体，并与维甲酸和人参皂甙对照，利用TRAP－银染方法对不同时期肝癌细胞进行了端粒酶活性的测定，并观察各期细胞生长情况。结果　在加入端粒酶突变体后肝癌细胞端粒酶活性明显降低，细胞出现明显凋亡现象，其作用效果与维甲酸基本相同。结论　端粒酶突变体对肝癌细胞的抑制作用可能是通过抑制端粒酶活性途径实现的。     

癌性胸腔积液端粒酶活性的检测

目的：探讨端粒酶活性水平检测对癌性胸腔积液的诊断价值。方法：采用Telomerase-PCR-ELISA法检测了30例癌性胸腔积液及21例良性胸腔积液的端粒酶活性水平，并与细胞学检查比较结果：癌性胸腔积液端粒酶活性阳性率76．6％，结核性胸腔积液20％（3／15），其他病因胸腔积液0％（0／6），癌性胸腔积液端粒酶活性高于细胞学检查率36．6％（P＜0．005），两者平行试验阳性率83．3％。结论：端粒酶活性的检测可能成为诊断癌性胸腔积液的重要辅助手段。     

银染端粒重复序列扩增法定量检测端粒酶活性的研究

目的：探讨运用简便、快速及无放射性污染的银染粒重复序列扩增法（silver staining telomeric repeat amplification protocol,SS-TRAP）定量检测端粒酶活性。方法：运用SS－TRAP法检测了293细胞、经加热处理的293细胞、空白对照及典型乳腺癌组织、良性乳腺病变标本中端粒酶活性，其结果予以定量。结果：该法有检测出10个以上293细胞中端粒酶活性，热处理及空白对照均为阴性；乳癌组织标本中银染条带清晰可见，而良性病变中未见端粒酶阳性条带。结论：非核素银染TRAP法可用于端粒酶活性定量检测，与TRAP法相比，同样具有较高敏感性和特异性，但更快速、简便。     

神经干细胞的端粒酶活性与其增殖分化的关系

目的探讨体外培养的神经干细胞端粒酶活性与细胞增殖、分化的关系,以及细胞分化后端粒酶逆转录酶的表达情况。方法采用无血清培养法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞；通过免疫荧光细胞染色鉴定神经干细胞；细胞计数法检测细胞的增殖情况；TRAP-ELISA法测定神经干细胞的端粒酶活性：RT-PCR法和Western-blot法测定细胞分化前后的端粒酶逆转录酶的表达。结果从新生大鼠脑皮质分离培养的神经干细胞具有端粒酶活性；体外培养12周内,神经干细胞的端粒酶活性未见变化,细胞的增殖速率亦未见明显不同；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,端粒酶逆转录酶的mRNA和蛋白质也均未见表达。结论在体外培养过程中,大鼠脑神经干细胞的端粒酶活性和细胞增殖速率未见变化；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,可能是由于端粒酶逆转录酶停止表达所致。     

幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系。方法慢性胃炎伴萎缩者16例,伴肠化生者15例,伴中、重度不典型增生者14例,胃癌19例共64例为研究对象。采用快速尿素酶试验、Warthin-Starry银染色检测幽门螺杆菌,采用S-P法检测人端粒酶催化亚单位(hTERT)蛋白表达,采用TUNEL染色法原位检测细胞凋亡。结果(1)萎缩性胃炎、肠化生、不典型增生和胃癌组织中hTERT蛋白表达率分别为25.00%、46.67%、64.29%和78.95%,呈递增趋势。Hp阳性患者hTERT蛋白表达率为77.42%,显著高于Hp阴性患者(33.33%,P<0.01)。(2)Hp阳性伴hTERT蛋白阳性患者细胞凋亡指数为9.57±5.01,显著高于Hp阴性伴hTERT蛋白阳性患者(6.01±5.31,P<0.05)。结论(1)端粒酶激活可能参与了胃黏膜上皮细胞恶性转化的全过程。Hp感染与端粒酶活性密切相关。Hp感染可能是激活端粒酶的重要机制之一。(2)Hp感染既可激活端粒酶,引发细胞永生化,又可以诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,进而增加了胃黏膜的不稳定性和癌变的危险性,这可能是Hp致癌的主要机制之一。