SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结直肠癌中Tiam-1和HPA-1基因的表达

目的：检测Tiam-1基因和HPA-1基因在结直肠癌组织中的表达水平,探讨两者与结直肠癌侵袭转移及预后的关系。方法：选取2009年8月-2010年1月我院行手术治疗的结直肠癌患者53例。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Tiam-1 mRNA及HPA-1 mRNA在结直肠癌组织、癌旁组织（距癌2cm）及远离结直肠癌的手术切缘正常组织中（距癌5cm以上）的表达水平,并分析两者与结直肠癌临床病理参数的关系。结果：HPA-1 mRNA和Tiam-1 mRNA在结直肠癌中的表达水平（35.87±12.30,40.79±9.32）显著高于癌旁组织（13.13±6.71,12.39±5.38）和正常组织（4.06±3.55,6.09±4.86,P均〈0.05）,癌旁组织中二者的表达水平高于正常组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。Tiam-1和HPA-1的基因表达水平在肿瘤的高/中分化和低分化之间,T1～T2和T3～T4之间,有淋巴结转移和无淋巴结转移之间、有血行转移和无血行转移之间及Ⅰ～Ⅱ和Ⅲ～Ⅳ期之间的差异均有统计学意义（P均〈0.05）。Spearman等级相关分析证明了Tiam-1与HPA-1的表达呈正相关趋势（OR=0.46,P=0.048）。结论：Tiam-1 mRNA和HPA-1 mRNA在结肠癌组织中呈高表达,且二者的表达增强可促进结肠癌的侵袭转移,联合检测Syndecan-1及HPA-1对于指导结肠癌临床治疗及判断预后有重要价值。     

力尔凡联合顺铂对恶性腹腔积液临床疗效及端粒酶活性的影响

目的探讨力尔凡对恶性腹腔积液的临床治疗价值及对端粒酶活性的影响。方法48例恶性腹腔积液患者分为治疗组和对照组。治疗组(28例)采用力尔凡联合顺铂腹腔内注入,对照组(20例)单用顺铂腹腔内注入。分别在治疗前,治疗后1周、2周及3周,观察腹腔积液消失情况,评定疗效,采用半定量TRAP-银染法检测腹水细胞端粒酶活性。结果治疗组临床治疗有效率89.3%,对照组为60.0%(P<0.01),随着治疗时间的延长,端粒酶活性逐渐下降。结论力尔凡联合顺铂治疗恶性腹腔积液具有协同作用,其对端粒酶活性的抑制可能参与了以上机制,检测端粒酶活性可作为评价其疗效的敏感生物学指标。     

胃蛋白酶原及其亚群对胃癌早期诊断及预后判断的意义

目的探讨血清胃蛋白酶原(PG)及其亚群(PGⅠ、PGⅡ)与胃癌病人早期诊断及术后复发的关系。方法采用放射免疫分析法测定胃癌病人及正常对照组血清PGⅠ、PGⅡ含量,并对两者联合检测进行综合评价。结果胃癌病人血清PGⅠ含量及PGⅠ/PGⅡ比值明显低于正常对照组,早期胃癌即表现有显著性差异,而进展期胃癌则下降更显著(t′=11.84~14.95,t=15.82~40.27,P<0.01)。胃癌病人根治性手术后血清PGⅠ及PGⅡ的含量明显下降,根治性全胃切除术后病人血清胃蛋白酶原含量很低,胃癌复发后PGⅠ及PGⅡ均明显升高(t′=4.60~15.51,t=4.72,P<0.01)。结论监测PGⅠ及PGⅠ/PGⅡ比值变化对早期胃癌筛选有一定意义,可用于胃癌术后复发的监测。     

奥沙利铂联合氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸治疗局部进展期胃癌临床研究

目的:评价奥沙利铂、5氟尿嘧啶(5FU)和甲酰四氢叶酸(CF)联合新辅助化疗治疗局部进展期胃癌的近期疗效和毒副反应。方法:选择2000年3月～2004年4月我科住院的胃癌患者42例入组,术前接受化疗,方案为:奥沙利铂130mg/m2,d1;5FU500mg/m2,d1～d3;CF300mg/d,d1～3。每3个周为1个周期,共2个周期。观察新辅助化疗后肿瘤原发病灶的缓解情况,并观察毒副反应。结果:42例患者中有38例获得手术切除,其中26例获得根治性切除,19例肿瘤原发病灶明显缩小,14例肿瘤TNM分期降低。毒副反应主要为白细胞减少、腹泻、恶心、呕吐、脱发、肝功能异常,经对症及营养支持治疗后均能缓解。结论:奥沙利铂联合5FU与CF新辅助化疗在局部进展期胃癌的治疗中近期疗效显著,耐受性良好。     

肿瘤相关巨噬细胞在结肠肿瘤中的浸润及意义

目的：了解结肠肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的浸润情况,并探讨其浸润程度的临床意义。方法：采用免疫组织化学染色的方法,用CD163标记巨噬细胞,光学显微镜下计数阳性染色细胞。结果：结肠癌组织中TAMs计数高于结肠腺瘤组织,结肠腺瘤组高于癌旁正常组织（P均〈0.05）,TAMs浸润程度与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结和远处转移等有关（P均〈0.05）。结论：TAMs在结肠癌组织中浸润较多,且在其发生发展中起重要作用,并促进其侵袭、转移,可作为临床评估结肠癌病情的新指标。     

吲哚美辛对原代培养胃癌细胞端粒酶活性的调节作用

目的:探讨吲哚美辛对原代培养胃癌细胞端粒酶活性的影响,研究其抗肿瘤的作用机制。方法:常规组织块培养法进行胃癌原代细胞培养,取终浓度为200、400及600μmol/L的吲哚美辛作用于原代培养胃癌细胞后,用MTT比色法测定细胞的生长抑制率,采用半定量-TRAP银染法检测端粒酶活性,流式细胞学检测Bcl-2表达水平。结果:不同浓度的吲哚美辛对原代培养胃癌细胞的增殖均有抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);对胃癌细胞的端粒酶活性有抑制作用,其作用呈时间-剂量依赖性;端粒酶活性的降低与Bcl-2水平下降有关。结论:吲哚美辛能抑制胃癌细胞的增殖,降低端粒酶活性,作用机制与Bcl-2水平下降有关。     

肿瘤相关巨噬细胞计数、基质金属蛋白酶-2及 Ki-67的表达与结直肠癌预后的关系

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其病死率仅次于肺癌和乳腺癌［1］。近年来,肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage,TAM）成为研究热点,但在结直肠癌中研究鲜有报道。已有研究证实,恶性肿瘤中基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）及细胞增殖相关蛋白 Ki-67表达含量越高,细胞浸润转移、增殖能力越强,预后越差［2-3］。本研究通过检测 TAM 计数、MMP-2和 Ki-67在结直肠癌中的表达,拟探讨这些指标对结直肠癌侵袭转移增殖及预后的影响。     

多药耐药基因MDR1在乳腺癌中的表达及意义

我院2000年11月～2001年7月采用荧光定量RT-PCR法检测了47例乳腺癌及5例乳腺纤维腺瘤、10例癌旁正常组织中MDR1基因的表达，现报告如下。     

端粒酶反义基因对紫杉醇诱导原代胃癌细胞凋亡的增敏作用

目的：探讨端粒酶反义寡核苷酸（PS－ASODN）与紫杉醇（TAXOL）联合应用对原代胃癌细胞凋亡作用的影响。方法：常规组织块培养法进行胃癌细胞原代纯化培养．取第3代对数生长期细胞进行实验。各组在培养24h及48h分别加入相同剂量的培养液；终浓度：3μM的PS-ASODN。3μM的N-ASODN，1.0μM的TAXOL。作用24h后再分别在PS-ASODN组及N-ASODN组加入终浓度为1．0μM的TAXOL；分别于培养后24，48，72，96h收集各组细胞。以台盼蓝拒染法计算各组细胞生长抑制率，观察PS-ASODN联合TAXOL对原代胃癌细胞生长的影响；流式细胞学观察细胞凋亡率及细胞周期变化。结果：终浓度为3μM的PS-ASODN作用于原代胃癌细胞24h后加入TAXOU1．0μM．能明显抑制胃癌细胞增殖，同时流式细胞学检测到凋亡峰，细胞受阻于G2／M期．作用48．72，96h的凋亡细胞百分率（34．8％，44．6％及50.6％）明显高于TAXOL组及N-ASODN＋TAXOL组，差异有统计学意义（P〈0．05），其作用呈时间依赖性及序列特异性。结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN可促进TAXOL诱导的胃癌细胞凋亡．对胃癌具有重要治疗价值。     

应激状态下大鼠肠屏障功能损伤过程中MMP-13、LN的改变及意义

目的探讨应激状态下大鼠肠黏膜基质金属蛋白酶-13（MMP-13）和层粘连蛋白（LN）的改变及意义。方法Wistar大白鼠60只,随机分为3组,每组20只。实验组制备肠缺血再灌注模型,对照组只进行同样腹部手术操作但不夹闭肠系膜上动脉,正常组不手术。6h后处死大鼠,取距回盲部15cm处肠管1cm,常规组织切片,苏木精-伊红染色观察肠黏膜组织细胞学形态;用免疫组织化学方法染色显示肠黏膜组织或细胞中LN、MMP-13的表达情况,并用VIDAS图像分析系统进行半定量分析。结果苏木精-伊红染色显示：实验组与对照组相比,肠壁变薄,上皮细胞水肿明显,部分坏死脱落,中性粒细胞及淋巴细胞浸润。免疫组织化学染色显示：实验组肠黏膜组织中MMP-13表达较对照组增高,基底膜LN表达较对照组降低,差异有显著性（t=3.31、3.46,P〈0.01）,而对照组与正常组相比差异无显著性（P〉0.05）。结论缺血再灌注可使肠黏膜组织中MMP-13水平表达增高,进而使其降解底物LN水平降低,肠黏膜萎缩及通透性增大,导致肠屏障功能损伤。