一种朊蛋白错误折叠循环扩增方法的建立

目的建立一种类似于PCR的蛋白质扩增方法-蛋白错误折叠循环扩增技术(PMCA),用于朊病毒病脑组织中PrPSc的检测。方法将不同浓度的羊瘙痒因子263K毒株原液与正常仓鼠脑组织匀浆混合,经反复孵育/超声,共10~15个循环。WesternBlot检测扩增产物中蛋白酶K抗性PrPSc信号。结果在本研究试验体系下,263K毒株可以利用仓鼠脑组织为基质在体外迅速复制。所建立的PrPSc-PMCA技术可检测到10-5稀释的毒株原液中的PrPSc。与常规的脑组织免疫印记方法相比,敏感度提高了105~106倍。研究还显示PrPSc还可利用小脑和脑干为基质进行体外扩增复制。结论成功建立了PrPSc-PMCA技术,为朊病毒病的早期诊断和朊病毒生物学特性的研究提供了一种新的手段。     

不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究

目的 研究不同剂量羊瘙痒因子263 K经颅内注射感染仓鼠后,在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关.方法 以胶质纤维酸性蛋白(glial fibrill aryacidic protein,GFAP)作为星形胶质细胞增生的分子标志物,采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达,经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异.结果与正常对照相比,不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高,但各感染剂量组间无显著差异.结论 不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似,与感染剂量及潜伏期无关联性.     

无锡市成年男性生育健康状况和生育保健服务需求

目的了解无锡市成年男性的生育健康现状和生育保健服务需求。方法以无锡市市区20岁以上的成年男性为调查对象,分层抽取1 200人进行问卷调查。结果1 133名完成问卷的成年男性中,17．2％在过去一年中患有一种或多种生殖系统疾病;总的患病率随着年龄增加而增加;不同年龄男性常见的问题不同;62．7％的成年男性希望了解更多的生育保健知识。62．2％的成年男性认为有必要进行生育健康教育;大多数男性认为宜在婚前教育和初中阶段开展生育健康教育;不同年龄男性对生育保健服务的内容、方式和时间的需求不同,但对服务人员的需求基本相同。结论无锡市成年男性中存在一定的生育健康问题,对生育保健服务有着强烈的需求,不同年龄男性的需求有所不同。因此,应针对不同年龄男性的需求开展生育健康教育和生育保健服务。     

我国唐氏综合征疾病负担定性分析

目的:通过定性研究方法,客观、全面地评价唐氏综合征患者和家庭的疾病负担,为相关政策制定提供依据。方法:采用卫生服务入户调查的方法,通过半结构化访谈收集定性资料,运用扎根理论进行分析。结果:唐氏综合征给患者和家庭带来了沉重的疾病负担,使家庭陷入心理和经济的双重困境。结论:建议建立健全社会支持网络,营造关爱、支持和帮助智残人群的良好社会氛围。     

核转录因子-B(p65)在羊瘙痒因子139A感染小鼠脑组织中变化的研究

目的 研究NF-B（p65）在羊瘙痒因子139A感染小鼠脑组织中的变化。方法 通过蛋白质免疫印迹法及免疫组织化学的方法检测p65在139A感染的脑组织均浆中的含量变化。利用免疫荧光方法检测p65在神经元及胶质细胞中的分布情况。结果 在139A感染终末期小鼠脑组织均浆中，p65含量下降，差异有统计学意义。对感染不同时间点的动态分析结果显示，p65含量呈先升高随后逐渐降低趋势。免疫组织化学显示，139A感染终末期小鼠大脑皮层p65含量明显下降。免疫组织荧光显示在正常和139A感染终末期小鼠脑组织中，p65与神经元细胞存在共定位现象。结论 NF-B（p65）在小鼠中枢神经系统中主要分布于神经元细胞，在139A感染的小鼠终末期脑组织中，p65总量明显下降，提示在139A感染的小鼠脑组织中，NF-B（p65）出现了变化，在疾病进程中发挥一定作用。     

人朊蛋白相关蛋白Shadoo的表达、纯化及抗体的制备

目的克隆、表达和纯化人朊蛋白相关Shadoo（SHO）蛋白并制备抗Shadoo的多克隆抗体。方法提取仓鼠各组织的mRNA，分析SHO基因在仓鼠各组织中转录水平的差异;提取人DNA，PCR方法获得人SHO基因，克隆至融合表达载体，在大肠埃希菌中表达人SHO蛋白并纯化;以纯化蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清，用Western blot方法分别检测与重组及内源性SHO蛋白的免疫反应性。结果SHO基因在仓鼠各组织中的转录水平差异很大，脑组织转录水平高。在大肠埃希菌中表达了分子质量单位为37 ku的人SHO融合蛋白，制备的SHO蛋白抗体可与重组的SHO蛋白反应，可识别内源性的SHO。结论成功表达纯化人SHO融合蛋白并制备了抗SHO抗体，为研究SHO和正常朊蛋白之间的关系打下初步基础。     

2018年中国克–雅病监测网络病例特征分析

  目的  了解2018年中国克–雅病监测网络中12个省份的发病情况、流行病学和临床特征。  方法  对我国克–雅病监测网络获得的可疑克–雅病病例的临床及流行病学资料进行分析,收集患者脑脊液及血液样品,采用Western blot检测脑脊液中14-3-3蛋白,提取全血基因组DNA并利用聚合酶链式反应及测序方法对PRNP基因进行129位和219位氨基酸多态性及基因突变的分析。  结果  2018年共监测克–雅病病例537例,其中散发型确诊诊断病例2例（0.37%）,临床诊断病例212例（39.48%）,疑似诊断病例13例（2.42%）,遗传型病例16例（2.98%）,致死性家族型失眠症5 例（0.93%）,格斯特曼综合征2例（0.37%）。 病例报告无季节聚集性,长久居住地呈散在分布,职业分布广泛。 确诊诊断和临床诊断病例年龄中位数为64（34～87）岁,男女性别比为1.19∶1;疑似诊断病例年龄中位数为63（39～76）岁,男女性别比为0.86∶1。 快速进行性痴呆为最常见的首发症状。 517份血液样品PRNP基因的检测结果显示,其中507例129位氨基酸为M/M纯合子,510例219位氨基酸为E/E纯合子。  结论  2018年我国监测到的克–雅病病例的报告时间、长久居住地、职业、性别比例以及年龄分布均符合散发型克–雅病的发病特点。     

我国散发型克-雅病失能等级及权重初步评定

目的评定我国散发型克–雅病（sCJD）的失能等级及权重。方法以六级社会功能分级标准制定我国sCJD失能分级标准,通过德尔菲法、专家视觉模拟评分法（VAS）获取失能权重。结果德尔菲法得到sCJD平均失能权重为0.920,专家VAS得到sCJD失能权重中位数为0.850。结论sCJD患者健康状况差、失能权重高,应给予相应的社会关注,加大朊病毒领域研究,以早日获得防治方法。