尿素对幽门螺杆菌生长的影响研究

目的 :研究尿素对幽门螺杆菌生长的影响。方法 :在幽门螺杆菌培养基中分别加入 3种浓度 (5 mmol/ L,10 mmol/ L和 2 0 m mol/ L )的尿素 ,然后将培养基 p H分别调至 3.5、4 .5、5 .5。将 10株 Hp分别接种于这 9种培养基中 ,以确定最佳条件组合。之后采用最佳条件进行胃黏膜活检标本 Hp的培养。结果 :10株 Hp在 9种含尿素培养基中以尿素浓度为 10 mmol/ L、p H为 4 .5时生长最好 ,其他 8种与之比较差异极为显著 (P<0 .0 1) ,5 7份胃镜活检标本分别接种于尿素浓度为 10 mm ol/ L、p H为 4 .5时生长最好 ,其他 8种与之比较差异极为显著 (P<0 .0 1) ,5 7份胃镜活检标本分别接种于尿素浓度为 10 mmol/、p H 4 .5培养基和 p H 7.0不含尿素的普通 Hp培养基中 ,32份标本 (5 6 .1% )在尿素培养基中培养阳性 ,其中 2 2份 (38.6 % )在普通培养基中培养阳性。结论 :含有适当浓度尿素的培养基可用于胃黏膜 Hp的分离培养。     

半巢式PCR技术检测牙菌斑唾液及胃黏膜中幽门螺杆菌

本文通过半巢式PCR对 82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃黏膜中的幽门螺杆菌 (Hp)进行了检测。 82例患者中活动期十二指肠溃疡患者 2 4例 ,慢性浅表性胃炎 2 7例 ,慢性萎缩性胃炎 31例 ,其中男性 4 2例 ,女性 4 0例 ,平均年龄 4 2 .3岁。半巢式PCR首先以 1对引物扩增出磷酸葡萄糖胺变位酶基因 (phosphogluco saminemu tasegene ,glmM) 75 6bp的片段作为模板 ,再以半巢式引物扩增出 4 96bp的最终产物。引物 0 :5′ CGCGAGCCACAACCCTTTTGAAG 3′ ;引物 1:5′ CGCGCTCACTTGCAAAGCGCACAC 3′;引物 2 :5′…     

流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌方法的建立和应用

目的建立全血白细胞吞噬白念珠菌的流式细胞术检测方法。方法绘制白念珠菌生长曲线后,取生长对数中期的白念珠菌,以活体细胞示踪荧光探针二乙酰羧基荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记,与以PC5标记的CD45单克隆抗体预标记的全血白细胞,在37℃分别反应10、30、60min(MOI≈10∶1),以流式细胞术观察CD45阳性细胞对白念珠菌的吞噬情况。结果白念珠菌在液体酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)中37℃、50mL/LCO2培养,第5~11h为对数生长期。10mmol/LCFDA-SE染色30min,可使白念珠菌均匀着色;CD45阳性细胞和标记的白念珠菌作用10、30、60min,CD45阳性细胞中中性粒细胞的吞噬率分别为(80.1±6.1)%、(83.8±7.7)%和(92.3±11.2)%;单核细胞的吞噬率为(11.2±3.6)%、(15.8±4.4)%和(27.7±6.8)%,淋巴细胞作为无明显吞噬作用内参,其吞噬率为(0.9±0.3)%、(0.8±0.4)%和(5.2±1.6)%。结论成功建立流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌的方法,全血白细胞与白念珠菌共孵育30min是较为合适的作用时间。     

野战（应急）快速检验系统生化分析模块性能的综合评价

目的：对北京倍肯公司研发的野战（应急）快速检验系统生化分析模块（SP4430）基本性能进行综合评价。方法：对野战（应急）快速检验系统生化分析模块分别在室内环境与模拟野战环境下进行精密度评价,并对其在两种不同环境下的检测结果进行对比;对野战（应急）快速检验系统生化分析模块与日本OLYMPUS AU5421全自动生化分析仪所测定结果进行比较,分析二者之间有无差异。结果：生化分析模块GLU、UA、ALB、REA、ALT、TBIL、LDH、AMS在室内的CV（%）分别为2.08、2.89、1.56、2.38、4.10、2.36、3.19、6.33;在模拟野战环境下的CV（%）分别为2.31、3.12、2.11、2.32、4.80、2.57、4.51、7.14;GLU（mmol/L）、UA（umol/L）、ALB（g/L）、CREA（umol/L）、ALT（U/L）、TBIL（umol/L）、LDH（U/L）、AMS（U/L）在室内结果分别为5.91±177;2.03、269.50±177;111.50、35.89±177;7.55、94.08±177;22.150、42.71±177;27.62、10.30±177;5.75、173.60±177;59.99、67.45±177;25.06,在模拟野战环境下的结果分别为6.33±177;2.31、273.38±177;120.56、34.90±177;6.99、94.85±177;23.15、37.73±177;24.64、10.18±177;5.71、170.43±177;61.74、68.02±177;25.14;所有项目室内与模拟野战环境的检测结果采用配对t检验比较,P值均＞0.05;结果表明生化分析模块与OLYMPUS AU5421所测GLU、UA、ALB结果差异无统计学意义（P＞0.05）,而CREA、ALT、TBIL、LDH、AMS所测结果差异有统计学意义（P＜0.01）。两种仪器所有检测结果的相关系数均＞0.90。结论：在室内、模拟野战环境下,野战（应急）快速检验系统生化分析模块精密度良好,结果比较无显著差异;生化分析模块与实验室常规生化分析仪检测结果相关性良好,由于检测方法不同,部分结果差异较大,但仍然具有可比性。     

应用纯化抗原检测尿液和血清抗幽门螺杆菌抗体的比较

目的 :对幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染患者尿液和血清抗Hp抗体进行比较研究 ,探讨尿液抗Hp抗体检测的临床意义。方法 :分别以多株Hp超声上清、重组Hp热休克蛋白A亚单位 (rHspA)纯品和重组Hp热休克蛋白尿素酶B亚单位 (rUreB)纯品混合物为抗原 ,采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法对 12 6例患者的尿液抗HpIgG和血清抗HpIgG、抗HpIgA同时进行检测。结果 :使用rHspA和rUreB混合纯品进行检测 ,其特异性和敏感性明显优于Hp超声上清。诊断Hp感染的优劣顺序为 :血清IgG、尿液IgG、血清IgA。结论 :尿液的抗体检测可用于Hp感染诊断 ,尤其是尿液抗HpIgG是一个诊断Hp感染的敏感、特异指标。     

不同消毒方法对生物制品的杀菌效果和破坏作用观察

为观察不同消毒方法对奶制品中细菌的杀灭效果和对抗体的破坏作用 ,采用细菌培养检验和紫外分光光度法进行了实验室研究。结果 ,用 135℃远红外干热处理 2～ 3s ,可将袋装鲜奶中幽门螺杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓假单胞菌全部杀灭 ,但抗体球蛋白亦完全被破坏 ;用 6 5℃水浴加热处理 2 .5h ,可完全杀灭上述 4种细菌 ,而且不破坏抗体球蛋白 ;用 5 0 0Gy剂量的60 钴辐照处理 ,与 6 5℃水浴处理效果相同 ;10 0℃煮沸 1min ,结果与135℃远红外干热处理结果一致。结论 ,用 6 5℃水浴加热处理 2 .5h和用 5 0 0Gy剂量的60 钴辐照处理鲜奶 ,既可杀灭细菌 ,又不破坏其中抗体成分。     

人J链基因的克隆及原核表达研究

目的 用基因工程技术在大肠埃希菌中表达人J链基因重组蛋白,为研究其功能及开发检测J链抗原的试剂盒奠定基础.方法 提取人脾细胞总RNA,以此为模板,通过RT-PCR的方法获得J链基因.将该基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,构建J链表达载体,测序证实正确后转化至E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE,表达产物经免疫印迹法(western blot,WB)鉴定其免疫反应性.结果 测序结果证实笔者成功地获得了J链基因,其序列与GenBank中报道完全一致.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白在Ecoli BL21中获得表达,其相对分子量约为15KD左右,表达的蛋白量约占菌体蛋白的15%.结论 成功克隆了人免疫球蛋白J链基因,并在大肠杆菌中获得表达.     

各种胆红素对氧化酶法测定血清尿酸浓度的影响

目的通过分析不同胆红素对尿酸(UA)氧化酶方法的干扰,探讨各种胆红素对过氧化物酶偶联Trinder反应的UA氧化酶测定方法的影响。方法我们制备了24种含有不同浓度UA的血清,每种血清含有不同浓度的未结合胆红素(Bu)、结合胆红素(Bc)、δ胆红素(δ-Bil),使用美国EKTACHE 750XRC analyzer生化分析仪测定各种胆红素浓度,使用日本7170全自动生化分析仪测定血清中的UA浓度。结果来自Bc的干扰最大,当浓度为400μmol／L时,回收率只有56．4％;Bu的干扰较小,当浓度400μmol／L时,回收率仍达87．4％;δ-Bil的干扰最小,随着血清中δ-Bil浓度的提高,对UA测定基本无影响,回收率保持在93．4％以上。结论Bu、Bc、δ-Bil对UA氧化酶测定方法影响程度不同．在实际工作中应予以重视。