四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征研究

目的 探讨四川盆地(重庆、四川地区)流行的结核分枝杆菌(MTB)群体遗传学特征。方法 对413株源自四川盆地的MTB进行长序列多态性(LSP)谱系鉴定, 采用χ²检验分析不同谱系MTB在人群中的分布差异。对菌株进行15位点数目可变串联重复序列基因分型, 评价各位点的分辨力。构建N-J树分析其系统进化;构建最小跨度树以模拟群体菌株的遗传结构;采用分子方差分析不同谱系MTB的群体间遗传分化;采用贝叶斯模型计算菌株最近共祖年代。结果 通过LSP可将413株MTB分为两大谱系, 其中北京谱系占56.2%(232/413), 欧美谱系占43.8%(181/413)。两谱系MTB在人群中的分布(性别、年龄、民族以及菌株耐药性)差异无统计学意义(P>0.05)。北京谱系MTB的N-J树呈放射状分布, 最小跨度树中有72.4%(168/232)的菌株被划分到同一“克隆复合群”;欧美谱系MTB的N-J树呈枝状分布, 最小跨度树中呈现出多个“克隆复合群”。北京谱系MTB在该地区有显著的群体间遗传分化(F_ST=0.018 91, P<0.05), 而欧美谱系MTB群体间遗传分化不显著(F_ST=0.005 19, P>0.05)。欧美谱系MTB中最大菌株复合群的最近共祖年代为723(95%CI:517～946)年。结论 北京谱系和欧美谱系MTB在四川盆地以“互相对抗”形式流行;两谱系MTB的群体间遗传分化存在差异;欧美谱系MTB的侵入可能与一次历史事件(约720年前的战争)有关。     

决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶的影响

该文研究决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平的影响。取SD大鼠,口服灌胃受试药物后,处死,用冰冷生理盐水灌流肝脏,提取大鼠肝脏微粒体、肝脏总RNA和总蛋白,采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LCMS)技术对大鼠肝脏中CYP1A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1各亚酶的酶活性进行测定,并应用荧光定量PCR技术和Western blot对上述亚型的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果表明,酶活性方面,决明子水提液组与空白组比较可明显诱导CYP1A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1的酶活性,其中决明子低剂量组对CYP2D2有明显的抑制作用,中、高剂量组对CYP2D2有明显的诱导作用,且都呈剂量依赖性增加,但对CYP3A1的诱导不呈剂量依赖性;mRNA表达方面,决明子水提液对CYP1A2,2C11,2D2,2E1mRNA的表达具有显著诱导作用,其中对CYP1A2,2D2,2E1诱导作用呈剂量依赖性,与酶活性水平具有一致性,对CYP2B1,3A1没有明显作用;蛋白表达方面,决明子水提液对CYP2C11,2E1的表达也具有诱导作用,但没有统计学差异。决明子水提液对CYP450同工酶不同程度诱导或抑制作用,特别是对于CYP2C11,2E1亚型酶,酶活性与mRNA,蛋白表达水平具有一致性,提示当与这些酶底物合并用药时,尤其是与CYP2C11,2E1代谢有关的药物合用时,应充分考虑到潜在的有益和不利的药物相互作用。     

四氢小檗红碱及其前药的比格犬药代动力学研究

目的建立同时定量检测比格犬全血中抗焦虑新药四氢小檗红碱(THB)及其前药9-乙酰四氢小檗红碱硫酸盐(ATHBS)的LC-MS/MS方法,并研究四氢小檗红碱在比格犬体内的药代动力学及生物利用度。方法建立检测全血中THB和ATHBS的LC-MS/MS方法,进行专属性、线性、回收率、稳定性、精密度和准确度等方法学验证。比格犬单次口服和静脉注射3 mg.kg-1ATHBS后考察了前药与活性代谢产物THB的血药浓度-时间变化,应用WinNonlin软件得到药代动力学参数和口服生物利用度。结果 ATHBS和THB在2～2 000μg·L-1的浓度范围内呈良好的线性(r>0.9985),定量下限均为2μg·L-1。THB和ATHBS的回收率分别大于78.74%和75.52%,日内和日间精密度(RSD)均在10.79%之内,准确度(RE)在-10.3%～3.92%的范围内。比格犬单次静注和口服ATHBS后,前药均能快速转化成为活性产物,血中浓度在60 min降至检测限之下。静注组THB在2 min达峰,Cmax为(605.99±102.88)μg·L-1,消除半衰期T12为(7.03±1.77)h,AUC(0-t)为(718.64±143.01)h·μg·L-1。口服组THB在15min达到(77.71±26.60)μg.L-1的峰值,药-时曲线在6 h出现第2个小峰,T 12为(5.89±3.95)h,AUC(0-t)为(179.62±91.64)h·μg·L-1,口服生物利用度为26.2%。结论建立的LC-MS/MS定量方法快速、简便、灵敏,可用于同时研究前药和THB的药代动力学。比格犬口服或静注ATHBS后,前药在体内可快速转化成为活性产物,THB达峰迅速,血药浓度消除较快,口服生物利用度较好。     

异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1的mRNA表达。应用已知底物非索非那定、普伐他汀、甲氨蝶呤和阿昔洛韦评价转运体的功能。将已知底物或受试药物在4℃和37℃分别与肝细胞孵育不同时间,LC-MS/MS定量测定细胞摄取量,考察温度和时间对底物摄取的影响。由浓度依赖的摄取实验,计算得到Km、Vmax和主动摄取率等参数。在肝细胞模型上,将转运体的阳性抑制剂与异鼠李素10μmol·L-1和阿魏酸50μmol·L-1共孵育2min,观察抑制剂对受试药转运的影响。结果悬浮培养大鼠原代肝细胞上表达有转运体Oatp1,Oatp2,Oat2和Oct1,并能介导已知底物的主动摄取。转运体的mRNA表达水平随着时间的延长而快速下降,4h的表达水平约为0h的10%。转运体对已知底物摄取活性也随时间呈下降趋势,但程度显著低于表达水平,4h的活性约为0h的28.7%～71.4%。在经验证的肝细胞模型上,异鼠李素的4℃和37℃摄取无显著差异,主动转运率为14.6%。阿魏酸在37℃的摄取量显著高于4℃,主动转运率为84.1%;Oct阳性抑制剂奎尼丁100μmol·L-1能显著抑制阿魏酸的肝摄取,抑制率为64.9%。结论成功建立了大鼠原代肝细胞摄取模型,并用底物进行了验证。异鼠李素通过被动扩散进入肝细胞,阿魏酸的肝细胞摄取则以主动转运为主。     

不同可变数目串联重复序列组合对中国流行结核分枝杆菌分辨力的评价研究

目的 在规范化的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）可变数目串联重复序列（variable number of tandem repeats,VNTR）基因分型的基础上,构建我国31个省（自治区、直辖市）VNTR数据库,每个省优化一套VNTR位点组合,为我国结核病预防控制策略的制定提供科学依据。方法 对2007－2008年全国结核病耐药性基线调查的4 116株MTB15位点VNTR（15-VNTR）基因分型。汉高指数（Hunter-Gaston Index,HGI）分析每个位点的分辨率。依据谱系流行特征,以分辨率高和稳定性强为原则,为各省设计一套VNTR优化组合（12-VNTR、10-VNTR、8-VNTR和5-VNTR）,采用HGI和成簇率进行评价。结果 完成了涵盖率为96.36%（3 966/4 116）MTB完整15-VNTR图谱。发现QUB11b、MIRU26等7个高分辨率位点;QUB26、MIRU16、Mtub21、QUB11b在部分地区遗传稳定性差。内蒙古自治区、重庆市、黑龙江省的最优组合为10-VNTR,其他各省的最佳组合为8-VNTR。结论 VNTR数据库的建立将推动全国范围MTB传染源的追踪;各省优化VNTR组合的推出有助于当地结核病疫情的监测和群体遗传学的研究。     

同时定量检测水胺硫磷和水胺氧磷的液相色谱-串联质谱法及应用

目的建立同时测定大鼠全血中水胺硫磷及其活性代谢产物水胺氧磷的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析方法,用于毒代动力学研究中血药浓度的测定。方法采集大鼠全血样品后即刻用4倍体积冰冷乙腈沉淀蛋白。待测物用Zorbax SB C18柱（2.1 mm×50 mm,1.8μm）分离,以含有0.1%甲酸的水和甲醇为流动相系统进行梯度洗脱。采用ESI源正离子多反应监测模式分析,水胺硫磷、水胺氧磷和内标三唑磷的定量离子对分别为m/z 231→121、274→215和314→162。结果水胺硫磷和水胺氧磷在5μg/L～5 mg/L浓度范围内线性良好,最低定量限为5μg/L,回收率在63.1%～77.8%的范围内,准确度和精密度符合生物样品的检测要求。大鼠静脉注射3 mg/kg水胺硫磷后,水胺硫磷在血中很快下降,消除半衰期为22.2 min。活性代谢产物水胺氧磷的生成也较快,10～15 min达到（257.91±42.00）ng/ml的平均峰值,消除半衰期为17.6 min。水胺硫磷和水胺氧磷的AUC0~t分别为（528.62±49.15）和（191.11±33.23）h.μg/L。结论本研究首次建立了同时定量测定大鼠全血中水胺硫磷和水胺氧磷的LC-MS/MS分析方法,方法的专属性好、灵敏度高,适用于水胺硫磷及水胺氧磷在大鼠体内的毒物代谢动力学研究。     

北京市昌平区肺结核发病数ARIMA模型预测

目的 探讨自回归滑动平均混合模型(autoregressive integrated moving average model, ARIMA)模型在北京市昌平区肺结核发病数预测中的应用,阐述建模过程并预测2015年昌平区肺结核发病数,为制定防治策略合理配置资源等提供参考。方法 采用全国结核病网络专报系统中2009-2014年现住址为北京市昌平区的肺结核报告发病数数据,通过模型识别、参数估计、检验诊断及模型评价,建立昌平区结核病发病数的ARIMA模型,并预测其2015年肺结核发病数。结果 现住址为昌平区的肺结核发病数预测模型为ARIMA(0,1,1)(0,1,1)12,预测2015年的新发报告肺结核患者总数为851例,模型2015年第一、二季度(1-6月)预测误差率为1.65%,不到10%,模型预测精度较好。结论 ARIMA模型适用于昌平区肺结核发病数的早期预测。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的左旋紫堇达明及其药代动力学研究

目的：建立快速、灵敏的LC-MS/MS分析方法定量测定大鼠血浆中左旋紫堇达明（L-CDL）的浓度,经系统方法学验证后,应用于该药的大鼠药代动力学研究。方法以普萘洛尔为内标,以水（含0.1%甲酸与5 mmol/L的甲酸铵）和乙腈（含0.1%甲酸）为流动相,血浆样品中的L-CDL和内标经C18（2.1 mm×750 mm,3μm）柱分离后,质谱电喷雾离子化源（ESI）正离子多反应监测（MRM）方式分别对离子对m/z 342?192.1和m/z 260?116.2进行检测。方法验证包括专属性、标准曲线与定量下限、批内和批间精密度、准确度、基质效应、提取回收率、稳定性。结果 L-CDL在大鼠血浆样品的定量线性范围为1~5000 ng/ml,最低定量下限为1 ng/ml,批内和批间精密度（RSD）＜10%,回收率93.5%~102.8%,基质效应108.3%~112.5%。大鼠经胃给予L-CDL 10 mg/kg后的主要药动学参数Cmax、T1/2、AUC0-24分别为：（557.8±330.1）ng/ml、（7.04±3.93）h、（2408±630）h·ng/ml。结论建立的LC-MS/MS方法简便、快速、灵敏,适用于L-CDL在大鼠体内的药代动力学研究。     

抗HIV候选化合物DAPA-7035的大鼠药代动力学研究

目的建立检测大鼠血浆中抗HIV候选化合物DAPA-7035的LC-MS/MS方法,并将其应用于大鼠体内药代动力学研究。方法血浆样品用甲醇沉淀蛋白处理;色谱分离在资生堂CAPCELL PAK C18柱（MGⅢ,150 mm×2.0 mm,5μm）上用含0.1%甲酸的甲醇和水为流动相梯度洗脱,流速为0.3 ml/min。定量分析在Agilent 6430 Triple Quad LC-MS/MS上采用电喷雾离子化电离源（ESI）、正离子多反应监测的方式进行,检测离子对分别为m/z 382.2→197（DAPA-7035）和m/z 390.1→208（内标）。将建立的方法应用于大鼠静注和口服DAPA-7035的药代动力学研究。结果 DAPA-7035在0.1～2500 ng/ml的浓度范围内呈良好的线性关系（r2=0.9985）,最低定量限为0.1 ng/ml,方法的回收率〉80%,日内和日间精密度和准确度符合生物样品的检测要求。大鼠静注（5 mg/kg）和口服（15 mg/kg）DAPA-7035后,静注和口服的消除半衰期分别为3.77 h和5.34 h。大鼠口服后DAPA-7035的吸收较快,血浆浓度在1.6 h左右达到（298.4±42.9）ng/ml的峰值,口服生物利用度为15.3%。结论本研究首次建立了特异、灵敏、简便快捷的定量检测血浆DAPA-7035的LC-MS/MS方法,成功应用于DAPA-7035的大鼠药代动力学和生物利用度研究。     

同时定量检测水胺硫磷和水胺氧磷的液相色谱-串联质谱法及应用

建立同时测定大鼠全血中水胺硫磷及其活性代谢产物水胺氧磷的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,用于毒代动力学研究中血药浓度的测定。方法 采集大鼠全血样品后即刻用4倍体积冰冷乙腈沉淀蛋白。待测物用Zorbax SB C₁₈柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)分离,以含有0.1%甲酸的水和甲醇为流动相系统进行梯度洗脱。采用ESI源正离子多反应监测模式分析,水胺硫磷、水胺氧磷和内标三唑磷的定量离子对分别为m/z 231→121、274→215和314→162。 结果 水胺硫磷和水胺氧磷在5 μg/L～5 mg/L浓度范围内线性良好,最低定量限为5 μg/L,回收率在63.1%～77.8%的范围内,准确度和精密度符合生物样品的检测要求。大鼠静脉注射3 mg/kg水胺硫磷后,水胺硫磷在血中很快下降,消除半衰期为22.2 min。活性代谢产物水胺氧磷的生成也较快,10～15 min达到(257.91±42.00)ng/ml的平均峰值,消除半衰期为17.6 min。水胺硫磷和水胺氧磷的AUC_0~t分别为(528.62±49.15)和(191.11±33.23)h ·μg/L。结论 本研究首次建立了同时定量测定大鼠全血中水胺硫磷和水胺氧磷的LC-MS/MS分析方法,方法的专属性好、灵敏度高,适用于水胺硫磷及水胺氧磷在大鼠体内的毒物代谢动力学研究。