基于全基因组测序的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌耐药基因、毒力因子及同源性分析

摘要：目的 通过应用全基因组测序(whole genome sequencing, WGS)技术分析某三级医疗机构耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不 动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)的耐药基因、毒力因子及同源性。方法 收集该院2020年1月至3月 重症监护病房(Intensive care unit, ICU)、神经外科分离的11株医院感染CRAB菌株，通过二代测序平台进行全基因组测序, 应用 基因组流行病学中心(Center for genomic epidemiology, CGE)ResFinder 4. 0软件分析其耐药基因型，并应用MORPHEUS在线制作 热图，应用毒力因子数据库(virulence factors of pathogenic bacteria, VFDB)VFanalyzer软件筛选毒力因子，应用MLST软件检测菌 株的ST型，应用Kaptive软件检测荚膜型，应用CSI Phylogeny 1. 4软件及FigTree v1. 4. 4软件构建最大似然树(maximum likelihood tree, MLT)以分析其同源性。结果 11株CRAB对亚胺培南、美罗培南、头孢菌素、环丙沙星均呈现耐药，而对阿米卡星、左氧 氟沙星耐药的菌株株数较少。11株CRAB共检测出18种耐药基因，11株同时携带碳青霉烯酶耐药基因blaOXA-23和blaOXA-66，β-内酰 胺酶耐药基因以blaTEM-1D和blaADC-25为主，大部分菌株携带多种外排泵相关耐药基因及抗菌药物修饰酶耐药基因。11株CRAB均携 带多种毒力因子，包括外膜孔蛋白、脂多糖、生物膜、外排泵、磷脂酶和效应蛋白等，如OmpA、Lps、Csu、Pga、Ade、Plc、 Bas、Bau、Ent、Hem、Aba、Bfm、Pbp和Kat等。11株CRAB均为ST2-K22型，同源性分析结果显示C组内同源性关系相近，存 在院内传播的可能。结论 该院CRAB的耐药性、毒力特征复杂多样，同源性分析显示该院存在1种优势克隆株，该克隆株有医 院内传播的风险。     

纳米碳联合99mTc-硫胶体SPECT/CT显像在乳腺癌前哨淋巴结识别定位中的应用价值

目的 探讨纳米碳联合^99mTc-硫胶体SPECT/CT显像在乳腺癌前哨淋巴结（SLN）识别定位中的应用价值。方法 收集诊断为早期乳腺癌患者94例。根据示踪方法随机分为纳米碳联合^99mTc-硫胶体SPECT/CT显像双示踪组（44例）和纳米碳单示踪组（50例）,比较2组患者SLN检出量、检出率、准确率、灵敏度及假阴性的差异率。结果 双示踪组SLN平均检出数为（3.4±1.33）枚，SLN检出率、准确率、灵敏度、假阴性率分别为90.9%、55.0%、85.7%、7.1%、2.8%;单示踪组SLN平均检出数为（3.08±1.3）枚，SLN检出率、准确率、灵敏度、假阴性率分别为88%、65.9%、64.3%、8.6%、9.5%,差异无统计学意义（P>0.05）。对2组患者肿瘤病理类型、年龄、肿瘤位置、分期、分子分型、月经情况及BMI分层比较，SLN检出率差异无统计学意义（P>0.05）;再对肿瘤直径进行分层，肿瘤直径>2 cm的患者，双示踪组SLN检出率显著高于单示踪组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 两种示踪法在乳腺...     

经聚乙烯亚胺钝化的荧光碳点负载阿霉素抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移侵袭的治疗研究

目的研究利用经聚乙烯亚胺（PEI）钝化的荧光碳点（CD）装载阿霉素（DOX）进行药物递送，旨在增加DOX对非小细胞肺癌的治疗作用，减少DOX的心肌毒性。 方法通过一步微波加热法将甘油和PEI的混合物制备成CD-PEI，并通过静电效应将DOX装载至CD-PEI。采用CCK8实验检测CD-PEI-DOX对非小细胞肺癌细胞A549的增殖能力的影响；Transwell实验评估CD-PEI-DOX对A549细胞迁移侵袭能力的影响；最后通过体内动物实验评估CD-PEI-DOX的心肌毒性以及对非小细胞肺癌皮下肿瘤生长的抑制效果。 结果体外细胞实验证实，对比单纯的DOX处理组，CD-PEI-DOX对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移侵袭能力的抑制作用更为显著。体内实验证实，CD-PEI-DOX纳米复合物治疗组小鼠心肌细胞结构完整，并且能有效抑制小鼠皮下肺癌肿瘤的生长。 结论经PEI钝化的荧光碳点负载阿霉素能显著提高DOX对非小细胞肺癌的治疗效果，并减少DOX对心脏的毒性作用。运用CD-PEI纳米颗粒改善化疗药物递送的治疗方案取得了初步证实，这可为肺癌化学治疗提供新思路，具有广大的临床应用前景。     

基于全反式维甲酸修饰白蛋白的紫杉醇纳米给药系统的构建及体外抗肿瘤效果

目的 以全反式维甲酸(RA)修饰白蛋白为载体构建紫杉醇白蛋白纳米给药系统，探讨其对肝癌HepG2细胞的体外增殖抑制效果。方法 将RA与人血清白蛋白(HSA)共价结合，构建载体材料HSA-RA,利用傅立叶变换红外(FT-IR)光谱对其结构进行确证，紫外—可见吸收光谱测定RA偶联度；自组装法制备负载抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)的载药纳米粒PTX@HSA-RA,纳米粒度仪检测其粒径分布和表面Zeta电位，透射电镜观察其形貌；HPLC法研究其药物负载和释放行为；以HepG2细胞为模型，MTT法考察PTX@HSA-RA的体外细胞毒性，利用流式细胞仪和共聚焦显微镜研究其体外细胞摄取情况；利用HepG2细胞构建3D细胞模型(MTCSs),考察PTX@HSA-RA对其体外生长抑制作用。结果 PTX@HSA-RA呈规整的球形，具有较高的包封率和载药量。HSA与RA投料摩尔比为1∶20时制备得到的PTX@HSA-RA平均粒径为(155.2±2.9)nm,表面Zeta电位为(-20.9±1.0)mV,具有良好的稳定性和pH值敏感性药物缓释效果。PTX@HSA-RA可被HepG2细胞快速、持续摄取，且表现出较游...     

妥洛特罗贴剂佐治婴幼儿毛细支气管炎的疗效观察

目的 研究妥洛特罗贴剂(阿米迪)佐治婴幼儿毛细支气管炎的临床疗效和安全性分析。 方法 选取2017年11月—2018年2月在蚌埠医学院第一附属医院儿科就诊的毛细支气管炎的患儿共103例,按照就诊日期的单双日分为治疗组52例(单日就诊)和对照组51例(双日就诊)。2组患儿均给予雾化吸入布地奈德混悬液及热毒宁注射液抗病毒治疗,若合并有细菌感染者加用敏感抗菌药物,必要时给予吸氧、镇静、止咳、化痰等对症支持治疗。治疗组患儿在常规治疗的基础上加用妥洛特罗贴剂,而对照组患儿在常规治疗的基础上加用硫酸沙丁胺醇溶液雾化吸入;比较治疗前后2组患儿临床表现改善情况、住院时间,同时通过临床表现及相关实验室检查观察是否出现其他严重不良反应。 结果 治疗组的有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组患儿的咳嗽好转时间、喘憋缓解时间、肺部哮鸣音消失时间、患儿住院时间均显著短于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);且治疗组患儿不良反应发生例数较对照组明显少,程度亦相对较轻,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 妥洛特罗贴剂佐治婴幼儿毛细支气管炎疗效显著,安全性较高,使用方便且不良反应相对较少,值得在临床上推广。      

细胞-纳米药物载体递送系统在肿瘤诊疗中的应用

目前，针对肿瘤治疗药物在体内应用中的局限性，出现了许多高效的药物递送系统的研究，其中纳米药物载体技术和细胞药物载体技术较为热门，并取得了许多成果。纳米药物载体具有的优点，如防止药物发生降解及灭活，增加药物的靶向性，降低药物的毒副作用，可量产等。细胞载体更是利用细胞本身固有的特性，具有主动靶向肿瘤部位、低免疫原性和穿过体内生理屏障等优点，在药物递送研究中有广阔的应用前景，但是仍然存在很多问题及不足。研究人员创造性地将两者结合，使他们的优势互补，极大地强化了递送药的效率，增加了体内靶向性，降低了周围组织的细胞毒性等。本文从近几年来细胞-纳米药物载体系统研究的文献中，总结了红细胞、干细胞、单核/巨噬细胞、T细胞、树突状细胞（dendritic cell，DC）等作为纳米药物细胞载体的优缺点及目前的应用现状。     

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因分析

目的研究某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)在细菌耐药方面的分子流行病学特征,为CRE的防控提供依据。方法收集某院2013—2017年细菌室保存的CRE,对其进行多位点序列分型(MLST)、药敏试验、全基因序列测定,选取部分CRE中携带的碳青霉烯耐药基因进行基因环境分析。结果共收集62株CRE,成功复活51株;其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)30株,耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)9株,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(CRECL)6株,耐碳青霉烯类其他肠杆菌6株。CRKP MLST主要包括3株ST147、2株ST11;CREC MLST主要包括3株ST167;CRECL MLST主要包括3株ST93、2株ST88。51株CRE对氨苄西林、头孢噻肟的耐药率最高,均为100%。耐碳青霉烯类耐药基因分布:1株携带blaKPC-2,14株携带blaIMP-4,18株携带blaNDM-1,22株携带blaNDM-5,2株携带blaNDM-9,10株携带blaOXA-1,10株携带blaOXA-10,2株携带blaOXA-23,2株携带blaOXA-66。分析blaNDM-1、blaNDM-5、blaNDM-9、blaIMP-4不同菌种的基因环境,发现几种耐药基因各自的基因环境都与已报道的基因环境相似,无明显的菌种间差异性。结论耐药基因通过水平传播能稳定存在于不同的CRE菌株中,对医院感染防控造成一定的威胁。     

左旋肉碱修饰的壳聚糖-硬脂酸协载槲皮素口服紫杉醇纳米胶束的制备、表征及在体肠循环研究

目的 制备左旋肉碱修饰的壳聚糖-硬脂酸（LC-SA/CS-SA）纳米胶束，包载紫杉醇（PTX）且协载槲皮素，考察胶束特性，并以大鼠在体肠循环评估给药系统对PTX口服吸收的促进作用。方法 将硬脂酸（SA）通过酰胺化反应接枝于壳聚糖（CS），形成共聚物CS-SA；采用核磁共振H谱、红外光谱鉴定产物结构；以PTX为主药，槲皮素为辅药，采用激光粒径分析、Zeta电位分析和HPLC分析分别考察了胶束的粒径、Zeta电位、载药量、包封率；透射电子显微镜观察胶束形貌；芘荧光探针法测定LC-SA/CS-SA胶束的临界胶束浓度（critical micelle concentration，CMC）；透析袋法考察胶束的体外释放行为；大鼠在体肠吸收实验评估载药胶束的促吸收作用。结果 红外与核磁结果表明SA通过酰胺键接枝于CS；协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束呈类球形，粒径为（148.3±1.7）nm，多分散系数（PDI）为0.16±0.07，Zeta电位为（24.600±0.167）mV，CMC为14.31 μg/mL；体外释放结果表明，与市售紫杉醇注射剂相比，协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束、LC-SA/CS-SA载PTX胶束具有明显缓释效应；大鼠在体肠吸收实验表明，协载槲皮素的LC-SA/CS-SA胶束对载药PTX的胃肠吸收具有显著促进作用。结论 构建的协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束性能优良，促进了PTX的大鼠肠吸收，具有增强药物口服吸收潜力。