结核病患者外周血淋巴细胞亚群的检测

目的 通过检测肺结核(TB)患者外周血淋巴细胞亚群的比例变化,来探讨其在结核病发展中的意义.方法 用流式细胞仪分别检测原发型肺结核(Ⅰ型,TB)组(15例),血行播散型结核(Ⅱ型,IB)组(15例)、正常对照组(25例)的外周血淋巴细胞表面标记:CD4、CD8、CD3、CD69、CD25、CD16 CD56、CD19.结果 Ⅰ型结核病人的T细胞亚群的辅助性T细胞(Th)、细胞毒T细胞(Tc)、总T细胞的分布比例与正常对照无显著性差异,而活化的Th,Tc比例都比正常组高(P<0.05).调节性T细胞(Treg)高于正常组(P<0.05),自然杀伤细胞(NK细胞).自然杀伤T细胞(NKT细胞),B细胞都无显著性差异.Ⅱ型TB组与对照组比较Th减少(P<0.05),Tc增加(P<0.05),总T细胞无差异,NK细胞减少(P<0.05),NKT细胞增加(P<0.05),B细胞无显著性差异,活化Th,Tc和Treg高于Ⅰ型IB组(P<0.05).结论 淋巴细胞亚群在结核病患者外周血中分布失衡,可能与疾病的发展相关.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的检测和意义

目的检测系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞（Treg）的百分比，并分析其与疾病活动的相关性。方法采用流式细胞仪检测28例SLE患者（其中活动组18例）及22名正常对照组的外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Treg的百分比，同时评估SLE疾病活动指数（SLEDAI）及检测血抗dsDNA水平，分析相关性。结果SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的百分比较对照组降低（P〈0．05），以活动组尤为明显，CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Treg的百分比与SLEDAI呈明显的负相关（P〈0．01），同时显示血抗dsDNA阳性组较阴性组患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Treg的百分比显著下降（P〈0．01）。结论SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Treg的百分比在活动期下降为明显，其在SLE的发病机制中可能起到重要的作用。     

抗核抗体在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的评价抗核抗体（ANA）在原发性肝癌中的表达及临床意义,为原发性肝癌的临床诊治及疾病预后提供相关依据。方法收集72例原发性肝癌患者血清、130例慢性肝炎患者血清及200例健康人的血清。采用间接免疫荧光法测定ANA、采用放射免疫法测定甲胎蛋白（AFP）,观察3组ANA表达情况及与AFP水平的关系。结果 ANA在原发性肝癌患者中表达阳性率明显高于肝炎组,且2组均高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0.01）。肝癌组ANA类型主要表现为斑点型、核仁型、着丝点型及胞浆型。原发性肝癌患者中ANA表达阳性的患者2年生存率明显低于ANA阴性患者。结论 ANA在肝癌、肝炎中均有明显表达,ANA在肝癌患者中的表达阳性率要远高于肝炎患者,ANA是影响肝癌预后的独立因素,原发性肝癌患者ANA表达阳性者提示预后不良。     

Th1/Th2在结核性脑膜炎发病过程中的变化及临床意义

目的 分析结核性脑膜炎患者CD4⁺T淋巴细胞的亚型(Th1/Th2)细胞及其Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4在血及脑脊液中的分布特点,探讨系统及局部的Th1/Th2免疫应答在人类结核性脑膜炎病理生理过程中的可能作用。方法 利用流式细胞术测定结核性脑膜炎组治疗前、治疗3个月后外周血及脑脊液标本中Th1/Th2的百分含量,同时,应用流式微珠阵列(cyto-metric bead array,CBA)测定血清及脑脊液标本中IFN-γI、L-4的浓度,并测定30例健康对照组外周血中Th1/Th2细胞的百分含量与IFN-γI、L-4的浓度进行对照。结果 (1)结核性脑膜炎组治疗前外周血Th1、Th2细胞水平、血清IFN-γ、IL-4的浓度(中位数)治疗前分别为3.8%±0.9%、2.03%±1.51%、29.05、55.05 ng/L;治疗3个月后分别为4.0%±0.8%、1.6%±1.1%、30.60、52.70 ng/L;健康对照组为6.3%±2.6%、1.7%±0.6%、65.95 ng/L、50.30 ng/L。同健康对照组比较,结核性脑膜炎组外周血中Th1水平、血清IFN-γ浓度显著降低(P<0.05),结核性脑膜炎组治疗前与治疗3个月后外周血中Th1、Th2水平、血清IFN-γI、L-4浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)25例结核性脑膜炎组治疗前、后脑脊液标本中Th1细胞水平分别为8.4%±4.6%、7.1%±4.4%,治疗3个月后脑脊液中Th1细胞水平显著降低(P<0.05)。(3)30例结核性脑膜炎组治疗前、后脑脊液标本中IFN-γ的浓度分别为176.45 ng/L、75.50 ng/L,治疗后明显降低(P<0.05)。结论 结核性脑膜炎组外周血Th1应答比健康对照组低;结核性脑膜炎组治疗后Th1应答比治疗前减弱,他们之间的因果关系尚待进一步研究。     

雷公藤多苷对IgAN大鼠外周血γδT细胞分泌TGF-β_1功能的影响

目的:研究雷公藤多苷对IgA肾病(IgAN)大鼠外周血γδT细胞分布及表达转化生长因子β1(TGF-β1)功能的影响。方法:复制IgAN大鼠模型,并予雷公藤多苷干预治疗,同时给予泼尼松对照,运用流式细胞仪检测各组用药前后外周血γδT细胞比率、放射免疫法检测血清IgA水平;以抗TCRγδ单克隆抗体(mAb)固相法,体外选择性地扩增γδT细胞。在体外培养的条件下,以抗CD3抗体刺激48h后,用ELISA法测定培养体系中TGF-β1的表达。结果:雷公藤多苷能抑制血清IgAN外周血γδT细胞与血清IgA的升高,同时还能抑制γδT分泌TGF-β1的过度分泌。结论:通过降低血清IgAN外周血γδT细胞与血清IgA水平,同时抑制γδT分泌TGF-β1的过度分泌,可能是雷公藤多苷治疗IgAN的作用机制之一。     

系统性红斑狼疮患者树突状细胞对Th1/Th2细胞分化的影响

目的探讨系统性红斑狼狼疮（SLE）患者树突状细胞对Th1/Th2细胞亚群分化的影响。方法淋巴细胞分离液分离获得SLE患者外周血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD14细胞,联合应用rhGM- CSF、rhIL-4和rhTNF-α诱导分化树突状细胞成熟。在培养的第9天,流式细胞术检测表型,细胞增殖/毒性剂盒分析树突状细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。ELISA法检测培养上清液中IL-12和IL-10的表达。诱导的成熟树突状细胞与健康对照组淋巴细胞共培养5d后,佛波酯+离子霉素+莫能霉素刺激培养4h,进行T淋巴细胞表面抗原及胞质内细胞因子染色,流式细胞仪检测Th1、Th2的比例。结果 SLE患者诱导培养的树突状细胞其CD1a的表达降低（P＜0.05）,HLA- DR、CD80、CD86的表达均明显升高（P＜0.05）。活动组与非活动组的树突状细胞HLA- DR、CD80、CD86的表达有统计学差异（P＜0.05）。SLE患者诱导培养的树突状细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强（P＜0.05）。活动组与非活动组的树突状细胞刺激同种异体淋巴细胞也有所差异（P＜0.05）。SLE患者诱导培养的树突状细胞分泌IL-12的水平均明显降低（P＜0.05）;分泌IL-10的水平明显升高（P＜0.01）,活动组与非活动组的树突状细胞分泌IL-12和IL-10的水平差异无统计学意义（P＞0.05）。活动组的树突状细胞与对照组淋巴细胞共培养后Th1的比例明显降低（P＜0.01）,Th2的比例差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SLE患者诱导的树突状细胞表型增加,刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力增强,分泌IL-12降低,IL-10升高。SLE患者树突状细胞功能的异常可能导致了Th1细胞分化不足,在SLE发生、发展过程中起重要作用。     

原发性干燥综合征患者外周血CD4＋CD25＋high调节性T细胞的表达及意义

目的原发性干燥综合征（PSS）患者外周血CD4＋CD25＋high调节性T细胞的表达及意义。方法用流式细胞仪检测25例PSS患者及20名健康人外周血CD4＋CD25＋high调节性T细胞的水平,同时测定PSS患者外周血活动性指标C反应蛋白（CRP）及IgG,分析PSS患者外周血CD4＋CD25＋high调节性T细胞的表达水平及其与活动性指标的相关性。结果PSS患者外周血CD4＋CD25＋high调节性T细胞占CD4＋百分比显著低于健康人组（P〈0.05）,且与活动性指标CRP及IgG呈负相关（P〈0.05）。结论提示PSS患者外周血CD4＋CD25＋high调节性T细胞的表达不仅与PSS发病有关,且与病情活动有相关性。     

系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞与Th17细胞失衡的研究

目的 通过检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞(regulaory T cells,Treg)与Th17细胞的比例,来探讨Treg/Th17细胞的失衡在SLE发病中的作用.方法 采用流式细胞仪检测52例SLE患者(其中活动组38例)及22名健康对照者的外周血CD4+ CD25highT细胞、Th17细胞的比例,并分析与疾病活动指数(systemic lupus erythematosus activity index,SLEDAI)的相关性.结果 SLE患者外周血CD4+ CD25highT细胞和Th17细胞占CD4+T细胞的比例与对照者相比,差异无统计学意义(P＞0.05),且与SLEDAI无相关性.CD4+ CD25highT细胞与Th17细胞的比率在活动组SLE中下降尤为明显(P＜0.05),且与SLEDAI呈明显的负相关(P＜0.05).结论 活动性SLE患者外周血Treg与Th17细胞的比率明显下降,并与疾病活动密切相关,说明两群细胞的失衡可能在SLE的发生和发展中起重要作用.     

mRNA定量法检测结核分枝杆菌药物敏感性的应用评价

目的评价应用mRNA定量法进行结核分枝杆菌利福平、异烟肼药物敏感性分析的临床应用价值。方法应用定量聚合酶链反应（PCR）方法检测三株结核分枝杆菌标准株在利福平、异烟肼处理24小时后85B mRNA表达水平的变化;并以不同的结果判断标准,比较本方法和绝对浓度法对87株临床分离菌株利福平、异烟肼药敏试验检测结果的差异性。结果利福平或异烟肼敏感株在相应的药物处理24小时后85B mRNA表达水平明显下降,分别为无药对照的0.01%和0.35%以下,而耐药株无明显变化。以85B mRNA的表达水平下降到无药对照的1%以下为敏感,大于10%为耐药,1%～10%之间为可疑进行判断,本方法与绝对浓度法有一致的检测结果。结论85B mRNA可以作为结核分枝杆菌药物敏感性试验的分子标志,应用85B mRNA检测结核分枝杆菌的耐药性是一种快速有效的检测方法。