TIMP-2逆转录病毒载体的构建及表达

目的构建人组织型基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP-2）编码序列基因逆转录病毒表达载体，转染人单核细胞白血病细胞株，为探讨TIMP-2的生物学功能奠定基础。方法根据基因库中已公布的序列设计引物，用PCR方法扩增出人TIMP-2编码序列基因片段，用限制性内切酶及T4连接酶将目的片段插入MSCV逆转录病毒载体中。采用酶切和PCR鉴定及测序后经脂质体介导转染至PT67包装细胞中，以病毒上清感染单核细胞白血病细胞株SHI-1，G418筛选，极限稀释法挑选单克隆细胞株，定量PCR和Western Blotting检测TIMP-2的表达。结果TIMP-2基因克隆进逆转录病毒载体MSCV中，经酶切、PCR和DNA测序证实重组逆转录病毒载体构建正确，病毒上清感染SHI-1细胞，经G418筛选并挑选出单克隆细胞，经实时定量PCR和Western Blotting检测发现SHI-1细胞中TIMP-2 mRNA及蛋白表达明显上调。结论成功构建了高表达TIMP-2的SHI-1细胞，可对其生物学行为作进一步研究。     

小干扰RNA抑制c-Myc表达对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰乳腺癌MCF-7细胞的c-Myc表达，了解c-Myc对肿瘤细胞增殖和凋亡的作用。方法将c-Mye siRNA，经IApofectamineTM2000脂质体转染MCF-7细胞后，实时定量RT-PCR和Western Blotting法检测细胞cMyc mRNA和蛋白的表达，MTT法和流式细胞仪检测干扰后细胞的增殖和凋亡水平。结果转染后MCF-7细胞的c-Myc的mRNA与蛋白表达明显减弱，增殖能力显著降低。洲亡率明显提高。结论运用RNAi技术，可以有效地干扰MCF-7细胞c—Myc的表达，抑制细胞增殖，并诱导细胞渊亡。     

黑龙江省11个边境口岸蜱类调查

〔目的〕调查黑龙江省11个边境口岸蜱的种群组成。〔方法〕采用人工小时布旗法采集蜱。〔结果〕在黑龙江省11个边境口岸采获蜱3926只,计3属4种。林缘的优势种群为森林革蜱(95.9%);针阔混交林为全沟硬蜱(46.1%)和森林革蜱(31.8%)。不同口岸的蜱种组成有所不同。绥芬河口岸蜱密度指数最高(93.1%只/人工小时)。不同生境蜱密度指数有所不同。4种蜱的雌雄比:日本血蜱2.7:1,森林革蜱1.7:1,嗜群血蜱1.3:1,全沟硬蜱1.1:1。〔结论〕本次调查为黑龙江省边境口岸地区的蜱种群组成研究提供了依据。     

HPLC法同时测定血浆地西泮及其代谢物浓度

目的 :建立同时测定血浆中地西泮及其代谢物浓度的方法。方法 :选用ZORBAXRP C18柱 (15 0mm× 4 6mm ,5 μm) ;甲醇 - 2 5mmol·L-1醋酸铵溶液 (6 0∶4 0 ,V/V)作流动相 ;流速 0 8mL·min-1;检测波长 2 30nm。取血浆样品 0 5mL ,在碱性条件下用二氯甲烷 -正己烷提取 ,HPLC检测。结果 :本法对替马西泮、去甲地西泮和地西泮 3种物质的最低检测限均为 2 μg·L-1,线性范围为 10～ 15 0 0 μg·L-1;奥沙西泮的最低检测限为 5 μg·L-1,线性范围为 2 0～ 15 0 0 μg·L-1。回收率均接近 10 0 % ,日内、日间RSD <5 %。结论 :本法能同时测定血浆中地西泮及其代谢物浓度 ,具有重现性好 ,灵敏、可靠 ,可用于地西泮中毒的监测     

1例家族性凝血因子Ⅺ缺乏症基因突变及家系调查

目的分析1例凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺乏症家系的基因缺陷。方法检测先证者及其家系成员的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及FⅪ活性,PCR扩增家系成员中FⅪ基因,通过直接测序法分析FXI基因突变。结果患儿家系中7位成员APTT显著延长,FⅪ活性明显下降。先证者及多个家系成员中发现FⅪ基因第8号外显子有一c.841CT(p.Gln263stop)无义突变。还发现3个多态性位点,分别是第8呈外显子c.801AG(p.Thr249Thr)同义突变,第15号外显子c.1812GT(p.Arg586Arg)及c.1839GA(p.Glu595Glu)同义突变。结论 c.841CT(p.Gln263stop)杂合突变是导致此家系FⅪ缺乏的基因发病机制。     

连续性血液净化防治心脏术后患者多器官功能障碍综合征效果的评价

目的 :探讨连续性静脉静脉血液滤过 (CVVH)在心脏术后多器官功能障碍综合征 (MODS)患者防治中的疗效 ,并根据CVVH治疗的时机探讨与预后的关系。　 方法 :4 3例心脏术后重症急性肾衰竭 (ARF)伴MODS的患者 ,按尿量出现 <0 5ml/ (kg·h)至CVVH开始的时间间隔分为两组 :A组 <18h(2 1例 )和B组 >18h(2 2例 ) ,A组和B组中存活者分为A1组 (16例 )和B1组 (8例 )。对全部患者治疗前和治疗 12h后的MODS评分、APACHEⅢ评分、平均动脉压 (MAP)、氧合指数、血尿素氮 (BUN)和血肌酐 (SCr) ,以及存活者CVVH治疗时间、CVVH开始后尿量恢复时间 [>1ml/ (kg·h) ]和机械通气时间等指标进行比较。　 结果 :①B组的死亡率明显高于A组 (6 3 6 %vs 2 3 8% ,P =0 0 0 9) ;②CVVH治疗 12h后 ,A组及B组的MAP、氧合指数、BUN和SCr均明显改善 ,仅A组的APACHEⅢ评分和MODS评分显著降低 (P <0 0 5 ) ;③B1组机械通气时间、CVVH治疗时间和尿量恢复时间明显高于A1组 (P <0 0 1) ;④存活患者的CVVH距尿量 <0 5ml/ (kg·h)时间与尿量恢复时间 (r =0 76 2 ,P <0 0 0 1)、CVVH治疗时间 (r =0 6 15 ,P =0 0 0 2 )明显相关。　 结论 :CVVH是防治心脏术后MODS合并重症ARF患者的有效手段 ,但必须强调早期ARF诊断和及时CVVH治疗。尽早行C     

烟囱技术治疗近肾腹主动脉瘤的Meta分析

目的 系统评价应用“烟囱”技术治疗近肾腹主动脉瘤的安全性及有效性.方法 收集2003年-2014年已发表的关于应用烟囱技术腔内修复近肾腹主动脉瘤,同时保留内脏分支动脉的文献,回顾性分析技术成功率、血管通畅率、内漏发生率、并发症及病死率等近中期临床结果.结果 共纳入12篇文献的277例近肾腹主动脉瘤患者,技术成功率为93％,早期Ⅰ型内漏率为6％,脑卒中和心肌梗死的发生率均为3.90％;平均随访时间为13.6个月,血管通畅率为98％,共35例患者出现随访期内漏(Ⅰ型内漏10例,Ⅱ型内漏25例,无Ⅲ型内漏),随访期Ⅰ型内漏率为2％,肾功能损害发生率为12％,30 d病死率和随访期病死率分别为2.89％和8.38％.结论 应用烟囱技术治疗近肾腹主动脉瘤技术成功率较高,并发症率及病死率较低.     

改良置管方式对腹膜透析患者早期导管技术生存率的临床分析

目的 通过回顾性研究探讨改良腹膜透析置管手术方式对腹膜透析患者早期导管技术生存率的影响.方法 回顾性分析2010年10月至2012年10月我科采用腹膜透析置管方式改进后的手术终末期肾脏疾病(end stage renal disease,ESRD)患者148例(A组).腹膜透析置管手术改良方式为:①耻骨联合正中点向上约为患者一横掌,正中线旁开1～2 cm为腹膜植入点;②过长网膜预先处理避免术后包裹,将腹膜切口水平2 cm以下部分予以结扎后切除;③引钢丝腹内段弯曲成135度弧形,从荷包口末端上翘沿前腹壁向下插入,至膀胱底部有阻力感后将导丝下压继续向前,待有落空感.荷包结扎后缝线末端提起再打结固定于内涤纶套外侧;④下至上间断缝合腹直肌前鞘,切勿在导管出处上方缝合前鞘,避免缝线张力引起导管末端翘起引起漂管;⑤用隧道针先向上直行约3～4cm再沿设计好隧道走形,模拟鹅颈管皮下段走形.另选择2008年9月至2010年9月我科ESRD患者采用传统腹膜透析置管方式94例(B组)为对照组.观察腹膜透析置管成功术后1个月内:导管移位、导管阻塞、重新置管、腹透液渗漏等早期导管技术生存率及血性腹透液,腹膜炎等并发症情况.结果 2组在年龄、体质量指数及尿量均无统计学差异,具有可比性.经置管方式改良后导管移位(漂管率)、导管阻塞、腹膜透析液渗漏较传统手术方式均有显著改善(P＜0.05),使得由于手术技术原因引起的重新置管率显著降低(P＜0.05);2组间血性透析液,腹膜炎,隧道炎,隧道外口感染等方面的发生率均无统计学差异(P＞0.05).结论 改良腹膜透析置管方法可提高长期肾脏替代治疗患者早期导管技术生存率,减少早期并发症发生,改善患者的生活质量.     

利培酮合并丙戊酸钠对精神分裂症患者攻击行为疗效的对照研究

目的：探讨丙戊酸钠对精神分裂症患者攻击行为的疗效。方法：将60例精神分裂症患者随机分为研究组、对照组,研究组采用利培酮合并丙戊酸钠治疗,对照组采用利培酮单一治疗,采用阳性和阴性症状量表（PANSS）、外显攻击行为量表（MOAS）,在入组时以及第1、2、4、8周末进行评定,并进行统计分析。结果：两组PANSS和MOAS评分在第1、2、4周末和第8周末较入组时均显著降低（P〈0.01或〈0.05）。除第1周末外,在各时点PANSS和MOAS评分,研究组均显著低于对照组（P〈0.O1）。不良反应总发生率两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：丙戊酸钠与利培酮联合治疗精神分裂症,不但能增强单一使用利培酮的疗效,而且能有效控制攻击行为。