神经干细胞与原浆型星形胶质细胞联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用

目的：观察神经干细胞（NSC）与原浆型星形胶质细胞（PAS）联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用。方法：40只Wistar大鼠，制成L1～L2左侧脊髓半切空洞损伤模型，随机分为损伤组（A组），损伤后移植PAS组（B组）、移植NSC组（C组）、NSC和PAS按2：1比例联合移植组（D组），每组10只。4周及8周后行损伤部位神经丝-200（NF-200）染色观察NSC在体内的分化情况，腓肠肌胆碱酯酶染色观察运动终板的反应和核黄逆行示踪观察轴浆运输的恢复情况。结果：（1）4周时D组和C组移植部位可见少量NF-200阳性标记的神经元．8周时数量明显增多，D组多于C组；4周及8周时A、B组均未见到明显阳性标记的神经元。（2）4周时．A、B组胆碱酯酶染色示运动终板均出现退变，终板染色变浅；8周时A组终板明显退变，出现大片染色空白区，甚至终板消失，只剩下模糊的轮廓；B组终板退变程度轻于A组，着色淡，轮廓欠清晰，周边呈浅棕红色淡染，但未出现大片染色空白区；C、D组4周时终板边缘发生皱缩，呈颗粒样改变，无明显染色缺失；8周时C组较4周时变化不明显，D组受损终板皱缩明显好转，颗粒样改变消失。（3）4周时，B、C、D组核黄染色的神经元散在位于脊髓的前、后、侧角，其中D组阳性标记的神经元的数量及荧光强度大于B、C组，C组又稍强于B；8周时B、C、D组阳性神经元数量均增多．神经元的数量及荧光强度仍是D组〉C组〉B组；A组4周及8周时均未见到明显阳性染色的神经元。结论：联合移植NSC和PAS（2：1）能更好地修复损伤脊髓的轴浆运输功能并能较好地防治其后肢肌肉运动终板的溃变。     

大鼠红核和颈段皮质脊髓背侧束联合损伤模型的建立

目的　为研究脊髓损伤后的可塑性变化 ,建立大鼠红核和皮质脊髓背侧束 (dCST)联合损伤模型。方法　立体定位仪下 ,致伤颈 3dCST和双侧红核 ,甲苯胺蓝染色显示损伤范围。示踪剂观测皮质脊髓腹侧束 (vCST)的出芽情况 ;同时 ,评定大鼠前肢功能的变化情况。结果　精确地致伤红核和dCST后 ,vCST的出芽数量和大鼠前肢功能评分成显著负相关 (P <0 0 1)。结论　大鼠红核和dCST联合损伤模型是研究脊髓损伤后可塑性变化的良好模型     

腺病毒介导的脑源性神经营养因子表达对大鼠损伤脊髓轴突的保护作用

目的：研究腺病毒介导的脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因在大鼠损伤疹髓内的表达规律,观察外源性ＢＤＮＦ对损伤脊髓的作用。方法：利用激光束描记位移的重力打击装置,制备可靠 的定量损伤模型;以直接法将带有ＢＤＮＦ基因表达框的复制制陷重组腺病载体直接转移至大鼠损伤脊髓,用Ｘ－Ｇａｌ染色检测基因转移有效性,并观察损伤轴突计量形态学改变,抽伤脊髓ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达,ＢＤＮＦ和神经中丝（Ｎｅｕｒｏｆｉｌａｎ     

慢性高眼压青光眼动物模型的构建和鉴定

目的:建立大鼠慢性高眼压模型,观察眼压、病理和视功能改变.方法:SD大鼠45只,麻醉后使用532二极管激光行右眼角膜缘360°光凝,角膜缘激光斑为80～100个,大鼠角膜缘颞侧、颞上及颞下巩膜浅层静脉3条,每条静脉光凝3～4个斑点,功率0.45W/0.7s.左眼为对照眼,3d后测量眼压,部分眼压升高不明显者,进行同样的二次光凝.Tono-penXL眼压计监测3,7,30,60,90,180d麻醉状态下的眼压.激光术后60,180d取大鼠各5只,40g/L多聚甲醛灌注固定,摘取双侧眼球和视神经,分别进行冰冻和石蜡切片,采用HE染色、尼氏染色、甲苯胺蓝染色,光镜下观察房角变化,不同时间视网膜节细胞计数,比较视神经髓鞘密度的变化.60,180d大鼠10只,使用TEC-350V视觉电生理仪行F-VEP检查;然后6mo大鼠5只,进行逆行荧光金标记RGCs,7d后40g/L多聚甲醛灌注固定,全视网膜铺片,荧光显微镜下比较视网膜节细胞数量变化.结果:大鼠高眼压模型成功38只,平均最高眼压在激光后30d,平均值为25.0±4.1mmHg,对照眼17.1±3.2mmHg,180d时眼压基本恢复正常.病理改变:实验眼前房角明显变窄,小梁网间隙压缩、变窄,甚至部分闭锁,消失,少量梭形成纤维细胞聚集,组织致密、硬化,而小梁细胞减少,虹膜部分卷曲,水肿、肥厚出现明显异常.逆行荧光金视网膜铺片和视网膜切片尼氏染色见实验眼视网膜节细胞数量有明显的减少;尼氏染色切片每400倍视野总平均数,60d组对照眼为41±10.6个,实验眼为35±11.2个,180d组对照眼为40±9.8个,实验眼为34±11.0个,周边视网膜平均值减少最为显著,均值相差可达8个神经节细胞;180d时模型眼视神经甲苯胺蓝染色显示的髓鞘密度明显降低;视功能检查:高眼压大鼠模型60,180d的实验眼和对照眼均可引出典型的和重复性好的NPN波形,60d时实验眼AP1(N1-P1振幅)均值降低,为13.03±3.11ms,对照眼为21.14±3.10ms,两者具有显著性差异(P＜0.05),波幅值降低持续至180d仍未恢复;LP1(P1峰潜伏期)60d时无明显变化,180d时则明显延迟,实验眼为74.47±8.05μV,对照眼为59.73±4.16μV,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:使用532-二极管激光角巩膜缘小梁网及巩膜浅层静脉光凝能成功升高眼内压,眼压升高近8mmHg;病理显示视网膜神经节细胞数显著减少,以周边视网膜为著;视神经髓鞘密度亦显著地减少;视觉电生理检测,F-VEP的AP1振幅降低,LP1波峰潜伏期延迟非常显著.     

人工反射弧建立后脊髓功能及形态改变的实验研究

目的：观察“皮肤～脊髓～膀胱”人工反射弧建立后大鼠脊髓L4节段神经元单位放电及形态学改变情况。方法：32只SPF级Wistar成年雄性大鼠，均分为正常对照组和“皮肤一脊髓一膀胱”人工反射弧模型组，记录正常组和术后3个月以上模型组大鼠L4节段背侧角和腹侧角的脊髓单位放电（SCUDs）以及在加入乙酰胆碱（ACh）和皮下电刺激的情况下SCUDs情况。同时对L4脊髓和膀胱组织行组织学检查。结果：模型组大鼠背侧角SCUDs的平均频率与正常组大鼠相比显著降低（P〈0．01）。在加入过量ACh（0．1mol/L）和连续电刺激（幅度7．6mA，持续200us，频率4Hz）的情况下，模型组大鼠L4节段脊髓腹侧角SCUDs均受到抑制终止放电。脊髓L3尾部至L5头侧的左侧前角（以L4节段为主）可见NY单标的神经元，HE染色镜下观察模型组大鼠吻合口神经根纤维排列紊乱，细胞数量明显增多，有类血管样结构存在。左侧脊髓L4节段前角组织轻度萎缩，部分前角神经元胞浆皱缩，核深染，少量细胞卅现空泡样变，部分细胞核边集。部分侧角中间神经元则形态较好．具有前角运动神经元的形态，膀胱壁一侧肌层增厚。结论：人工反射弧建立之后．部分中间神经元由于在功能上的可塑性可能替代部分萎缩的前角运动神经元的功能。乙酰胆碱可能参与了大鼠人工反射弧中L4脊髓节段腹侧角运动神经元网络的信息反馈过程。     

烧冲复合伤早期输液治疗的实验研究

1.本文报告了狗40％Ⅱ~-～Ⅱ~+烧伤合并中度以上肺冲击伤时,早期静脉输液对肺部的影响。共用122只狗,有相应烧冲、单烧、单冲对照组。 2.实验结果表明,按临床输液公式较晚而较快地静脉补给液体,未见有肺出血加重,肺水肿的发生率和中度以上的比例虽较对照组略高,但差别无统计学意义。 3.据实验结果,结合临床资料,认为在烧冲复合伤时,在监测尿量和胸部体征变化的条件下,应补充足量的液体。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓半切空洞损伤的修复作用

[目的] 观察神经干细胞移植后对大鼠损伤脊髓形态和功能的修复作用。[方法] 30只Wistar大鼠，分为半切洞损伤组、D-Hanks液对照组和神经干细胞移植治疗组。4、8周后取损伤部位脊髓组织进行HE、Nissl、Holmes银染观察神经纤维和神经细胞的再生情况。同时在伤后1、4、8周进行伤侧下肢MEP和SEP检测，了解感觉和运动功能的恢复情况。[结果] （1）治疗组4周后，分化的细胞基本闭合空洞，形成一空腔。8周时，在损伤处可见大量星形胶质细胞，及少数长出突起、存活的神经元，而且移植物与宿主之间在形态上形成纤维联系；（2）术后1周各组运动诱发电位和感觉诱发电位峰潜时明显延长，无显著差异性，手术后4、8周，C组的峰潜时较A、B组明显缩短，有显著的差异性（P〈0．01）。[结论] 神经干细胞移植到损伤脊髓组织后，能够存活、分化并从结构和功能上较好地修复组织缺损区域。     

RAD16-Ⅱ的物理特性及其在神经干细胞假体构建中的应用

目的:观察RAD16-Ⅱ的物理特性以及神经干细胞在其上黏附和增殖的情况,探讨其构建的细胞假体在脊髓损伤中可能的应用。方法:将RAD16-Ⅱ的饱和水溶液同与之等体积的1.8%的氯化钠溶液混合后静置24h,通过肉眼、光镜和扫描电镜观察其表面结构,并对其吸水性和溶液pH值的动态变化进行评价;将经鉴定的神经干细胞与其共同培养,扫描电镜下观察细胞在材料上的黏附情况,同时应用免疫组化方法评价神经干细胞在材料上的增殖和分化情况。结果:RAD16-Ⅱ在1.8%的氯化钠溶液中塑型后,肉眼和光镜下形态多变,其形状取决于塑型的容器形状;扫描电镜下其为规则的网状,网孔直径为54.00±3.24"m,纤维直径为9.00±1.57"m,网孔底部相互沟通,神经干细胞可在其上迁移和增殖。结论:RAD16-Ⅱ具有良好的物理特性,神经干细胞可在与其构建的假体中迁移和良好地增殖、分化,在脊髓损伤的修复中可能具有潜在的应用前景。     

必需脂肪酸对大鼠脑组织中EAA含量的影响

目的探讨在大鼠脑发育期补充必需脂肪酸兴奋性氨基酸(EFA)对脑组织中EAA含量的影响.方法断乳大鼠(1个月)30只,雌雄不拘,分为正常组、EFA缺乏组和补充鱼油组,分别以不同饲料喂养3个月,取出新鲜的大脑皮层和海马组织,测定天门冬氨酸、谷氨酸的含量;尼氏染色和嗜银染色观察大脑皮质和海马细胞形态结构的变化.结果与正常组相比,EFA缺乏组的FAA含量均显著升高(P＜0.05),补充鱼油组无明显差异;与补充组相比,EFA缺乏组大脑皮质大锥体细胞数目明显减少、排列不规则、稀疏、轴突纤维短,海马细胞层数较少、体积也较小.结论发育期EFA缺乏会导致脑组织中EAA含量明显升高,神经形态异常.     

大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的　探讨大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。　方法　将60只大鼠分为脊髓损伤后应用大剂量甲基强的松龙组(A组,30只)和单纯脊髓损伤组(B组,30只)。损伤后1,3,7,14,28　d,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法,TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化SP法）。　结果　A、B两组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达。大鼠脊髓损伤后3d图像分析表明,细胞凋亡率分别为A组（12.43±5.16）,B组（36.27±6.28）;Bcl-2蛋白阳性细胞分别为A组（37.68±5.83）,B组（21.48±7.83）。两组比较,差异有显著性意义(P<0.01和0.05)。　结论　脊髓损伤可导致神经细胞凋亡,大剂量甲基强的松龙能抑制细胞凋亡。