基于18SrRNA序列的云南大叶千斤拔与细叶千斤拔根内丛枝菌根真菌鉴定

目的:调查云南省大叶千斤拔(Flemingia macrophylla)与细叶千斤拔(Flemingia lineata)根内丛枝菌根真菌(Arbuscular Mycorrhizal Fungi,AMF)群落结构多样性。方法:使用巢式-PCR、克隆、限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析及测序技术。结果:共获得558个含有丛枝菌根真菌18S rRNA片段的克隆子,经RFLP分析后得到83个RFLP类型,DNA序列分析可将其划分为23个可操作分类单元(Operational Taxonomic Units,OTUs),分属于5个科,Glomeraceae为优势类群。在MaarjAM数据库中进行比对后,23个OTUs可鉴定为18个虚拟分类分子种,分布于13种不同的生境。经统计分析大叶千斤拔与细叶千斤拔根内丛枝菌根真菌群落组成比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:比较大叶千斤拔与细叶千斤拔根内丛枝菌根真菌群落差异,结合丛枝菌根真菌在生态系统中的分布特点,为种植千斤拔属植物的选址提供有力地环境指标数据,并为筛选促生菌株提供依据。     

南宁某警犬基地蜱虫及病原体感染调查

目的了解广西南宁某警犬养殖训练基地蜱虫及病原体携带情况。方法 2013年7月在广西南宁某警犬养殖训练基地,采用逆毛式检蜱法采集犬体表以及犬舍墙壁的蜱虫,用巴贝虫属18S rRNA通用引物的巢式PCR、原核生物16S rRNA及真核生物线粒体16S rRNA通用引物的PCR和序列测定方法,鉴定蜱虫体内的病原体感染情况和蜱虫种类。结果从警犬体表及犬舍墙壁共计采集5只饱血蜱和13只饥饿蜱;经PCR鉴定均为血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)。蜱虫体内扩增到田鼠巴贝虫(Babesia microti)、伯纳特氏立克次氏体(Coxiella burnetii)、假单胞球菌(Pseudomonas sp.)、甲基杆菌(Methylobacterium sp.)DNA序列,阳性率分别为27.8%(5/18)、22.2%(4/18)、11.1%(2/18)、11.1%(2/18)。结论南宁某警犬养殖训练基地蜱虫存在一定比例的田鼠巴贝虫、伯纳特氏立克次氏体、假单胞球菌、甲基杆菌感染阳性率,对接触人员、及其他牲畜有潜在感染的风险,应加强预防和控制。     

巢式PCR法检测弓形虫的应用研究

目的 调查山东省商品肉弓形虫污染和动物弓形虫感染情况，并进行SAG2分型研究，分析商业肉制品在弓形虫传播中的作用。方法自由市场采集商品内，用巢式PCR方法检测弓形虫DNA，阳性经纯化PCR产物，进行SAG2临床分型研究。结果共检测商品内89份，阳性22份，阳性率为24．72％。其中，猪肉标本56份，16份阳性，阳性率为28．57％，Ⅰ型13份，Ⅱ型1份，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染1份，未能定型1份；羊肉标本33份，6份阳性，阳性率为18.18％，Ⅰ型5份，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染1份。22份阳性标本中单纯Ⅰ型占81、82％，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染占9．09％，Ⅲ型未能检测到。1份可疑病人血标本阳性，为Ⅰ型。结论肉类弓形虫污染率很高，以Ⅰ型为主，是人类感染的重要来源。家庭食品加工过程中生熟不分与人们对食品鲜美的追求造成误食包囊感染，可能是造成人类弓形虫感染率大幅升高的最为重要的原因之一。     

安徽地区家畜嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因检测和序列分析

目的了解安徽农村地区散养家畜自然感染嗜吞噬细胞无形体状况和基因特征。方法应用巢式PCR对怀远、明光和广德县采集的148份家畜全血样本进行嗜吞噬无形体16S rRNA基因检测,并对扩增产物测序,应用生物软件MEGA4.0进行序列分析。结果 148份家畜全血样本中检测出山羊、牛和犬嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因阳性率分别22.1%、25.0%和40.0%。26份PCR阳性扩增产物测序成功,序列分析结果表明：检出序列可归为4群,I群优势株占分析序列的66.7%,与北京、浙江和湖北等地检测序列同属一个分支。目的基因测定序列与参考序列同源性达97.0~99.0%。结论安徽调查地区农村家畜动物存在嗜吞噬细胞无形体感染,山羊是该地区嗜吞噬细胞无形体的重要宿主动物之一。     

单纯疱疹病毒实时PCR检测以及与巢式PCR和病毒培养方法的比较

目的：在Lightcycler系统上建立和评价HSV-1、HSV-2型病毒的实时定量PCR方法,并与巢式PCR和病毒分离培养的结果进行比较。方法：120例从疑似单纯疱疹病毒感染患儿口腔黏膜及唇黏膜取样,进行实时PCR,巢式PCR和病毒分离检测HSV-1、HSV-2的感染情况。结果：HSV-1阳性率：病毒分离和巢式PCR分别为34/120（28.3%）和36/120（30%）,实时PCR为38/120（31.7%）;HSV-2的检测：病毒分离阳性率为5/120（4.2%）,巢式PCR阳性率为7/120（5.8%）,实时PCR阳性率为8/120（6.7%）。结论：实时PCR增加了单纯疱疹病毒DNA检出率,尤其是和病毒分离相比。实时PCR和巢式PCR在敏感性上没有显著性差异。实时PCR技术具有快速扩增,降低污染风险的优势,它是诊断单纯疱疹病毒感染的一种合适方法。     

浙江省鼠形动物蜱源立克次体感染状况调查

目的了解浙江省不同类型地理环境中鼠形动物蜱源立克次体的感染状况。方法 2009—2011年在安吉县、金东区和天台县用夹夜法捕获鼠形动物,进行分类鉴定、无菌采集肝脾标本,并采用巢式PCR方法检测无形体属与埃立克体属16SrRNA以及立克次体属（包括斑疹伤寒群和斑点热群）与东方体属热休克蛋白基因groEL。结果 3个调查点共捕获鼠形动物14种851头,社鼠（30.32%）、黑线姬鼠（18.80%）和青毛鼠（11.75%）为主要优势种,其中金东区、安吉县和天台县的优势鼠种分别为社鼠（39.20%）、青毛鼠（32.05%）和黑线姬鼠（59.57%）。562份肝脾标本中检出立克次体48份,阳性检出率为8.54%;其中无形体属占3.38%,斑疹伤寒群占1.78%,恙虫病东方体属占1.78%,埃立克体属占1.07%,斑点热群占0.53%。金东区和安吉县无形体属检出率较高为4.76%和4.27%,斑点热群仅在天台县检出。社鼠的立克次体阳性检出率最高为14.97%。同一鼠形动物可存在多种立克次体混合感染。结论浙江省不同类型地理环境鼠形动物中广泛存在立克次体感染,不同地理位罝和不同鼠形动物的蜱源立克次体检出率不同。     

用多重PCR快速检测登革病毒并分型

目的　建立一种多重聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对不同型别登革病毒进行快速检测及分型。方法　采用 4种型别登革病毒通用的外侧引物进行逆转录PCR(RT PCR)反应 ,继用 4对 (5种 )型特异引物在单管内进行巢式PCR ,依据扩增产物的片段大小进行分型。结果　采用多重PCR ,扩增出 4 82、119、2 90及 392bp的特异片段 ,分别代表登革病毒 1～ 4型。结论　该方法快速、敏感、特异 ,有一定的推广应用价值。     

巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。     

上海地区献血人群隐匿性HBV感染状况

目的 了解HBsAg阴性、抗-HBc阳性的献血人群中HBV DNA感染情况.方法采用酶联免疫法(ELISA)检测5 121份HBsAg阴性的合格献血者血清抗-HBc和抗-HBc阳性反应滴度;对抗-HBc阳性样本采用ELISA法检测血清抗-HBs,采用巢式PCR三区段扩增法检测HBV DNA.结果HBsAg阴性的献血人群...     

2011年西宁地区儿童腹泻病毒流行病学调查

目的:对2011年西宁市腹泻病毒进行流行病学调查,对青海省腹泻病毒流行株和流行趋势进行统计分析,为腹泻病毒引起的腹泻提供实验室资料,更好地控制病毒性腹泻的流行。方法:用巢式PCR和多重PCR方法对西宁地区488例婴幼儿腹泻标本进行腹泻病毒检测。结果:西宁地区腹泻儿童中腹泻病毒的检出率分别为:轮状病毒A组阳性33例(6.76%),其中G9型15例、G3型13例、P6型1例、P8型2例、P9型2例;轮状病毒B/C组阳性3例(0.61%);杯状病毒阳性23例(4.71%),其中扎如病毒17例、诺如病毒GⅡ型6例;星状病毒阳性7例(1.43%)。结论:轮状病毒A组和杯状病毒是西宁地区婴幼儿腹泻的主要病原体之一。