基于血管内皮功能相关多生物标记物的哮喘预后研究

目的 分析哮喘儿童血清中血管内皮功能相关标记物的变化情况及其与疾病预后的关系,为儿童哮喘预后的评估提供依据。方法 收集2016年10月-2017年12月在南通大学附属常州儿童医院就诊的89例5～14岁哮喘患儿在哮喘发作期的血清样本和92例健康儿童的血清样本,运用ELISA和其他商用测试盒检测其中内皮功能相关标志物血管内皮生长因子(VEGF)、精氨酸酶I(Arg I)、骨膜蛋白(POSTN)、脂联素(APN)和瘦素的浓度以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,并用高效液相串联质谱(HPLC-MS/MS)检测L-精氨酸、甲基化精氨酸ADMA和SDMA的浓度。此后对哮喘组患儿进行为期1年的随访,记录在此期间出现喘息发作的次数。运用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)分析数据,筛选对哮喘疾病预后有关键影响的血管内皮功能相关标记物。结果 哮喘组儿童血清中Arg I、POSTN、VEGF和瘦素的含量显著增加,iNOS活性显著增高,L-精氨酸浓度显著下降(P<0.05)。OPLS-DA模型显示,基于内皮功能多标记物哮喘组可以和对照组显著区分,且Arg I、iNOS活性以及VEGF水平的变量重要性因子(VIP)值分别为2.11、1.23、1.09,是区分哮喘组和对照组的关键内皮标记物。随访后1年,随访成功70例,其中反复喘息组(n=27)与非反复喘息组(n=43)相比,血清ADMA和Arg I的含量显著增加,POSTN和APN含量显著减少(P<0.05)。OPLS-DA模型的S-plot图和VIP值排序都表明区分两组的关键内皮标记物是APN、POSTN和Arg I。结论 哮喘儿童血清中多种内皮功能相关的生物标记物稳态失衡,其中APN、POSTN和Arg I对儿童哮喘的疾病预后有较高的预测价值。     

精氨酸酶在正常与牙周炎牙龈组织中的表达差异研究

目的 检测精氨酸酶（arginase,Arg）在正常与牙周炎的牙龈组织中的表达差异.方法 分别采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）和分光光度法检测Arg在40例健康成人（对照组）与40例慢性中重度牙周炎患者（实验组）的牙龈组织中含量和活性的差异.结果 实验组牙龈组织中Arg的含量和活性均高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.01）.结论 Arg可能参与了牙周炎牙龈组织的炎症过程,在牙周炎发展过程中具有重要意义.     

日本血吸虫精氨酸酶新基因的鉴定及作为疫苗的保护性研究

目的 识别和鉴定日本血吸虫（Sj）精氨酸酶（ARG）新基因，并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。　方法 通过巢式PCR，从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端，并用生物信息学进行鉴定；将ARG的完整编码序列（CDS）克隆到pET30a（+）载体，表达并纯化表达产物后，以鸟氨酸-茚三酮法鉴定酶活性；用蛋白质印迹法（Western blotting）比较重组ARG蛋白与Sj天然ARG蛋白的免疫学特性，间接免疫荧光法对ARG在Sj成虫中的分布进行组织定位；用纯化重组ARG蛋白免疫小鼠（PBS和SjGST作对照），Sj尾蚴攻击感染后，检测SjARG作为疫苗的免疫保护力。 结果 　扩增并鉴定SjARG基因的完整CDS长为1 095 bp；重组SjARG具有酶活性，并具有与Sj天然ARG蛋白相同的免疫学特性；ARG定位于Sj成虫的肠壁和生殖器官。重组SjARG蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为55.8%和48.8%。SjGST蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为28.6%和6.89%。 结论 获取并鉴定了SjARG新基因；SjARG比SjGST具有更高的疫苗保护性。     

肝细胞肝癌组织精氨酸酶2和诱导型一氧化氮合酶的表达及与肿瘤血管形成的相关性

目的:探讨精氨酸酶2(arginase-2,Arg-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与肿瘤血管形成的相关性。方法:采用免疫组化方法检测158例HCC患者手术切除标本中Arg-2、iNOS的表达,抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞。采用Image-Pro plus 6.2.1图像分析软件测定肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:158例HCC中,Arg-2、iNOS的阳性表达率分别为73.4%(116/158)、83.5%(132/158)。Arg-2和iNOS在HCC组织中的表达正相关(r=0.474,P=0.000)。116例Arg-2阳性HCC组织的MVD为(283.92±130.69)/0.702mm~2,42例Arg-2阴性HCC组织的MVD为(129.25±51.00)/0.702mm~2,差异有统计学意义(P=0.000);132例iNOS阳性组织的MVD为(267±131.49)/0.702mm~2,26例iNOS阴性HCC组织的MVD为(116±41.85)/0.702mm~2,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:Arg-2与iNOS在HCC组织中的表达正相关,且与MVD相关,提示Arg-2与iNOS可能参与调节HCC中微血管的形成。     

精氨酸血症致急性肝功能衰竭6例研究

目的　分析急性肝功能衰竭在精氨酸血症患者中的发病情况。方法　回顾性分析2018年1月至12月首都医科大学附属北京友谊医院肝脏移植中心确诊的6例精氨酸血症患儿,收集其相关医疗数据,并对已留存患儿的血液进行检测,对ARG1基因突变进行分析。结果　6例患儿均有凝血功能异常,3例（50%）符合急性肝功能衰竭诊断,国际标准化比值（INR）范围2.5～4.6（正常＜1.2）,血氨水平68～252 μmol/L（正常＜45 μmol/L）,其中2例（例1、例4）体检发现小的出血点。6例患儿均存在ARG1基因复合突变,符合精氨酸酶缺乏症。结论　急性肝功能衰竭是精氨酸血症的并发症之一。对于原因不明的肝功能损害儿童,应考虑遗传代谢病的可能。对于已明确诊断精氨酸血症的患儿,即使没有明显的肝功能障碍或大出血,也应调查其凝血功能。     

铅接触的某些酶学监测指标

铅(Pb)是一种作用于垒身的多亲和性毒物，主要损害神经、造血、消亿及心血管等系统。铅还可以与酶或蛋白质中的许多带负电荷的基周如巯基、按基、眯唑基等结合，使细胞内许多代谢途径受到影响，如能量的生成，蛋白质和核酸的合成等，从而使体内某些酶的活性发生变化。目前甩酶活性的变化来监测铅的吸收水平的工作已经开展，本文就近年来对铅的酶学监测指标的研究进展综述如下。     

肺癌患者肺泡巨噬细胞精氨酸酶活性研究

检测肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养液中精氨酸酶活性。结果表明，肺癌患者荷瘤侧肺ＡＭ较非荷瘤侧肺和非癌性肺病患者ＡＭ产生精氨酸酶活性低；ＡＭ经卡介菌（ＢＣＧ），干扰素－α（ＩＦＮ－α）刺激后产生精氨酸酶活性明显增强。提示肺癌患者肿瘤局部ＡＭ抗肿瘤活性存在缺陷；ＢＣＧ，ＩＦＮ－α诱导ＡＭ产生精氨酸酶可能为其抗肿瘤、抗感染的机制之一。     

分光光度法在血清精氨酸酶活性检测中的应用

目的:建立一种检测血清精氨酸酶活性的快速比色方法。方法:利用对硝基苯乙醛(PNPG)能特异地与精氨酸反应,并在480nm处有最大吸收,同时根据水解后剩余精氨酸的含量来推算精氨酸活性水平。结果:通过精密实验可得批内CV为3.8%,批间CV为4.7%。并测定32份正常人血清,男性0～75(44±10)U/L,女性0～79(44±10)U/L,男女间无显著差异(P>0.05)。结论:该方法特异、准确,操作简捷,灵敏度高,适宜于临床实验室中广泛开展。     

炎克宁冲剂对慢性盆腔炎膜型炎性介质含量的影响

目的在建立慢性盆腔炎动物模型的基础上,探讨慢性盆腔炎与炎性介质的关系、中药炎克宁冲剂对慢性盆腔炎局部组织炎性介质的影响。方法采用荧光分光度法检测模型局部组织NO水平,采用茚三酮法测定模型腹腔巨噬细胞(MΦ)精氨酸酶含量。结果炎克宁冲剂能降低局部组织NO的含量(P<0.01),增加腹腔活化MΦ中精氨酸酶的活性,从而减轻局部炎症及纤维增生病变,有恢复正常组织结构的趋势。结论中药炎克宁冲剂是防治本病的有效药物,有深入研究、开发利用的价值。     

精氨酸酶对异丙肾上腺素诱导心肌细胞内钙浓度的影响

目的 探讨精氨酸酶对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞内游离钙浓度变化的影响及其机制.方法 培养乳鼠心肌细胞,分别给予精氨酸酶抑制剂S-(2-boronoethyl)-L-cysteine(BEC)及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂vinyl-L-N-5-(1-imino-3-butenyl)-L-ornithine(L-VNIO),钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM及激光共聚焦显微镜(LSCM)检测ISO诱导的心肌细胞内游离钙浓度的变化.结果 BEC明显升高心肌中NO浓度和ISO诱导的心肌细胞内钙离子浓度.L-VNIO可以逆转这一过程.结论抑制精氨酸酶能够通过nNOS/NO途径升高ISO诱导的心肌细胞内钙浓度.