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1.
目的探讨人端粒酶催化亚基(hTERT)反义cDNA(pAdeasy-hTERT)在体外对胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法将腺病毒介导的pAdeasy-hTERT作用于人胶质瘤细胞系U251,用MTT法检测细胞存活率、端粒酶重复序列扩增法测定端粒酶活性、Westem杂交鉴定hTERT蛋白的表达、RT-PCR法检测hTERT cDNA水平、PCNA观察肿瘤细胞的凋亡情况以及用流式细胞仪对转染后肿瘤细胞的周期进行分析。结果pAdeasy-hTERT在体外明显抑制肿瘤细胞生长,降低端粒酶活性,抑制hTERT表达。结论pAdeasy-hTERT显著抑制人胶质瘤细胞生长,可成为恶性胶质瘤基因治疗的靶基因。 相似文献
2.
3.
指数富集的配基系统进化技术是一种生物文库技术,它利用人工合成的、容量约为1014~1015的随机寡核苷酸文库与靶物质结合,经过多轮筛选获得靶物质的DNA或RNA适配子,具有实用范围广、筛选过程简便、适配子有高特异性和高亲和性等特点。在血管研究方面主要是针对血管内膜增生和新生血管形成开展的,在该领域发展潜力巨大。 相似文献
4.
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法是将PCR方法与逆转录法结合应用,可快速高效地扩增某一基因的全cDNA。类胰岛素生长因子-I(IGF-I)在人染色体中只有一个基因,全长超过45kb,并有内含子,其cDNA却只有几百个bp,为了表达得到IGF-I,本文利用RT-PCR方法,从胎肝提出的混合mRNA中,筛选并扩增了IGF-I的cDNA。经过分子克隆与测序,证明不需制备胎肝cDNA库,即可快速获得IGF-I的cDNA。 相似文献
5.
Cloning and Subcloning of cDNA Coding for Group Ⅱ Allergen of Dermatophagoides Farinae 总被引:6,自引:0,他引:6
LIChao-pin YANGQing-gui 《南京医科大学学报(英文版)》2004,18(5):239-243
Objective: To clone, sequence and subclone the cDNA coding for group Ⅱ allergen of Dermatophagoidesfarinae(Der f2). Methods: The cDNA gene fragment of Der f2 was amplified by RT-PCR. After being purified, the gene fragment was cloned into a vector pMD-18T. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 was transformed into E. coli JM109. Positive clones were screened and identified by PCR and digested with restriction endonuclease, and the sequence of inserted Der f2 cDNA was also analyzed. Then Der f2 was subcloned into the vector of pET-32a( ). Results: The Der f2 cDNA was specifically amplified from RNA by RTPCR. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 and pET-32a( ),Der f2 was constructed and digested by SacⅠ and NotⅠ, and the size of gene fragment was 455bp and in accordance with the expected one. Conclusion: The pET-32a( )-Der f2 subclone was constructed successfully. 相似文献
6.
目的;探讨内毒素(LPS)诱导后家兔肺组织中诱生型一氧化氮合成酶的表达。方法:采用地高辛标记iNOS探针,并用Northern印迹杂交技术和比色法检测iNOS表达。结果:经内毒素导后iNOS在家兔肺组织中有表达,注射LPS5小时后表达量最大,24小时表达最减少。结论:地高辛标记iNOScDNA探针可较好地用于iNOS基因表达的研究。 相似文献
7.
一种新的五步蛇蛇毒类凝血酶Cdna的克隆和序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:克隆出五步蛇的类凝血酶cDNA,为研究其结构和功能的关系。并为下一步基因表达开发抗血栓药物提供依据和基础。方法:从五步蛇蛇腺中提取了总RNA,通过反转录合成第一链cDNA,经PCR扩增出五步蛇毒腺中类凝血酶TLE1的cDNA片段,并将其连接到质粒载体扩增,然后进行DNA测序。结果:成功克隆出一种新的五步蛇类凝血酶的cDNA片段。此片段全长794bp,包括编码部分的全长为777bp。推导其编码的蛋白质序列为258个氨基酸,其中包括18个氨基酸的信号肽,6个氨基权的前肽和234个氨基酸的成熟氨基酸顺序。TLE1成熟肽与其它蛇毒类凝血酶相比,蛋白质一级结构具有较高的同源性。结论:从五步蛇中成功克隆出一 种新的类凝血酶cDNA,并确定了它的DNA顺序。 相似文献
8.
ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。 方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4~ 48h、48~ 72h时段内α -sAPP生成量的变化。 结果 2 4~ 48h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1浓度分别为 1× 10 - 5mol L时 ,α -sAPP含量分别为 2 .0 6± 0 .73、2 .6 4± 1.2 1,明显高于DMSO对照组的 1.0 0(P <0 .0 1) ;48~ 72h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1单独应用且浓度分别为 1× 10 5mol L时 ,α -sAPP含量也明显高于DMSO对照组的 1.0 0 (P <0 .0 1)。二者相加的效果高于ZDY 10 1、SZ2 0 1单独应用 (P <0 .0 5 )。如果二者联合应用 ,降低各自的浓度 ,总浓度仍为 1× 10 - 5mol L时 ,提高α -sAPP含量的效果不明显。 结论ZDY10 1、SZ2 0 1在一定浓度时 ,能增加α -sAPP的生成 ,二者联合应用效果更强。 相似文献
9.
用限制性内切酶EcoRI从pKS(-)HTH_1切下全长为1.9 kb的人酪氨酸羟化酶基因,在T_4DNA连接酶的作用下连接在真核表达载体pCDNA_3的EcoR Ⅰ位点,构建成重组质粒pcD-NA_3HTH_1,该质粒转染COS-7细胞,免疫荧光组织化学染色证实酪氨酸羟化酶在其中的表达。 相似文献
10.
两个新维甲酸特异激活表达的cDNA序列的生物学功能测定 总被引:2,自引:0,他引:2
两个新维甲酸特异激活表达的cDNA序列的生物学功能测定雷薇黎伯铨吴我们在发现全反式维甲酸(RA)可引起食管癌细胞系生长抑制及终末分化的基础上,结合RA作用的分子机制,开辟了一条分离肿瘤抑制基因或促分化基因的新途径,建立了RA诱导前后的肿瘤细胞系的c... 相似文献