高效液相色谱法同时测定功能食品中绿原酸、白藜芦醇、葛根素和芦荟甙

[目的]建立同时快速测定功能食品中绿原酸、白藜芦醇、葛根素和芦荟甙的高效液相色谱法。[方法]样品经甲醇超声提取,提取液经甲醇-水(20︰80)稀释并高速离心后,上清液供HPLC分析。色谱柱为Kinetex C18柱(4.6 mm×100 mm,2.6μm),柱温25℃,采用甲醇-0.15%冰乙酸水溶液作流动相,梯度洗脱,流速0.60 ml/min,紫外检测。[结果]本法线性范围上限至少为2μg,相关系数大于0.999,检出限0.15～0.72 ng,平均回收率99.6%～113%。[结论]该法简便快速、准确灵敏,可用于功能食品中绿原酸、白藜芦醇、葛根素和芦荟甙的同时测定。     

白藜芦醇的预防保健作用

<正>1819年,一位名叫塞木尔.布莱克的爱尔兰医生指出,基于法国人的生活习惯及天气条件,法国患有心绞痛的人数比例明显低于爱尔兰,后来这一现象被人们称为"法国悖论",即法国人的日常饮食中含有大量的饱和脂肪酸,本不利于心脏健康,但是,法国人的心脏病发病率和死亡率却较低[1]。研究发     

白藜芦醇保护心肌细胞的信号转导途径研究

目的研究白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的信号转导途径。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟心肌缺血再灌注损伤,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞活力,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶活性。结果心肌缺血再灌注组心肌细胞存活率为（35.7±7.4）%,白藜芦醇处理组心肌细胞存活率为（87.8±4.9）%,与缺血/再灌注损伤组比较有显著性差异（P〈0.01）。NG-硝基-L-精氨酸甲酯、亚甲基蓝、D-鞘氨醇、格列本脲处理心肌细胞30 min后,再以白藜芦醇处理细胞1 h,经历心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞存活率分别为（38.3±7.1）%、（46.3±9.7）%、（76.2±6.6）%和（72.2±5.4）%,其中NG-硝基-L-精氨酸甲酯、亚甲基蓝处理组心肌细胞存活率较白藜芦醇组明显减低（P〈0.05）,与心肌缺血再灌注损伤组之间无显著性差异（P〉0.05）,而D-鞘氨醇和格列本脲处理组心肌细胞存活率较白藜芦醇组减低（P〈0.05）,但仍高于心肌缺血再灌注组（P〈0.05）。心肌细胞分别经过NG-硝基-L-精氨酸甲酯、S-亚硝基-乙酞青霉胺处理30 m in后,再以白藜芦醇处理细胞1 h,经历缺血/再灌注损伤,损伤后心肌细胞存活率为（86.4±4.2）%,与缺血/再灌注损伤组比较有显著性差异（P〈0.05）。乳酸脱氢酶活性则与之相反。结论白藜芦醇抑制细胞坏死是通过NO-GC-cGMP依赖途径,而蛋白激酶C的活化和K＋ATP通道的开放可能是其下游重要的信号通路。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞A549凋亡的保护作用机制

目的:探讨白藜芦醇对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡的影响。方法:用MTT法检测LPS对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关信号通路蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR和免疫荧光法分别在mRNA和蛋白水平检测其表达情况。结果:LPS能够以浓度梯度和时间梯度依赖的方式显著诱导肺癌细胞A549的凋亡,同时LPS能够升高细胞内活性氧的水平。Western blot结果表明LPS能够增加细胞内p53的表达水平并降低Bcl-2的表达。用白藜芦醇处理48h后,LPS所引起的细胞内活性氧水平升高的现象显著下降。Western blot结果表明白藜芦醇能够有效逆转LPS所引起的细胞内p53表达水平升高以及Bcl-2表达下降的情况。结论:白藜芦醇通过降低细胞内活性氧、p53水平以及升高Bcl-2水平对LPS所诱导的人肺泡上皮细胞A549凋亡起到保护作用。     

白藜芦醇对离体人肺内小动脉血管张力的影响

目的研究白藜芦醇（Resveratrol, RES）对离体人肺内小动脉血管张力的影响及其机制。方法显微镜下分离直径为1~
1.5 mm的人肺内小动脉,制备成1.8~2.0 mm的血管条,使用微血管张力测定技术,分别给予血管收缩剂血栓素A2受体激动剂
（U46619）、内皮素-1（ET-1）、60 mmol/L高钾溶液使血管产生持续性收缩,张力平稳后,采用累计加药法加入白藜芦醇,观察不同
浓度白藜芦醇对预收缩的人肺内小动脉张力的影响;同时观察去内皮,以及加入L-NAME、吲哚美辛预孵育血管后,白藜芦醇能
否使预收缩的血管舒张。白藜芦醇舒张实验同时用等体积的药物容积二甲亚砜（DMSO）作为对照。结果RES能呈浓度依赖
性舒张U46619（100 nmol/L）、ET-1（30 nmol/L）、60 mmol/L高钾预收缩内皮完整的人肺内小动脉,pD2分别为3.82±0.20,3.84±
0.57,3.68±0.27,其最大舒张率（Emax）分别为（99.58±0.83）%,100%,（99.65±0.98）%;用L-NAME预孵育30 min内皮完整的人
肺内小动脉血管环,在浓度100 μmol/L时,同未加L-NAME孵育的血管环比较,两者之间具有统计学差异（P<0.05）;而用吲哚
美辛预孵育30 min内皮完整的人肺内小动脉环不影响白藜芦醇的舒张作用,去除血管环的内皮亦同样不影响白藜芦醇的舒张
作用。结论白藜芦醇具有浓度依赖性的舒张离体人肺内小动脉的作用,且无明显的内皮依赖性,其作用机制可能与促进NO的
释放有关。
     

白藜芦醇对小鼠慢性病毒性心肌炎心肌纤维化的干预作用

目的：目前研究认为白藜芦醇能改善病毒性心肌炎(VMC)急性期小鼠心功能及心肌损伤,在体外也具有抑制小鼠心肌纤维化的作用,但在VMC慢性期小鼠模型上,是否具有抑制心肌纤维化的作用尚未见报道。该研究旨在探讨白藜芦醇对VMC慢性期心肌纤维化干预的效果,从而为临床治疗VMC提供一定的实验依据。方法：柯萨奇病毒B3(CVB3)感染BALA/c小鼠建立VMC慢性期动物模型,30 d后将小鼠随机分为VMC模型对照组, 白藜芦醇小剂量组(10 mg/kg),中剂量组(100 mg/kg)及大剂量组(1 000 mg/kg),并设正常对照。30 d后,处死小鼠摘取心脏及提取血液,酶联免疫吸附法测各组小鼠胶原前肽(PINP,PICP及PIIINP)的血清浓度,心脏切片行苏木精-伊红染色及苦味酸天狼猩红胶原组织化学染色并计算胶原容积积分。结果：白藜芦醇大剂量组（0.74±0.19）及中剂量组（1.07±0.12）心肌胶原容积积分较小剂量组(2.17±0.19)和VMC模型对照组(2.33±0.18)明显减少,差异有显著性(P<0.05)。 大剂量组和中剂量组比较差异无显著性,小剂量组和VMC模型对照组比较差异无显著性。与VMC模型对照组比较,白藜芦醇高剂量组及中剂量组血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽（PICP）及Ⅲ型前胶原氨基端前肽（PIIICP）含量明显减少,差异有显著性（P<0.05）,而Ⅰ型前胶原氨基端前肽（PINP）含量明显增多,差异亦有显著性（P<0.05）。结论：VMC慢性期小鼠模型上,白藜芦醇能抑制VMC心肌胶原的增生,具有抗心肌纤维化的作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：291-295］     

白藜芦醇抑制ls174t细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的 探讨白藜芦醇对结肠癌ls174t细胞及其鼠移植瘤组织生长的作用及机制.方法 二苯基溴化四氮唑蓝(MTY)法检测白藜芦醇对体外ls174t细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的改变,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达.将ls174t细胞移植至裸鼠皮下,观察白藜芦醇对皮下移植瘤生长的影响;RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达.结果 (1)白藜芦醇具有体外抑制ls174t细胞增殖的作用,25、50、100、200、400 μmol/L的白藜芦醇作用ls174t细胞24 h,抑制率分别为1.0%、9.1%、17.4%、27.8%和66.5%;作用48 h,抑制率分别为3.6%、13.7%、30.2%、58.4%和86.1%;作用72 h,抑制率分别为18.1%、33.0%、48.6%、61.2%和89.4%,差异有统计学意义(P<0.01).不同浓度的白藜芦醇作用ls174t细胞后,随自藜芦醇浓度的增加,bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,baxmRNA和蛋白表达增强.流式细胞仪检测显示,白藜芦醇能诱导ls174t细胞的凋亡,使细胞周期阻滞于S期.(2)白藜芦醇可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,最大抑制率为47.9%.200 mg/kg白藜芦醇治疗组和800 mg/kg白藜芦醇治疗组的裸鼠皮下移植瘤重量分别为(4.10±0.18)g和(3.05±0.35)g,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).白藜芦醇可使裸鼠肿瘤组织中bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,而bax mRNA和蛋白表达增强.结论 白藜芦醇具有抑制ls174T细胞和皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2、bax表达有关.     

白藜芦醇对金黄色葡萄球菌标准株 抑菌作用及超微结构的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对金黄色葡萄球菌标准株ATCC 25923(简称金葡菌标准株)抑菌作用。方法 采用微量肉汤稀释法,检测金葡菌标准株最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC); 通过透射和扫描电子显微镜观察白藜芦醇对金葡菌标准株超微形态的影响。结果 白藜芦醇对金葡菌标准株的MIC为0.256 mg/ml。白藜芦醇对金葡菌标准株作用后,与对照组相比,电镜下可见金葡菌标准株菌体细胞形态变形严重,菌体大小不一,菌体边界粗糙不圆润,细胞壁缺损并有破裂,边缘疏松不光滑,菌体内结构松散,核膜断裂,局部呈现空泡化特征,菌体细胞形态超微结构有明显破坏和抑制作用。结论白藜芦醇对金葡菌标准株有明显抑制和破坏作用,抑制机制可能和破坏细胞膜通透性有关。     

白藜芦醇对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨白藜芦醇（RES）不同途径给药对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制效果。方法 取80只雄性无胸腺裸鼠（BALB/c-nu;21~27日龄,体重10~12 g）,采用U87细胞建立人裸鼠脑胶质瘤原位移植模型,采用随机数字表法分为RES干预组（造模后10 d,开始给药,1次/d,40 mg/kg）和溶剂对照组（造模后10 d,开始给药,1次/d,10 mg/kg;溶剂为0.5%羧甲基纤维素钠）,根据给药途径,RES干预组又分为RES灌胃组和RES经鼻组,溶剂对照组又分为溶剂灌胃组和溶剂经鼻组,每组20只。经鼻给药采用经鼻滴入法。采用Kaplan-Meier法分析生存曲线;造模后14、21、28、35 d测定肿瘤体积;采用CD31标记胶质瘤血管内皮细胞并计算微血管密度（MVD）,采用免疫组化方法检测胶质瘤血管内皮生长因子（VEGF）以及Ki-67表达,采用TUNEL法检测胶质瘤细胞凋亡。结果 与溶剂对照组相比,RES干预组裸鼠生存时间明显延长（P<0.05）,造模后28、35 d肿瘤体积明显缩小（P<0.05）,肿瘤组织MVD明显减小（P<0.05）,肿瘤组织VEGF和Ki-67表达水平明显降低（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,而且,RES经鼻给药较灌胃给药作用更明显（P<0.05）。结论 RES可有效抑制裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长,机制可能与抑制肿瘤血管生成和促进肿瘤细胞凋亡有关。与灌胃给药相比,经鼻给药肿瘤抑制效果更好。