热化疗对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表阿霉素(EADM)热化疗对人胆管癌细胞(QBC939)的增殖和凋亡的作用。方法以体外培养的人胆管癌细胞株为研究对象,采用水浴加热法进行体外细胞毒实验(MTT)、透射电镜观察及流式细胞仪检测,观察热疗、化疗、热化疗对人胆管癌细胞的生长抑制和凋亡的影响。结果42℃以上单纯热疗对QBC939细胞有明显杀伤作用(P<0.01),42℃以上热化疗对QBC939细胞有明显的协同或相加作用(P<0.01)。透射电镜和流式细胞术均观察到热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡的作用(P<0.01);热化疗有协同作用(P<0.01)。结论热疗、化疗、热化疗均抑制QBC939细胞增殖;热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡为其抗癌机制之一;热疗提高化疗药物的细胞毒作用。     

骨质疏松患者体外培养BMSCs的生物学特性

[目的]探讨骨质疏松患者骨髓源骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的体外培养方法和作为种子细胞的可能性.[方法]从一骨质疏松患者髂骨中抽取骨髓10ml,体外培养、传代和扩增,对细胞形态进行观察及采用流式细胞仪鉴定BMSCs;将第三代细胞分别接种在常规DMEM培养液及常规DMEM 10ng/ml(PDGF-BB)培养液,绘制两组的生长曲线、倍增时间及用MTT法分析其存活和增殖能力;将第三代细胞分别用常规DMEM培养液、常规矿化液和常规矿化液 PDGF-BB(10ng/ml)培养液培养,向成骨细胞定向诱导分化后测定三组细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量及茜素红法(ARS)钙化结节染色.[结果]倒置相差显微镜下观察显示原代细胞具有成纤维细胞的生长特性;生长曲线显示常规DMEM PDGF-BB培养液组较常规DMEM培养液组细胞增殖快且细胞倍增时间短;流式细胞仪鉴定细胞群为BMSCs,纯度在95%以上;MTT法显示三组两两之间统计学分析均有显著性差异(P＜0.01);ALP定量测定显示三组之间统计学分析有显著性差异(P＜0.01);茜素红法(ARS)钙化结节染色结果显示常规矿化液组和常规矿化液 PDGF-BB培养液两组均为阳性.[结论]从骨质疏松患者骨髓源中获得的BMSCs,经体外培养、纯化、扩增后可达到组织工程骨所要求的106～107细胞数量级,且其可诱导分化为成骨细胞;PDGF-BB能促进BMSCs的增殖,但不影响其分化成骨能力.     

超短波对间充质干细胞粘附增殖及成骨能力的影响

目的 观察鼠骨髓间充质干细胞（rMSCs）受超短波作用后其粘附、增殖及成骨分化能力的变化。 方法 将rMSCs置于超短波理疗仪上，以每日1次、每次15 min的条件进行处理，1 d后检测细胞早期粘附能力，2 d后借助倒置荧光显微镜观察细胞形态，1 d、3 d、7 d检测细胞增殖能力，7 d后检测成骨相关基因骨桥蛋白(OPN)表达量。 结果 与未经超短波处理的对照组相比，接受超短波处理的超短波组早期细胞粘附数量为前者的1.8倍（P<0.05）；2 d后超短波组比对照组细胞的伪足数量多，伪足铺展范围大；超短波组细胞连续培养7 d后，与对照组相比，其增殖能力提升（P<0.05），OPN表达上调（P<0.05）。 结论 超短波能影响rMSCs的早期粘附能力和形态，能促进其增殖和向成骨方向分化。     

胚胎干细胞分化的调控因子

应用计算机检索Pubmed数据库1999-01／2008-01期间及万方数据库、维普数据库2001-01／2008-01期间与胚胎干细胞分化的调控因子相关的44篇文章显示：胚胎干细胞分化的调控是一个极其复杂的过程，是由多个因素组成的一个庞大的维持胚胎干细胞自我更新能力的调控网络，其中特异分子和各种转录因子的最终表达量是决定胚胎干细胞是否分化的关键因素。当各种因子分泌量达到相互平衡状态时，胚胎干细胞维持自我更新，但是如果其中一个或几个因子的表达量发生改变时，就会促使胚胎干细胞向某一特定方向分化。目前研究主要集中在八聚体结合蛋白4、Nanog、SOX基因、白血病抑制因子等几条既平行又相互交错的通路所决定胚胎干细胞的自我更新。     

Fst统计法评估KIF1B基因rs17401966多态性与肝细胞癌风险Meta分析的异质性来源

目的采用Fst统计法评估二分类变量Meta分析的异质性来源。方法检索Google Scholar、EMBASE、PubMed、ISI Web of Knowledge和CNKI数据库,搜集有关KIF1B基因rs17401966多态性与肝细胞癌风险关系的病例-对照研究。应用Stata 12.0软件进行Meta分析,使用Arlequin 3.5软件分析研究人群间的遗传分化程度。结果最终纳入5个病例-对照研究,合计12个研究人群。对12个人群的Meta分析结果显示KIF1B基因rs17401966G等位基因与HCC风险负相关(OR=0.77,95%CI:0.65~0.93;P=0.005),然而合并结果存在很强的异质性。通过对12个纳入人群进行遗传分化检验,发现Zhang等的5个研究人群与其他研究人群存在不同程度的遗传分化,进而根据Fst值进行适当的亚组分析,把组8和组9异质性检验的I2值降到了25%以下,然而组8和组9的Meta分析结果却不一致。结论研究显示在对KIF1B基因rs17401966多态性与肝细胞癌风险进行Meta分析时,通过对纳入人群的遗传分化检验,可以发现Meta分析的异质性来源。     

子宫性索样肿瘤临床病理观察

目的探讨子宫性索样肿瘤（UTROSCT）的临床病理特征、生物学行为及预后。方法分析1例UTROSCT的临床和病理资料,并复习相关文献。结果患者经后不规则阴道出血2个月。大体上子宫体后壁黏膜下见一息肉状肿物1.5 cm&#215;1 cm&#215;1 cm大小,杏黄色,无旋涡状结构,肿瘤浸润浅肌层。镜下见肿瘤细胞排列呈小索状、小条状、实性管状结构,肿瘤细胞较一致,圆形、卵圆形,胞质丰富呈泡沫样,细胞多形性及非典型性不明显;核不规则,见核仁,无核分裂象。肿瘤细胞弥漫性浸润子宫肌层。肿瘤细胞CD99、calretinin、vimentinb、cl-2、AE1/AE3和PR弥漫（＋）;inhibin、CD10和ER局部（＋）。结论UTROSCT是非常少见的肿瘤,具有低度恶性潜能;确诊依赖于病理形态特点及免疫组化标记。     

用于造血干细胞移植的人骨髓间充质干细胞体外扩增研究

本研究旨在检查4种不同培养液体外培养人骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）的效果，建立一种基于临床移植需要的分离、培养人BM-MSC的方法，为BM-MSC联合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础。采用Ficoll Paque细胞分离液从16例新鲜成人骨髓穿刺液中分离BM—MSC，分别用含10％脐带血血清、胎牛血清、成人血清的DMEM／F12培养液和MesenCuh培养液培养，用流式细胞术检测细胞表面抗原，以成骨诱导体系及脂肪诱导体系分别诱导各组BM-MSC定向分化，通过细胞形态观察、免疫表型及免疫化学染色进行鉴定。结果表明：4种培养液都能从成人骨髓液中分离培养出BM—MSC，脐带血血清组和Mesen Cuh组培养的BM—MSC在增殖数量和速度上相似，但均优于FCS组和AB型血清组。脐带血血清组和Mesen Cuh组培养的BM-MSC表达CD29、CD73、CD105的阳性率比FCS组和AB型血清组高（P〈0．05），而CD31阳性率低于FCS组和AB型血清组（P〈0．05），脐带血血清组和MesenCuh组培养的BM—MSC诱导为成骨细胞和脂肪细胞阳性率高于FCS组和AB型血清组（P〈0．05）。结论：4种不同培养液能够从成人骨髓液中分离出BM—MSC，脐带血血清组和MesenCuh组培养的BM-MSC的纯度和体外诱导分化能力比FCS组和AB型血清组高，含有脐带血血清的培养体系具有临床应用价值。     

彩色多普勒超声检测前列腺癌血管生成的临床研究

既往研究证实,肿瘤组织中存在多种促血管生成因子及细胞增殖活性物,这些因素在病变发生和发展过程中起着重要作用.本研究探讨前列腺癌组织血流与增殖细胞核抗原（PCNA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达关系,为临床诊治和预后评估提供信息.……     

人羊膜上皮细胞有向心肌样细胞分化的特性

目的:通过体外诱导分化实验,评价人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力.方法:实验于2005-09/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.①对象:经产妇知情同意,无菌采集健康足月剖宫产胎盘6份,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:采用机械法将羊膜从胎盘组织上剥离,D-Hank's液冲洗后剪成碎片,加入含有0.2 g/L乙二胺四乙酸的0.5 g/L胰蛋白酶溶液,离心、消化、过滤,收集滤液,加入胎牛血清终止消化,重复消化2次.合并3次消化所得的细胞悬液,离心后将细胞沉淀悬浮于L-DMEM培养基中,按1.25×108 L-1密度接种,常规培养3 d后更换培养基,待细胞达80%~90%融合后用胰蛋白酶 乙二胺四乙酸联合消化,终止后离心弃上清,细胞沉淀用培养基重新悬浮,按1×107 L-1密度传代.③实验评估:用流式细胞仪鉴定人羊膜上皮细胞表型;使用10 μmol/L 5-氮杂胞苷和1 mmol/L抗坏血酸磷酸盐诱导第2代人羊膜上皮细胞,免疫荧光染色法检测诱导后细胞中特异蛋白结蛋白和α-辅肌动蛋白的表达,RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA-4和心肌特异性收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA的表达.结果:①人羊膜上皮细胞的免疫组化特征:人羊膜上皮细胞几乎不表达CD44,不表达波形蛋白,表达角蛋白19.②人羊膜上皮细胞α-辅肌动蛋白和结蛋白的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达肌系细胞标志α-辅肌动蛋白和结蛋白.③人羊膜上皮细胞Nkx2.5、GATA-4和α-肌球蛋白重链mRNA的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达心肌特异性转录因子Nkx2.5 mRNA和GATA-4 mRNA，心肌特异的可收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA未见表达.结论:通过胰蛋白酶消化法分离获得的人羊膜上皮细胞具有向心肌样细胞分化的特性,可能成为细胞心肌成形术的候选供体细胞.     

GAP-43在骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化过程中表达的实验研究

目的 观察生长相关蛋白-43(GAP-43)在体外培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经样细胞分化中的表达情况以探讨其在骨髓间充质干细胞定向分化过程中的作用.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,选取第3代细胞,经流式细胞仪检测细胞表面标志物进行鉴定,并分别应用化学诱导剂β巯基乙醇(BME)和脑源性神经生长因子(BDNF)诱导BMSCs分化,观察诱导后细胞的形态学变化,并应用免疫细胞化学方法对诱导后的细胞进行鉴定、分析生长相关蛋白43、神经巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF) 的表达情况.应用统计学方法比较两组细胞经诱导后2、4、6、8 h GAP-43免疫细胞化学染色阳性率.结果 第三代BMSCs经流式细胞仪检测CD90( )、CD71( )、CD29( ),CD45(-),经两种方法诱导BMSCs均可分化为神经样细胞,分化后细胞均表达GAP-43、nestin、NSE、NF.诱导后2,4,6,8 h GAP-43表达阳性率BME组为77.1%,83.4%,87.0%,82.5%,BDNF组:69.3%,78.1%,82.2%,86.8%.GAP-43随诱导分化时间增加而持续表达,两组间表达阳性率无统计学差异.结论 GAP-43在化学诱导剂及生长因子诱导BMSCs分化为神经样细胞过程中持续表达,对于骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化具有重要意义.