高通量血液透析对肾性贫血的影响

目的:探讨高通量血液透析治疗肾性贫血的疗效。方法:维持血液透析患者73例。随机分为低通量透析组(LFHD组)和高通量透析组(HFHD组),共治疗6个月。监测患者血常规、白蛋白(albumin,Alb)、全段甲状旁腺激素(intact parathyroidism hormone,iPTH)、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)等参数。记录留取静脉血前4周重组人促红素(recombinant human erythropoietin,r-HuEPO)的应用总量,以每周应用总量同血细胞比容(hematoccrit,Hct)的比值(EPO/Hct)作为评价r-HuEPO低反应的指标。比较两组患者上述指标的差别。结果:(1)LFHD组患者低通量普通透析治疗6月后,Hb、Hct、EPO/Hct、Alb、iPTH、CRP、β2-MG较试验前无明显变化(P>0.05)(2)HFHD组患者高通量血液透析治疗6个月后,Alb、Hb、Hct较试验前升高(P<0.05);EPO/Hct、CRP、β2-MG较治疗前减低(P<0.05);iPTH较治疗前略减低(P>0.05)。(3)试验结束时,HFHD组患者Alb较LFHD组高(P<0.05);Hb、Hct较LFHD组试验结束略高(P>0.05);EPO/Hct、CRP、β2-MG较LFHD组试验结束时低(P<0.05);iPTH较LFHD组试验结束时低(P>0.05)。(4)HFHD组患者治疗后Alb增加较LFHD明显,HFHD组患者治疗后CRP、MG、EPO/Hct减低较LFHD明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:高通量血液透析可以加强尿毒症患者中分子毒素的清除,改善患者的微炎症状态和营养不良,有利于改善EPO低反应性。     

不同透析方式对维持性血透患者细胞免疫功能的影响

目的:探讨不同透析方式对维持性血透患者细胞免疫功能的影响,寻找有效改善维持性血透患者细胞免疫功能的血液净化方式。方法:60例维持性血透的患者随机分为3组,分别接受血液透析(HD)、高通量透析(HFHD)、血液透析滤过(HDF)治疗。检测3组患者透析前、透析后4h、24h、48h外周血CD4+、CD8+、CD25+(mIL-2R)、CD4+/CD8+及血清IL-2、sIL-2R的变化;另设健康对照组,检测透析前各组各项指标数值。结果:HD、HFHD、HDF3组患者透析前CD4+、CD25+、CD4+/CD8+、IL-2较正常对照组下降,sIL-2R显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),CD8+差异无统计学意义(P>0.05)。与透析前比较,HD组患者透析后4hCD4+、CD25+、CD4+/CD8+、IL-2升高,sIL-2R降低,差异有统计学意义(P<0.05),透析后24h、48h以上各指标与透析前比较差异无统计学意义(P>0.05),透析后各时间点与透析前比较,CD8+差异无统计学意义(P>0.05)。HFHD组、HDF组患者透析后4h、24h、48hCD4+、CD25+、CD4+/CD8+、IL-2较透析前升高,sIL-2R降低,差异有统计学意义(P<0.05),透析后各时间点与透析前比较,CD8+差异无统计学意义(P>0.05)。与HD组相应时间点比较,HFHD组、HDF组透析后4h、24h、48hCD4+、CD25+、CD4+/CD8+、IL-2升高,sIL-2R降低,透析后4h无统计学意义(P>0.05),24h、48h的差异有统计学意义(P<0.05),CD+8差异无统计学意义(P>0.05)。与HFHD组相应时间点比较,HDF组透析后4h、24h、48hCD4+、CD25+、CD4+/CD8+、IL-2升高,透析后4h、24h差异无统计学意义,透析后48h的差异有统计学意义(P<0.05),CD+8差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HD可短暂改善MHD患者的细胞免疫功能,HFHD、HDF可持续改善MHD患者的细胞免疫功能,以HDF疗效更佳。     

慢性乙型肝炎患者外周血中共价闭合环状DNA的检测

目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血中HBVcccDNA的存在状况.方法 采用荧光聚合酶链反应(PCR)法、PCR-微流芯片法对22例慢性乙型肝炎患者外周血血清、白细胞中HBVcccDNA进行平行检测,同时检测其血清HBV DNA含量、HBV M并进行相关性分析,以2例急性戊型肝炎、2例慢性丙型肝炎为对照.结果 22例慢性乙型肝炎患者外周血血清、白细胞中HBVcccDNA分别检出10例和7例,其中2例阳性PCR产物经基因测序得到验证;血清HBV DNA阳性者16例;HBVcccDNA阳性者血清HBV DNA均阳性;对照组上述指标均阴性.结论 慢性乙型肝炎患者外周血血清、白细胞中存在HBVcccDNA;外周血HBVcccDNA与血清HBV DNA存在一定关联.     

分子诊断技术在新型冠状病毒核酸检测中的应用及发展

新冠肺炎疫情是百年来全球发生的最严重的公共卫生事件,其持续爆发凸显了快速准确的诊断分析是大流行得到控制的密钥。该文结合新型冠状病毒核酸检测现状和当前最新标准指南,对不同分子诊断技术进行评述,并对这些技术在未来传染病暴发中的应用和发展提出建议。     

维持性透析终末期肾功能衰竭患者经高通量血液透析的临床研究

目的 分析维持性透析终末期肾功能衰竭患者经高通量血液透析的临床效果。方法 选取我院收治的82例维持性透析终末期肾功能衰竭患者,随机分为对照组和观察组各41例。对照组采用低通量血液透析治疗,观察组采用高通量血液透析治疗,对比两组临床疗效。结果 经治疗后,观察组患者血磷、β2-微球蛋白均明显优于对照组,两组比较有显著差异(P0.05)。经治疗后,两组患者尿素氮、肌酐无显著差异(P0.05)。结论 高通量血液透析治疗维持性透析终末期肾功能衰竭患者的临床效果较为显著,更有利于清除大中分子毒素,提升患者的生活质量,可在临床上推广应用。     

结直肠癌K-ras基因突变位点的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠癌中K-ras基因突变状态及其与临床病理特征的关系.方法:应用实时荧光定量PCR( RT-qPCR)和直接基因测序法检测200例结直肠癌患者癌组织K-ras基因突变状态.将两种检测结果进行对比,并结合临床病理资料分析其意义.结果:200例结直肠癌患者中,RT-qPCR检测出突变63例,突变检出率31.5％;经直接基因测序,测序成功的样品169例,检出突变50例,突变检出率29.6％.其中第12密码子GGT→GAT最常见,占34.9％( 22/63);其次是第13密码子GGC→GAC,占28.6％(18/63);第12密码子GGT→CGT最少,全组未见(0/63).两种方法突变检测一致率为98％.K-ras基因突变与肿瘤分化程度有关( P＜0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移及TNM分期无明显关系(均P＞0.05).结论:RT-qPCR能快速、敏感、准确地检测结直肠癌K-ras基因突变位点,为临床靶向治疗提供可靠的参考依据.     

中国先天性双侧输精管缺如患者CFTR基因全部外显子突变检测

目的:探讨我国先天性双侧输精管缺如患者CFTR基因检测的必要性。方法:采用PCR技术结合DNA直接测序的方法检测9例先天性双侧输精管缺如患者CFTR基因全部外显子的突变情况,并在NCBI和Cystic Fibrosis Mutation Database在线比对。结果:除非编码区突变和已经报道的SNP位点之外,9例先天性双侧输精管缺如患者中4例新发现4种不同于西方人已知突变类型的外显子区突变,均为杂合子错义突变。结论:中国先天性双侧输精管缺如患者CFTR基因外显子区存在不同于西方人的突变,有必要对中国先天性双侧输精管缺如患者进行CFTR基因突变检测。     

应用新一代半导体靶向测序技术检测枫糖尿症致病基因突变的研究

目的应用Ion Torrent半导体靶向测序技术检测1例枫糖尿症(MSUD)患儿的致病基因突变,明确其致病突变,并探讨该技术用于复杂单基因病检测的可行性。方法采集患儿外周血,提取基因组DNA,经多重PCR扩增富集目的基因片段,构建平均片段大小为300bp左右的文库,经乳液PCR及磁珠颗粒富集,最后采用318半导体测序芯片进行高通量测序,应用Ion Torrent Suite v3.0软件进行数据提取、序列比对及SNPs和Indels提取,再用dbSNP 137数据库过滤得到SNPs和Indels,可疑突变经Sanger法测序验证。结果检出患儿1个新发错义点突变并通过Sanger测序验证,突变是BCKDHB基因第6外显子的NM183050:c.586CT(p.His196Tyr)。结论 Ion Torrent半导体靶向测序技术可对复杂单基因遗传病进行快速、准确地基因诊断。     

基于分子标签二代测序技术的非小细胞肺癌驱动基因变异分析

目的通过对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的血浆ctDNA标本采用基于分子标签(UMI的二代测序(NGS)技术进行相关驱动基因突变分析,评估血浆ctDNA二代测序技术指导靶向用药的价值及注意事项。方法纳入了163例2017年7月至2019年7月期间在中山大学附属肿瘤医院就诊的NSCLC患者血液标本,采用基于分子标签的二代测序方法,检测患者血浆ctDNA中与NSCLC相关的11个驱动基因的突变情况。结果 98例初诊初治的NSCLC患者中,37.8%(37例)患者未检出肺癌驱动基因突变。其余患者中TP53、EGFR、ERBB2、RET、KRAS、ALK、PIK3CA、BRAF、MET、ROS1、NRAS的突变频率分别为33%、24%、10%、8%、7%、6%、4%、3%、3%、3%和1%。57例EGFR-TKI靶向治疗后进展的NSCLC患者中,21例(36.8%)检出T790M突变,3例(27.3%)接受三代EGFR-TKI治疗后进展的患者出现T790M与T797S顺式耐药突变。其他耐药突变包括KRAS基因突变(2例)、MET基因扩增(1例)以及PIK3CA基因突变(8例)。29例组织样本ARMS-PCR检测结果阳性的患者,组织EGFR突变阳性患者与ctDNA检测EGFR阳性患者之间的一致性为13.8%。结论该方法不仅能够检出初诊初治NSCLC患者中靶向治疗的敏感突变,还可以对靶向治疗进展后的耐药突变情况进行监测。因此,可选择基于分子标签的二代测序检测技术来指导NSCLC患者的个性化用药。     

利用NGS技术同时检测缺失和点突变型地中海贫血

目的建立一种跨越断裂点PCR(Gap-PCR)结合下一代测序技术的地中海贫血基因检测方法。方法对地中海贫血核酸国家参考品进行PCR扩增,PCR产物进行高通量测序。结果 32例国家参考品涉及的3种α突变型别,16种β突变型别,4种α缺失型别,2种β缺失型别全部检出,均与原型别一致。结论本研究通过建立基于Gap-PCR结合下一代测序技术检测地贫的方法进一步完善了遗传病基因诊断方法,对遗传病的携带人群筛查,优生优育咨询,防止出生缺陷等方面具有重要意义。