基于蒙特卡洛模拟评价头孢噻肟/他唑巴坦对产ESBL肠杆科细菌不同给药方案研究

目的：探讨头孢噻肟/他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株的最低抑菌浓度（MIC）分布情况,评估头孢噻肟/他唑巴坦不同给药方案下%fT_>MIC≥50%达标率,为该药临床给药方案的筛选及优化提供参考 。方法：采用微量肉汤稀释法测定头孢噻肟单药、头孢噻肟/他唑巴坦（他唑巴坦固定质量浓度4 μg·mL^-1）及头孢噻肟/他唑巴坦（6∶1）对临床分离菌株的MIC值,计算MIC₅₀及MIC₉₀,并统计MIC的分布情况。运用蒙特卡洛模拟（MCS）计算不同给药方案下头孢噻肟/他唑巴坦达目标 PK/PD靶值的达标概率（PTA）和累积反应分数（CFR）。结果：相比与单药头孢噻肟,头孢噻肟/他唑巴坦（他唑巴坦固定质量浓度4 μg·mL^-1）及头孢噻肟/他唑巴坦（6∶1）对于实验菌株的MIC₅₀和MIC₉₀均明显降低。头孢噻肟/他唑巴坦（他唑巴坦固定浓度4 μg·mL^-1）所有给药方案下的CRF均大于90%;头孢噻肟/他唑巴坦（6∶1）仅3.0 g q8h静滴4 h和6 g q24h持续静滴给药方案下CRF大于90%。当MIC≤2 μg·mL^-1时,头孢噻肟/他唑巴坦所有给药方案均能使PTA>90%。当MIC≤8 μg·mL^-1时,q8h及24 h持续静滴方案下的PTA>90%。结论：对于国内产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株,头孢噻肟/他唑巴坦钠（6∶1）的配伍明显提高了头孢噻肟对产ESBL大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的抗菌作用。对于肾功能正常患者,当MIC≤2 μg·mL^-1时,可以选择头孢噻肟/他唑巴坦2 g q12h给药方案,对于高MIC菌株,日剂量不变时,q8h方案比q12h方案更具优势。     

产毒性大肠杆菌菌毛K_(99)抗原单克隆抗体的研制及初步鉴定

本文应用Sephadex A-50层析柱纯化的产毒性大肠杆菌(ETEC O_(101)·K_(99)~ ·H~-株)免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与Sp2/0-As14骨髓瘤细胞系融合,获得17株抗K_(99)抗原杂交瘤细胞。对其中5C_5细胞株经三次克隆化,达100％阳性,传代三个月及液氮保存复苏,生长良好,并能持续分泌抗K_(99)抗原的单克隆抗体。IF法测定杂交瘤细胞培养上清,阳性滴度为     

胰高血糖素衍生物在大肠杆菌的克隆表达和纯化

 目的 通过基因工程途径获得胰高血糖素衍生物。 方法 根据胰高血糖素基因及凝血酶酶切位点序列，分段合成引物行 PCR 扩增，以 PCR 扩增得到的胰高血糖素-甘氨酸基因序列和 pET-30a 质粒转化 E.coli DH5α，获得重组质粒 pET-G。将重组质粒 pET-G 转化至 E.coli BL21(DE3)，重组菌株命名为 E.coli BL21[pET-G]。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，对表达产物进行SDS-Tricine- PAGE[十二烷基硫酸钠-三（羟甲基）甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳]分析和蛋白质印迹分析。对表达产物行Ni2+-NTA亲和层析纯化、凝血酶酶切和高效液相色谱（HPLC）纯化后，行 SDS-Tricine-PAGE分析和飞行质谱分析，并以 ELISA 方法检测其免疫活性。 结果 PCR 扩增获得的条带与预期的DNA表达片段大小一致，重组质粒 pET-G 测序结果与预期完全一致。SDS- Tricine-PAGE 和蛋白质印迹分析显示 E.coli BL21（DE3）的表达产物相对分子质量与预期相符。经亲和层析纯化、凝血酶酶切和 HPLC 纯化后得到了完整的重组胰高血糖素-甘氨酸衍生物，SDS-Tricine-PAGE 分析显示其相对分子质量约为 3500，飞行质谱分析相对分子质量为 3531，二者基本一致。ELISA 检测表明重组胰高血糖素-甘氨酸衍生物具有胰高血糖素免疫活性。 结论 采用基因工程技术在大肠杆菌中成功表达了胰高血糖素-甘氨酸衍生物，为通过体外酰胺化途径研制酰胺化胰高血糖素奠定了基础。     

结核分枝杆菌Ag85B基因疫苗免疫保护作用的初步研究

目的:研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用。方法:以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠。免疫完成6 wk后,用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染。同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞,并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠,立即用105 CFU的MTB毒株经小鼠尾静脉攻击感染。4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷。结果:与生理盐水对照组相比较,pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少,分别为0.645(log10 CFU,P<0.01)和0.839(log10CFU,P<0.001);而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少。经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞,过继免疫的正常BALB/c小鼠,对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用。结论:pTB30s免疫的BALB/c小鼠,对MTB H37 Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫,有望进一步用于结核病的防治研究。     

胸腔镜下对肺大泡破裂者实施麻醉的处理分析

目的分析胸腔镜下对肺大泡破裂者实施麻醉的处理要点。方法回顾性分析我院在2016年12月至2018年8月收治的胸腔镜下治疗肺大泡破裂患者60例的临床治疗,分析麻醉助理过程,比较患者术中、术后各生理生化指标。结果肺大泡破裂患者术后呼吸潮气量、血氧饱和度均显著高于术中(P0.05),有统计学意义;肺大泡破裂患者术中、术后心率、收缩压、舒张压比较无显著差异(P 0.05),无统计学意义;胸腔镜下麻醉及手术均顺利进行,无患者死亡,术后拔管,出现2例急性呼吸衰竭患者,重新置管及呼吸机通气治疗后,恢复良好。未见苏醒延迟、肺不张等麻醉并发症现象的出现。结论胸腔镜下治疗肺大泡破裂患时,实施准确、合理的麻醉处理能促进手术效果的提高,防止并发症的发生,利于患者预后。     

中性粒细胞与淋巴细胞比值和支气管扩张症急性加重期严重程度的相关分析

目的 探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)与支气管扩张症(支扩症)急性加重期严重程度的相关性 。方法 回顾性分析2016年1月—2019年4月在本院呼吸科住院治疗的支扩症患者481例,纳入符合入组条件的191例,其中男性75例,女性116例,年龄17～86岁,平均(59.23±13.34)岁。分析NLR、血红蛋白(HB)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、C反应蛋白(CRP)和支气管扩张严重程度(bronchiectasis severity index,BSI)以及FAECD积分的相关性;用多重线性回归分析法分别分析BSI及FACED积分的影响因素;分别根据支气管扩张严重程度(BSI)、FACED积分将入组患者分为轻、中、重组,用单因素方差分析NLR在不同组之间的差异 。结果 血清NLR(r=0.67)、PLR(r=0.45)、CRP(r=0.56) 和BSI积分呈正相关(P值均<0.01)。血清NLR(r=0.53)、PLR(r=0.43)、CRP(r=0.45)和FACED积分呈正相关(P值均<0.01)。多重线性回归分析显示:NLR(β系数1.29,95%CI 0.95～1.72,P=0.01)、CRP(β系数1.24,95%CI 0.68～1.55,P<0.01)对BSI积分的影响均有统计学意义,NLR(β系数1.25,95%CI 0.70～1.66,P=0.02)、CRP(β系数1.20,95%CI 0.53～1.60,P=0.01)对FACED积分的影响均有统计学意义。BSI及FACED积分越高NLR水平越高,NLR分别在两种积分不同严重程度组间差别均有统计学意义(P值均<0.05)。结论 NLR是预测支扩症急性加重期严重程度的有用指标。     

产毒性大肠杆菌菌毛（F41）单克隆抗体体内被动传递保护作用的研究

产毒性大肠杆菌(ETEC)F41^ 菌株20LD50喂饲感染BALB／c新生乳鼠，在感染前、后3h，给母鼠尾静脉注射1：10或1：100稀释的抗F41单克隆抗体(McAb)，观察McAb对感染新生乳鼠的传递被动保护作用。结果发现，感染前McAb 1：10的保护率为100％，1：100的保护率为11．5％；感染后McAb1：10的保护率为51．7%，1：100的保护率为4．1％。这表明传递被动保护作用是有效果的，保护效果与McAb的注射剂量和注射时间密切相关。     

Th1型细胞因子基因对结核分枝杆菌基因疫苗诱导BALB/c小鼠产生抗CFP10抗体水平的影响

目的：研究分别表达含IL—12和IL-18基因的质粒，对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)H37R1株CFP1O基因疫苗诱导免疫应答的影响。方法：从正常人外周血单个核细胞(PMBCs)中提取RNA，用RT—PCR扩增IL-18 cDNA，并克隆人载体pGEM—Teasy中。测序证实后，亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点。将分别表达小鼠IL—12和人IL—18基因的真核表达质粒pcmlL12和pclL18，与MTB CFP10基因疫苗联合肌注免疫BALB／c小鼠，共免疫3次，每次间隔2wk。每次免疫后2wk采血、分离血清，用ELISA检测小鼠血清抗CFP10抗体的滴度。结果：用RT—PCR成功地从人PMBC的RNA中扩增出IL—18 cDNA，测序结果正确，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定证实，目的基因已插入载体pcDNA3．1中，阳性克隆命名为pcIL18。pcCFP10组第1次免疫后，血清抗CFP10抗体的平均滴度为1：600，末次免疫后的滴度为1：4000。pcIL18 pcCFP10组联合免疫后，血清抗CFP10抗体的滴度高于pcCFP10组，最终达1：8000。而pcmIL12 pcCFP10组联合免疫后滴度仅为1：200。结论：pcIL18与CFP10基因疫苗联合免疫，可增强CFP10抗原的特异性体液免疫应答；pcmIL12则可使CFP10基因疫苗产生的抗体水平降低。pcIL18 pcCFP10基因联合免疫是否具有增强CFP10抗原特异性细胞免疫的作用有待进一步研究。     

藏药浴基本药物组成、药浴处方及藏药浴临床效果研究

藏药浴是藏医内病外治方法之一,通过在基本方"五味甘露汤"的基础上加减药物来进行药浴,具有疗效显著、毒副作用小等特点。简要叙述藏药浴的基本药物组成、药浴处方及临床效果。     

《中国药典》毒性药材及饮片在少数民族地区使用情况分析

2015版《中国药典》共收载83种毒性药材及饮片,按毒性大小分为大毒、有毒、小毒,其中大毒10种、有毒42种、小毒31种,各种毒性药材及饮片在少数民族地区均有应用,对少数民族人民的健康起着非常重要的作用。但历年来由于少数民族对一些药材及饮片的毒性或副作用了解缺乏,导致在使用过程中出现各种安全问题,所以归纳和总结这些毒性药物在少数民族地区的使用情况非常必要。