肺癌患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性研究

目的 检测人类O^6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）基因5个外显子的单核苷酸多态（SNPs）及其与肺癌的关系。采用聚合酶链式反应（PCR）－单链构象多态性（SSCP）－DNA直接测序法对100例正常人和60例肺癌患者外周血白细胞进行MGMT基因SNPs研究。结果 在正常人群和肺癌患者中检测到MGMT基因的第3、4外子上存在着SNPs，即第3外显子上第250位碱基C被T所取代，导致错义突变（CTT→TTT，使Leu84Pphe）；第4外显子第280位碱基C被T取代，导致同义突变（TTC→TTT，均编码Phe）。这两个位点的SNPs在两组人群间的检出率差异无显著性（P＞0．05）。结论 MGMT基因第3、4外显子上存在着SNPs，其侈态改变与肺癌形成的关系较弱。     

甲醛诱导MRC-5细胞适应性反应蛋白质研究

目的研究甲醛诱导真核细胞适应性反应及其可能的机制。方法建立甲醛刺激人胚肺成纤维细胞（MRC-5）适应性反应模型;采用AlamarBlue还原率检测细胞增殖。双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,图像分析后选取差异蛋白点进行质谱鉴定。结果AlamarBlue检测结果表明,低剂量甲醛预刺激可诱导细胞适应性反应。双向凝胶电泳结果显示,甲醛刺激后19个蛋白斑点发生变化,肽指纹图谱及肽序列标签鉴定了其中13个蛋白斑点,已鉴定的蛋白包括二磷酸核苷酸激酶、延长因子1-γ,磷酸丙糖异构酶、60S酸性核糖体蛋白P0、75 kDa热休克蛋白、70 kD热休克蛋白样结合蛋白、钙依赖磷脂结合蛋白I、假想蛋白FLJ 34423、微管-肌动蛋白交叉连接因子1、核纤层蛋白B2、ATP合成酶α链、蛋白酶体α亚基6,这些蛋白功能涉及转录调节、蛋白折叠、信号传导、能量代谢、细胞骨架等各个方面。结论低剂量甲醛可诱导MRC-5细胞适应性反应,多种蛋白参与细胞的适应性反应调控。     

三氯乙酸染毒对肝L-02细胞的增殖作用及对DNA甲基化水平的影响

目的 检测三氯乙烯(TCE)主要代谢产物三氯乙酸(TCA)对人肝L-02细胞染毒24 h后的增殖作用,以及对DNA总体甲基化水平的影响,探索TCE对肝L-02细胞的表型遗传毒性.方法 选择0.1-0.9 mmol/L浓度TCA作为合适的染毒剂量对肝L-02细胞染毒24 h后分别进行下列试验:以CCK-8试剂盒观测细胞的生长曲线;以抗5-mC抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化总体水平(代A 0.9 mmol/L染毒24 h);以流式细胞仪(FCM)检测其对细胞周期的影响及凋亡情况;提取细胞DNA进行琼脂糖电泳分析其对DNA的损伤作用.以上试验必要时设置5-氮杂胞苷(5-aza-dC5 μmol/L)处理的L-02细胞为基因组DNA低甲基化的对照以及肝癌细胞作为细胞周期分析的对照.结果 TCE在0.1～0.9 mmol/L浓度下染毒24 h后可以促进肝L-02细胞生长,并在0.9 mmol/L浓度作用下24 h可致肝L-02细胞DNA总体甲基化水平降低,荧光强度和正常细胞比较明显减弱;细胞周期分析发现TCA处理24 h后再用正常培养基继续培养24 h后可使细胞S G2期中细胞比例增加(与肝癌细胞接近);DNA梯状电泳分析未发现DNA损伤性改变.结论 TCA染毒24 h可促进细胞生长,可诱导基因组DNA低甲基化,并造成细胞周期的改变.提示TCA对肝细胞的早期细胞毒性作用与表型遗传机制有关.     

细胞培养技术在肺纤维化研究中的应用

人体吸入的粉尘在肺中溶解、沉积后,对局部组织的物理性、化学性刺激、灼伤作用可以引起急性、慢性炎症,从而产生各种促肺纤维化因子[1,2],最终导致肺纤维化。尽管各种粉尘导致肺纤维化的组织病理不同,但其导致肺组织的纤维化改变是共同的,随着细胞外基质的沉积和细胞增殖,慢慢形成了以肺间质性纤维化(IPF)为特征的病变[1]。除了粉尘之外,有些化学物质的慢性作用也可引起肺纤维化改变,如氮氧化物[3]。为了弄清各种有害因素的致纤维化作用,传统的方法是采用动物模型进行研究。近些年来,越来越多的学者开始从细胞水平甚至分子水平对肺纤维化…     

乳腺癌患者RASSF1A基因启动子区甲基化及临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中RASSF1A（RAS association domain family 1A）基因启动子区CPG岛甲基化状态及临床意义。方法 用甲基化特异性PCR（MSP）检测40份乳腺癌组织和24份正常乳腺组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态。结果 乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子区CPG岛甲基化率为45．0％（18／40），与正常乳腺组织比较差异有显著性（2／24）（P〈0.05），但与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性（P〉0．05）。结论 RASSF1A基因启动予区在乳腺癌中发生异常甲基化，为乳腺癌的候选基因。     

肺癌患者hPARP-1基因突变PCR-SSCP检测

目的用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术研究肺癌患者聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（hPARP-1）基因突变情况，寻找与肺癌发生相关的分子标记物。方法收集广东地区220名健康人群和106例肺癌病人的基础资料及血液标本，常规酚-氯法抽提血液DAN，用PCR单链构象多态性（SSCP）法检测hPARP-1基匹1第13，17和20外显子突变情况，并进行DNA序列分析。结果检测出5例肺癌病人在hPARP-1基因第17外显子有杂合性突变，为CAC→CGC的错义突变，即组氨酸→精氨酸。hPARP-1基因其余2个外显予未发现突变。结论PCR-SSCP是筛检基因突变的1种快速有效的方法，hPARP-1基因第17外显子上的突变可能是与肺癌发生相关的1种分子标记物。     

毒物刺激作用的研究进展

剂量一反应关系是进行毒理学风险评估与制定条例的最基本概念，公共卫生管理部门以此为基础进行有害因素的危险度评价，并制定相应的管理法规和控制措施。传统使用的剂量-反应关系基本模型有两种：阈值模型（用来评估非致癌物的危险程度）和线性非阈值模型（用来外推极低浓度下致癌物的危险陛）。Calabrese和Baldwin对此剂量-反应关系模型提出质疑，认为目前应用的毒性预测模型建立在一个错误的毒理学模型基础上，同时提出一个更具预测性的模型。即曲线性剂量-反应关系模型（hormetic dose-response model）。随后，《Science》也发表了多篇关于毒物刺激作用（hormesis）的评论，使毒物刺激作用成为近年来的关注热点。为此，我们对毒物刺激作用的研究机制和展望综述如下。     

低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞适应性反应研究

目的通过研究低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)适应性反应的量效关系,建立氧化适应模式,探讨真核细胞过氧化适应性反应及其可能机理。方法应用HLF,以HQ为诱导剂,用不同剂量HQ对HLF细胞预处理12h后,再用80μmol LHQ攻击HLF1h,结合微核试验、彗星实验及细胞周期变化,观察低剂量HQ诱导的适应性反应。结果在细胞整体活力水平,0.001μmol L、0.01μmol LHQ预处理可以提高HLF对攻击剂量80.0μmol L的耐受性。与对照组比较,从0.5μmol LHQ剂量开始预处理的HLF的微核率和核异常率明显增加(P<0.05),细胞出现不同程度拖尾现象,拖尾率及彗星尾长显著增加(P<0.01),从0.1μmol L预处理剂量开始,随着预处理剂量的增加,属3级、4级DNA损伤细胞比例逐渐增加。细胞周期出现G2期阻滞,G1期比例减少。与细胞仅大剂量攻击比较,0～0.1μmol L预处理的HLF微核率和核异常率、尾长及拖尾率均明显减少、DNA重度损伤比例明显下降(P<0.05)。相关分析表明,预处理剂量从0.1μmol L开始,HLF的微核率、核异常率、拖尾率及彗星尾长与HQ预处理剂量间均存在剂量反应关系。结论低剂量HQ预处理HLF后再用高剂量去攻击,出现不同程度的适应性反应。