基于计算机辅助药物设计的清肺排毒汤多靶点系统治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)物质基础探究

目的通过对清肺排毒汤功效和新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病机的分析,基于计算机辅助药物设计(CADD)从多靶点结构出发系统探索清肺排毒汤排毒、抑制炎症风暴、利水渗湿3个方面的物质基础和分子机制。方法 TCMSP下载清肺排毒汤成分,基于血管紧张素转化酶II(ACE2)、白细胞介素-6受体(IL-6R)和水通道蛋白(AQP)分别进行分子对接虚拟筛选并对其结合模式进行分析。对利水药白术、茯苓、猪苓、泽泻进行反向靶点预测和GO分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制。结果阻断病毒作用最突出的前3位中药为甘草、麻黄、枳实,抑制炎症作用最突出的前3位中药是甘草、柴胡、紫菀;清肺排毒汤4个子方中,小柴胡汤阻断病毒、抑制炎症风暴的潜在活性化合物数均排第1。槲皮素及其衍生物对ACE2和IL-6R2个靶点均具有较强结合能力,是潜在的双靶点活性化合物。ACE2的Lys353残基是化合物与ACE2结合的关键位点。白术、茯苓、猪苓、泽泻缺乏阻断病毒、抑制炎症风暴的化合物,分子对接结果显示,这4味药材中含有的东莨菪内酯、去氢齿孔酸、α-D-半乳糖、环氧泽泻烯具有与水通道蛋白4(AQP4)的潜在结合能力。结论清肺排毒汤可通过多种化合物分别与ACE2、IL-6R、AQP4结合,发挥排毒、抑制炎症风暴、利水渗湿的作用;各组成子医方配伍合理,通过多点协同、优势互补发挥防治作用;得到了中药阻断新型冠状病毒(SARS-Co V-2)成分关键的结合位点Lys353,为清肺排毒汤药效机制的多角度挖掘和单体成分的现代化开发提供线索。     

雷公藤甲素对宫颈癌患者免疫功能及肿瘤细胞增殖的影响

目的：探讨雷公藤甲素（triptolide）对宫颈癌患者免疫功能和肿瘤细胞增殖的作用。方法：选取2015 年7 月至2018 年4 月河北北方学院附属第二医院妇产科收治的62 例宫颈癌患者，通过随机数字法分为观察组和对照组，每组各31 例。两组患者均在腹腔镜手术后接受常规治疗，观察组患者联合雷公藤甲素进行治疗。观察、比较两组患者的疗效、血清免疫细胞和炎症反应因子以及细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、雌激素受体α（ERα）水平。结果：观察组宫颈癌患者治疗后的客观缓解率显著高于对照组（87.10% vs 61.29%，P<0.05）。治疗后两组CD3+和CD4+T淋巴细胞以及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值均显著升高，观察组显著高于对照组；两组CD8+及PD-L1 T淋巴细胞均显著下降，观察组显著低于对照组（P<0.01）。治疗后，两组患者IL-6、IL-10 以及TNF-α 水平均显著下降，观察组显著低于对照组（P<0.01）。治疗后，两组患者cyclinD1 阳性表达率均显著下降、ERα 阳性表达率均显著升高（均P<0.05）；两组间cyclinD1 和ERα 阳性表达率比较差异无统计学意义（均P>0.05）。结论：在常规手术治疗的基础上，雷公藤甲素可有效改善宫颈癌术后患者的免疫功能、降低机体炎症反应、抑制肿瘤细胞的增殖，对宫颈癌具有一定的治疗效果。     

自噬介导的雷公藤甲素提高西妥昔单抗对SW480细胞治疗效果的实验研究

目的观察雷公藤甲素联合表皮生长因子受体单克隆抗体西妥昔单抗对人结直肠癌细胞SW480细胞株生物学行为的影响。方法雷公藤甲素、西妥昔单抗单独或联合作用于SW480细胞株, MTT法、细胞克隆实验检测细胞增殖抑制率;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测雷公藤甲素诱导细胞自噬性凋亡标记物p62、LC3-Ⅱ;雷公藤甲素及西妥昔单抗单独和联合作用细胞后,Western blot分析上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、Vimentin以及mTOR、Snail、Twist蛋白水平。结果雷公藤甲素及西妥昔单抗对SW480细胞的增殖抑制作用均呈剂量依赖性,两药联用可明显抑制SW480细胞增殖;雷公藤甲素诱导SW480细胞p62蛋白下调,LC3-Ⅱ上调,发生自噬性凋亡;雷公藤甲素单药组、联合用药组均能明显抑制SW480细胞发生EMT,其标记分子E-cadherin蛋白上调,Vimentin蛋白下调,关键分子Snail、Twist表达下调。结论雷公藤甲素联合西妥昔单抗抑制SW480细胞增殖和转移具有明显协同作用,雷公藤甲素通过抑制mTOR通路,可以诱导细胞自噬性凋亡,自噬介导的雷公藤甲素抑制肿瘤细胞EMT可能是逆转西妥昔单抗耐药的机制。     

芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用

目的探讨芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取手术切除的人增生性瘢痕组织以及局部皮瓣转移修复后剩余的正常皮肤,提取成纤维细胞。通过MTT试验检测不同浓度的芒柄花黄素对成纤维细胞增殖的作用,应用流式细胞术对芒柄花黄素处理后的成纤维细胞周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechest 33258染色观察成纤维细胞的凋亡情况。通过Western blot与RT-PCR试验,检测芒柄花黄素对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果与对照组比较,芒柄花黄素对正常皮肤成纤维细胞的增殖影响较小,对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强。成纤维细胞大部分阻滞于G_1期,S期的细胞减少,细胞周期的进程受到阻断。芒柄花黄素能够通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1来影响细胞周期的进程,将细胞周期阻滞于G_1期;通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论芒柄花黄素能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可考虑用于增生性瘢痕的预防与临床治疗。     

卡前列素氨丁三醇+卡前列甲酯栓对产后出血疾病的作用

目的探究产后出血患者使用卡前列素氨丁三醇联合卡前列甲酯栓治疗的效果及不良反应情况。方法选2015年6月至2018年6月期间我院收治的产后出血患者60例,通过单双号法将其平分为实验组与比较组,对比较组患者施行传统缩宫素联合米索前列醇药物治疗,实验组患者施行卡前列素氨丁三醇联合卡前列甲酯栓药物治疗,对比两组患者临床治疗效果、止血情况及不良反应发生率。结果实验组治疗总有效率明显高于比较组(P <0.05),止血起效时间短于比较组,产后2 h流血量、产后12 h流血量少于比较组(P <0.05),不良反应发生率低于比较组(P <0.05)。结论产后出血使用卡前列素氨丁三醇联合卡前列甲酯栓效果显著,患者不良反应少,安全性高,值得临床推广。     

探讨垂体后叶素联合卡前列素氨丁三醇预防胎盘早剥患者产后大出血的效果

目的针对胎盘早剥患者行剖宫产手术为防止大出血采用垂体后叶素联合卡前列素氨丁三醇治疗的效果和作用进行分析研究。方法在本院(2015年4月1日至2017年4月1日)的胎盘早剥行剖宫产术的患者,随机挑选36例,对其中的18例患者进行卡前列素氨丁三醇治疗,记为对比组,对剩下的18例患者在对比组的基础上加用垂体后叶素治疗,记为观察组(除外高血压,冠心病,动脉硬化症等垂体后叶素使用禁忌证患者),对比效果。结果观察组的患者通过治疗以后的效果要好于对比组。结论针对胎盘早剥患者行剖宫产术,为预防大出血术中采用垂体后叶素联合卡前列素氨丁三醇治疗以后,可有效降低患者在手术中出血及术后大出血现象。     

卡前列素氨丁三醇治疗孕产妇产后出血的临床观察

目的观察并研究卡前列素氨丁三醇对孕产妇产后出血进行治疗的效果。方法本研究所有研究对象均为我院收治的孕产妇产后出血患者,患者入院时间为2016年10月至2017年10月,本研究选择120例作为研究对象,同时选择采用随机分组的方法,将所有研究对象分为观察组与对照组两个组别,每组平均为60例。为对照组选择采用缩宫素联合米索前列醇的方法进行止血的处理,观察组患者选择采用缩宫素联合卡前列素氨丁三醇方案进行治疗,评价两组患者的治疗效果。结果对两组患者的治疗效果进行比较,观察组患者的止血总有效率明显高于对照组,两组之间存在差异性,P <0.05,具有统计学意义;对两组患者的产后出血量和止血时间进行评价,观察组患者与对照组患者之间存在差异性,而且观察组优于对照组,P <0.05,差异明显,具有统计学意义;对两组患者的不良反应症状的发生情况进行比较,观察组和对照组也存在有差异性,观察组的不良反应症状的发生率低于对照组,P <0.05,差异明显,具有统计学意义。结论对于孕产妇产后出血在进行治疗时,为患者选择采用缩宫素联合卡前列素氨丁三醇进行治疗能够有效提高止血的有效率,并且可以有效地减少产后出血量,缩短产后出血的时间,具有一定的安全性,具有推广应用的价值。     

灯盏乙素介入IP3R-Ca2+途径抑制β淀粉样蛋白诱导的神经细胞凋亡

目的：观察灯盏乙素（Scu）对β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的细胞模型中1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP₃R）-Ca²⁺途径的影响，探讨其在阿尔茨海默病（AD）病程中可能发挥的积极作用。方法：选用神经母细胞瘤细胞分为对照组、Scu处理组、Aβ处理组、Aβ+Scu （高、中、低）处理组及Aβ+IP₃R拮抗剂组，用CCK-8法筛选药物浓度并检测各组细胞生存率；用酶联免疫吸附法检测各组细胞中1，4，5-三磷酸肌醇（IP₃）的含量；用蛋白印迹和实时荧光定量聚合酶链反应方法检测各组细胞IP₃R和凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA的表达水平；用激光共聚焦显微镜观察各组细胞内Ca²⁺浓度的变化；用AnnexinV/PI双染法测定各组细胞的凋亡率。结果：与对照组和Scu处理组相比，Aβ处理组细胞存活率下降，IP₃含量升高，IP₃R、Bax和Caspase-3的蛋白及mRNA表达上调，Bcl-2蛋白及mRNA的表达下调，细胞胞浆内Ca²⁺浓度及细胞凋亡率升高；Aβ+Scu处理组细胞中各检测指标的变化与Aβ处理组的结果正好相反，IP₃R通道下游指标的变化与Aβ+IP₃R拮抗剂组基本一致。结论：Scu能够下调通路蛋白IP₃、IP₃R的表达，抑制Aβ介导的Ca²⁺内流所致的细胞凋亡，可能通过对IP₃R-Ca²⁺途径的调控来影响AD病程。     

柏子养心丸中醋五味子的质量控制方法研究

目的建立柏子养心丸中醋五味子的质量控制方法。方法采用TLC法检查柏子养心丸中安五脂素,以硅胶G为固定相,三氯甲烷-丙酮(60∶1)为展开剂;采用HPLC法测定柏子养心丸中五味子醇甲的含量,以Waters Symmetry C18为色谱柱,乙腈-水(42∶58,v/v)为流动相,检测波长250nm。结果薄层色谱灵敏度高,专属性强。高效液相色谱分离效率高,五味子醇甲在2.07～41.40μg·mL~(-1)内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9999);高、中、低浓度平均回收率均高于97.0%(n=3)。结论该方法准确、简便、可行。对所有样品进行检验,不合格率为17.9%,能有效控制醋五味子的质量及投料情况,可作为柏子养心丸的质量控制方法。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对替加环素不同体外药敏试验方法学评估

目的 比较不同药敏试验方法检测替加环素对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的敏感性。初步了解辽宁地区CRKP对替加环素的耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法 回顾性收集辽宁省内多家大型三甲医院2011年1月-2016年12月分离的CRKP共269株，采用微量肉汤稀释法、KB纸片扩散法、Vitek-2仪器法及E试验法检测替加环素对CRKP的敏感性。结果 微量肉汤稀释法、E试验法、Vitek-2仪器法测定替加环素MIC50和MIC90分别为(0.5/1)、(0.25/0.5)和(0.5/4)μg/mL。按美国食品与药品监督管理局(FDA)和欧洲药敏试验委员会(EUCAST)判读标准，微量肉汤稀释法测得CRKP对替加环素的敏感率为97.4%/93.3%，中介率为2.2%/4.1%，耐药率为0.4%/2.6%。E试验法敏感率最高，为100%/98.9%，Vitek-2法耐药率最高，为8.6%/13.4%，纸片扩散法的中介率最高，为11.9%/46.5%。与微量肉汤稀释法比较，E试验法的基本一致率(EA)和分类一致率(CA)均≥90%，但存在重大误差(VME)，分别为0.4%/1.9%；Vitek-2法EA仅为61.7%，CA为87.4%/72.1%，且大误差(ME)为6.3%/7.4%，无VME；纸片扩散法CA仅为85.9%/46.5%，小误差(mE)为1.9%/2.6%，ME为0.7%/5.6%。结论 辽宁地区绝大多数CRKP对替加环素仍保持较高的敏感性。对于CRKP、E-试验法、Vitek-2仪器法和纸片扩散法均不适合单独检测替加环素敏感性，可考虑联合检测，若结果不一致，均应参考微量肉汤稀释法。