芍药苷对LPS诱导的RAW264.7细胞HMGB1表达的影响

目的:观察芍药苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核/巨噬细胞株(RAW264.7)高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放和表达的影响.方法:体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞培养三代后,转种于放置了无菌处理盖玻片的6孔培养板中,将细胞分为对照组、LPS刺激组(100 ng/mL)、芍药苷组(LPS 100 ng/mL+芍药苷0.625 mg/mL);LPS刺激20 h后,免疫细胞化学法检测各组培养细胞HMGB1的表达水平.结果:LPS刺激RAW 264.7细胞20 h后,LPS组细胞核HMGB1特异性染色变淡,胞浆染色加深,表明HMGB1从胞核转移到胞浆; 芍药苷组大部分细胞核HMGB1特异性染色深,而胞浆染色浅,表明芍药苷抑制HMGB1从胞核转移到胞浆.对HMGB1免疫组化数字图像的累积光密度值分析显示,HMGB1含量在三个实验组间差异有统计学意义(F=918.67,P<0.01),LPS刺激组和芍药苷组间差异有统计学意义(q=22.66,P<0.01).结论:芍药苷可能通过抑制HMGB1的核转位和释放,对LPS诱导的肝损伤起保护作用.     

实验性急性肝衰竭大鼠TNF-α和IFN-γ/IL4的表达

目的 研究TNF-α和Th1/Th2型细胞因子(IFN-γ/IL-4)在D-氨基半乳糖/内毒素所致急性肝衰竭大鼠血清和肝、肺组织中的表达,方法取30只Wistar大鼠腹腔内注射D-氨基半乳糖/内毒素诱导大鼠急性肝衰竭模型(AHF组,n=30),于造模3、6、12、24、48、72 h各取5只检测其血清丙氨酸转氨酶(ALT),肝组织的病理形态学变化,血清巾TNF-α和IFN-γ/lL-4水平的变化,肝、肺组织内TNF-α和IFN-γ/IL-4的表达,另取30只Wistar大鼠腹腔内注射等量生理盐水为正常对照(N组,n=30).结果 AHF组各时间点血清ALT的增高和N组相比有统计学差异(P<0.05),肝内炎细胞浸润、坏死明显;AHF组血清内TNF-α 3、6 h分别为0.255±0.133、0.150±0.061,比N组相应时间点均增高(P<0.01,P<0.05);Th1型细胞因子(IFN-γ)与N组相比3、6 h均增高(P均<0.01);Th2型细胞因于(IL-4)水平在各时间点无明显变化(P>0.05);AHF组肺组织与N组相比TNF-α的表达在3、6、12 h均明显增高(P均<0.01).结论 TNF-α和IFN-γ在急性肝衰竭大鼠模型的早期阶段起重要作用;IL-4可能不参与此动物模型的病理过程;肺组织TNF-α增高与肝衰竭的关系值得探讨.     

HMGB1对肝星状细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对肝星状细胞(hepatic stellate cell HSC)合成细胞外基质(extracellular matrix ECM)的影响.方法:剂量效应组分别用含HMGB1 0 mg/L,0.1 mg/L,1.0 mg/L,10 mg/L,20 mg/L和40 mg/L的HMGB1培养液培养HSC-T6 6 h;时间效应组以含有10 mg/L HMGB1的培养液培养0 h、6 h、12 h、18 h和24 h,对照组以不含HMGB1的培养液分别培养HSC-T6细胞,留取各组培养液离心后的上清,用双抗体夹心ELISA方法检测其上清中PⅢP和CⅣ的含量.结果:对照组HSC-T6细胞ECM分泌量较低;HSC-T6的ECM分泌量与HMGB1呈剂量依赖关系(r=0.835,0.955,P<0.05);10 mg/L HMGB1时间效应组的PⅢP,CⅣ分泌量在18 h和24 h 均明显高于对照组(P<0.05).结论:HMGB1能诱导HSC-T6细胞分泌ECM,可能在肝纤维化的发生、发展中发挥重要作用.     

全长乙型肝炎病毒基因组的扩增及序列分析

目的 建立一种全长乙型肝炎病毒(HBV)基因组扩增及序列分析的新方法。方法 在HBV负链开环缺口处设计引物，使用TaKaRa LA Taq^TM DNA聚合酶进行扩增，聚合酶链反应产物克隆后进行全长序列测定。结果 用此方法成功获得HBV全基因组DNA序列。将已知序列的HBV全基因组重组质粒作为模板进行敏感性和保真性测定，其敏感性为10^2个初始模板，核苷酸的人为突变率为1．2bp／kb。结论 此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析，为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。     

慢性 HBV 感染与非酒精性脂肪肝关系研究进展

随着人们生活水平的提高,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发病率也呈逐年上升趋势。目前,非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成为仅次于病毒性肝炎的常见肝病。一般认为肥胖及糖代谢异常等是影响 NAFLD 发生发展的主要因素。但在我国,乙肝病毒(HBV)慢性感染者比率较高,存在两种重叠发生几率。本文就这两种疾病在发病机制和病程进展上的相互影响,综述了国内外学者对两者关系的研究进展。     

烟碱抑制RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的机制

目的:探讨烟碱抑制RAW264.7细胞HMGB1表达和释放的机制。方法:(1)RAW264.7细胞在6孔板分组培养:仅加培养液为对照组(C);加LPS250μg/L为LPS组(LPS);在LPS基础上加烟碱1μmol/L和10μmol/L分别为烟碱1组(N1)和烟碱2组(N2)。培养24h后,RT-PCR检测各组细胞HMGB1 mRNA表达水平;Western blotting检测上清液和胞浆、胞核HMGB1含量。(2)用鼠α7nAChR基因反义和正义链RNA转染培养细胞后,再加含LPS250μg/L和10μmol/L烟碱于培养液分别作为反义链组(antisense RNA)和正义链组(senseRNA);以上述C组和LPS组为对照,2h后Western blotting检测上清液HMGB1量。结果:(1)C组细胞HMGB1 mRNA呈低水平表达(1659.20±121.05);细胞HMGB1 mRNA表达水平在N1和N2组及LPS组间差异无显著(P0.05)。(2)LPS组上清液的HMGB1量较高(445.34±28.52);N1和N2组上清液的HMGB1量显著低于LPS组(P0.05)。(3)C组胞核HMGB1量较高(335.46±12.24);而LPS组胞核HMGB1量明显低于对照组(P0.05);N1组和N2组胞核HMGB1显著高于LPS组(P0.05)。(4)AntisenseRNA组与LPS组比,培养液中HMGB1量无显著差异(P0.05);senseRNA组与LPS组比,HMGB1含量明显减少(P0.05)。结论:烟碱对RAW264.7细胞释放HMGB1有明显抑制作用;其主要机制可能是通过与α7nAChR特异结合而影响HMGB1的核转位。     

巴豆油抗多重耐药结核分枝杆菌作用实验研究

目的：观察巴豆油体外对耐药结核杆菌的生长抑制作用。方法：在用分离培养的耐利福平(RFP)、雷米封(INH)二重耐药菌株,分别接种于含有不同浓度巴豆油以及含INH、RFP的豆漫液结核分枝杆菌对照培养基,观察各组结核分枝杆菌的生长情况。结果：在含INH、RFP的对照组培养基上,菌落生长正常,高浓度巴豆油组(1：10～1：160)对结核菌生长有抑制作用,到培养终止期(第40d)仍无细菌生长。将低浓度巴豆油组(1：1280)缓慢生长的菌落反复接种到1：80～1：1280的巴豆油培养基,接种5代后未发现耐巴豆油菌株。结论：1：160以上浓度的巴豆油培养基有体外抗耐药结核菌的作用,并且没有诱导耐药菌株的产生。     

干扰Fas受体表达的串联shRNA表达载体的构建

目的:利用pEGFP6-1和pGenesil-1质粒构建针对Fas的2个短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)串联表达的栽体．方法:设计表达2个shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,分别克隆至带有U6启动子的质粒载体pEGFP6-1和pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析．分别用SacI SalI双酶切重组质粒,胶回收酶切pEGFP6- 1-siFas1大片段和酶切pGenesil-1-siFas2小片段,T4 DNA Ligase连接酶切大、小片段,得到pEGFP6-1-siFas1 siFas2重组质粒．转化感受态细胞DH5α,扩增,提取串联重组质粒进行酶切鉴定．结果:成功构建靶向Fas的2个shRNA串联重组质粒载体pEGFP6-1-siFas1 siFas2．酶切鉴定和测序分析重组质粒,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功．结论:表达2个靶向Fas的shRNA表达框成功构建在一个重组质粒载体上．     

载脂蛋白E与遗传性病和感染性疾病的关系

载脂蛋白E(apoliproteinE ,apoE)是血浆中重要的载脂蛋白之一 ,最早是在 1973年由Shore等从正常人的极低密度脂蛋白 (VLDL)中首先发现的。apoE主要在肝脏合成、分泌和代谢 ,参与脂质的运输、储存及排泄 ,有修复组织、抑制血小板聚集、免疫调节等作用。近年来发现apoE及其基因的     

56例严重急性呼吸综合征(SARS)流行病学分析

目的：探索SARS的流行病学规律。方法：对56例临床诊断为SARS病例的发病年龄、职业、性别及接触史资料进行追踪分析。结果：本组病例流行病学分析结果提示，SARS的发病年龄按10岁为一个年龄段主要集中在20岁～50岁年龄段，服从正态分布(K-S检验，Z=O．784，p=O．631)，家庭成员、同事、朋友密切接触者均可追踪到与确诊患者的接触史。医护人员接触感染易患病，小车司机接送患者在密闭的狭小的空间与患者接触也容易感染。结论：中青年人群与SARS患者密切接触，医护人员的医护接触是SARS的重要流行病学特点。