肿瘤患者血清白色假丝酵母菌HSP90表位H特异抗体的ELISA检测

目的用展示有白色假丝酵母菌HSP90(热休克蛋白90)表位H的重组质粒建立ELISA检测体系,对易感人群白色假丝酵母菌感染做出早期诊断。方法将构建的展示有HSP90表位H的重组质粒表达并纯化,确定其免疫原性,之后将其作为固相包被抗原建立ELISA检测体系,并使用该体系检测706例白色假丝酵母菌肿瘤患者的血清。结果表达并纯化的展示有HSP90表位H的杂合噬菌体能与白色假丝酵母菌感染患者血清中的相应抗体发生特异性结合,确定该ELISA检测的条件为:包被浓度70μg/ml,抗体稀释倍数200倍,cut-off值为1.5;706例肿瘤患者的检测结果:31例为阳性,其中有2例后来被临床检测为白色假丝酵母菌感染;此31例再次经过Western blot方法检测,其中有18例被Western blot方法检测为阳性。结论杂合噬菌体可以用来检测白色假丝酵母菌的感染,为临床应用提供理论依据。     

含甲型H1N1流感病毒HA基因序列病毒样颗粒的制备

[目的]构建耐RNase酶的内含甲型H1N1流感病毒HA基因序列的病毒样颗粒。[方法]构建中间载体pET32a-MS2,将甲型H1N1流感病毒的HA基因片段连接中间载体上,构建原核表达载体pET32a-MS2-HA,转化宿主菌,诱导表达制备病毒样颗粒,对病毒样颗粒进行荧光定量RT-PCR检测和稳定性实验。[结果]表达载体经PCR、酶切鉴定分析后证实构建成功,荧光定量RT-PCR实验表明该病毒颗粒含有HA基因片段并且颗粒稳定性良好。[结论]成功构建了含甲型H1N1流感病毒HA基因序列的病毒样颗粒且稳定性良好,有望作为甲型H1N1流感病毒RNA检测的标准品和质控品。     

噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白

目的利用T7噬菌体展示技术筛选与乙型肝炎病毒X蛋白相互作用的蛋白。方法构建X蛋白的原核表达载体,表达并纯化X蛋白,以X蛋白作为靶蛋白,应用T7噬菌体展示技术对人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA序列分析及同源性研究。结果表达并纯化了X蛋白,经过4轮筛选后,选择52个阳性克隆,采用T7特异性引物扩增插入片段,回收PCR产物进行测序。经过同源性分析,确定了7个与乙型肝炎X蛋白相互作用的蛋白。结论 T7噬菌体展示筛选是1种快速、简单的筛选蛋白质相互作用的工具,筛选的与X蛋白相互作用蛋白为进一步研究乙型肝炎病毒的致病机制奠定了基础。     

如何向SCI收录的优秀期刊投稿:如何让你的讨论部分更出色

讨论部分非常重要。在这部分,你要把结果中展示的证据线索和引言中的背景资料关联起来。遗憾的是,许多作者(特别是来自非英语国家的作者)常常不够重视讨论’部分,认为只需把结果罗列出来,然后让读者自行去得出结论即可。     

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价

目的 建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术,并探讨其临床应用价值。 方法 通过不同菌量及药物浓度的筛选,建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法;用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行了阿米卡星药敏检测,同步进行Bactec MGIT 960的Am药敏检测,对2种方法的检测结果进行比较分析。结果不符合的菌株测定其Am的最低抑茵浓度(MIC)。 结果 以细菌接种量10^-3 mg／ml、药物浓度2 μg／ml、37℃作用48-h为药敏最佳检测条件,噬菌体检测108株结核分枝杆菌临床分离株阿米卡星敏感82株、耐药26株,Bactec MGIT 960检测敏感80株、耐药28株;2法测定均为敏感79株、均为耐药25株。以Bactec MGIT 960测定结果为判断标准,则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为89.3%、98.8%、96.2%、96.3%、96.3%。 结论 PhaB检测结核分枝杆菌的Am耐药性有较高的敏感性、特异性和准确性,整个检测只需3 d,且操作简单、不需特殊仪器设备,可作为 M .TB临床分离株Am药敏快速检测备选方法之一。     

噬菌体生物扩增法在结核性胸膜炎早期诊断中的研究

目的探讨应用噬菌体生物扩增法（PhaB）早期诊断结核性胸膜炎的临床价值。方法选择70例结核性胸膜炎患者,胸水分别行PhaB法、腺苷脱氨酶（ADA）检测、BACTEC MGIT960培养法,患者均行结核菌素（PPD）试验。结果PhaB法、ADA、BACTEC MGIT960培养法阳性率分别为48.57%、30%、7.14%,PhaB法阳性率高于其他2种方法（P〈0.05或〈0.01）。PhaB法与PPD试验总体阳性符合率61.11%,PhaB法阳性率高于PPD试验（P〈0.05）。结论PhaB检测胸水中结核分枝杆菌具有较高阳性率,且操作简便,可作为结核性胸膜炎早期诊断的方法。     

肝癌特异性噬菌体多肽的筛选和初步鉴定

目的 利用噬菌体展示肽库筛选与肝癌HepG2细胞特异性结合的多肽,为筛选及明确新的肝癌早期诊断和治疗标志物打下基础.方法 以肝癌细胞HepG2为靶细胞,LO-2为吸附细胞,在37℃条件下对噬菌体随机12肽库进行多轮减性筛选,挑取单克隆扩增并鉴定.利用ELISA初步鉴定克隆亲和力,测定阳性克隆DNA测序并进行同源性及氨基酸分析.结果 经过3轮减性筛选发现,随机挑选的30个单克隆中,其中ZS-9对HepG2具有较高亲和力,氨基酸测序结果表明,该序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBankDNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,而且,国内外文献均未见报道,表明笔者筛选到一新的肝癌相关抗原的配体.结论 利用噬菌体随机12肽库成功筛选到与肝癌细胞HepG2具有较高亲和力的多肽,为筛选鉴定新的肝癌特异的标志物奠定工作基础,也为肝癌的早期诊断和靶向治疗进一步研发确定了靶标.     

COMP特异性单抗15A11的表位特征研究北大核心CSCD

目的:鉴定RA相关自身抗原COMP的一株特异性单克隆抗体15A11的表位特征。方法:选用随机十二肽噬菌体库对m Ab 15A11进行三轮筛选,随机挑取40个单噬菌斑,提取DNA,测序;ELISA检测每个噬菌体克隆与m Ab 15A11结合的特异性;通过Clustal W2对特异性结合的噬菌体展示的十二肽和COMP进行氨基酸序列比对,Py MOL分析一致氨基酸所在肽链的二级结构及表位氨基酸之间的距离,初步确定m Ab 15A11的表位;变性和非变性Western blot、EDTA螯合Ca2+后ELISA分析以及合成多肽的ELISA实验进一步确定表位序列。结果:得到的40个测序噬菌体中,共有5个噬菌体克隆,ELISA确定克隆1和克隆2与m Ab 15A11特异性结合,其他克隆均为非特异性结合的噬菌体;氨基酸序列比对,在COMP上未发现与克隆1和克隆2噬菌体相同的连续氨基酸序列,提示m Ab 15A11的抗原表位可能为非线性表位;Py MOL分析表位氨基酸在COMP上的定位及距离,显示构象表位的合理性;变性Western blot分析为阴性,而非变性Western blot条件下为阳性;EDTA螯合Ca2+破坏COMP的构象后不能与m Ab 15A11结合,而未经处理的与m Ab 15A11结合,均说明m Ab 15A11表位是构象表位;合成多肽与m Ab 15A11的ELISA结果进一步确定了m Ab 15A11的构象表位序列。结论:鉴定了m Ab 15A11的表位是构象表位序列,且确定了该构象表位的氨基酸组成,为研究COMP抗体与抗原反应机制具有重要理论价值,并对类风湿性关节炎的检测有重要应用意义。     

宽嗜性铜绿假单胞菌噬菌体的生物学特性及对临床菌株的嗜性覆盖研究

【目的】研究宽嗜性铜绿假单胞菌（PA ）的生物学特性,为临床控制PA感染提供思路。【方法】对5家医院下水道中分离出的PA噬菌体,采用双层琼脂噬菌斑形成法纯化后筛选出宽嗜性噬菌体,观察宽嗜性噬菌体的特征,绘制一步生长线,提取核酸行酶切分析。【结果】共分离出8株PA噬菌体,筛选出3株宽嗜性噬菌体,其中PAp-3表现出较宽的噬菌谱。电镜下PAp-3呈透明、圆形、边界清晰的菌斑;PAp-3基因组为23 kb ,当感染复数（MOI）为0．001时,其感染宿主产生子代PA噬菌体滴度最高,为6．4×10^10 PFU/mL ,感染宿主菌的潜伏期30 min ,爆发时间55 min ,裂解量100。3株宽嗜性噬菌体交叉组合对临床分离出的20株PA吞噬覆盖率为95．00％（19/20）。【结论】宽嗜性噬菌体具有较广的噬菌谱,潜伏期较短,裂解量大,交叉组合吞噬覆盖率高,可为噬菌体作为抗菌生物制剂提供依据。     

乙型肝炎病毒表面抗原特异性结合肽的筛选与鉴定

目的：筛选并鉴定与乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg ）特异性结合的多肽。方法将酵母表达的HBsAg包被在微孔板上,加入噬菌体进行随机肽库筛选,经过4轮筛选后,随机挑取15个克隆进行DNA测序,并通过夹心ELISA方法鉴定其亲和力,采用剂量依赖结合实验和竞争抑制实验检测其与 HBsAg结合的特异性。结果经过4轮筛选,得到一优势克隆No ．3,展示肽段为SSYAPYVWQPIA ,与 HBsAg有较强的亲和力,剂量依赖结合实验和竞争抑制实验证明克隆No ．3与HBsAg的结合是特异性的。结论利用噬菌体展示肽库技术可以获得HBsAg特异性结合肽,此多肽可以作为靶向分子用于乙型肝炎的基因治疗,为乙型肝炎的靶向基因治疗奠定实验基础。