利用裂解型分支杆菌噬菌体快速检测结核分支杆菌

目的 探讨裂解型分支杆菌噬菌体检测技术快速检测临床标本中结核分支杆菌的优缺点及临床应用价值.方法 对122例肺结核患者的痰标本和20份非结核性痰标本应用噬菌体裂解法检测,并与涂片镜检法、荧光定量聚合酶链反应(TaqMan-PCR)法相比较.结果 噬菌体裂解法阳性63例,阳性率51.6%;涂片镜检法阳性46例,阳性率37.7%;TaqMan-PCR法阳性69例,阳性率56.6%.噬菌体裂解法与痰涂片镜检法的阳性率差异有统计学意义(χ2=4.79,P<0.05),与TaqMan-PCR法的相近,差异无统计学意义(χ2=0.59,P>0.05).3种方法 检测20份非结核性痰标本均为阴性.结论 噬菌体裂解法检测结核分支杆菌快速、简便、灵敏、特异,同时又不需要特殊的实验设备,适合结核病的快速诊断.     

大肠杆菌J2_5的全基因组测序及比较基因组分析

目的：分析多耐药大肠杆菌J2_5的进化分群、耐药基因及毒力基因,为临床诊断及用药提供理论依据。方法：采用高通量测序法对J2_5进行全基因组测序,并使用多种生物信息学工具和数据库进行数据比对分析。结果：该菌的全基因组总长度为4.7 Mb,GC含量为50.78%。多位点序列分型(MLST)分析发现其ST型为ST2491,和大肠杆菌野生株 MG1655分型ST10 不同。系统发育树进一步分析表明J2_5与MG1655的亲缘关系较近。抗生素耐药性综合数据库(CARD)分析发现该菌有65 个耐药基因,主要通过4类耐药机制(抗生素外排泵、抗生素失活、抗生素靶点改变、降低对抗生素的渗透性)产生耐药性。毒力因子数据库(VFDB)分析发现该菌有7类40个毒力基因,编码黏附素、侵袭、自主转运蛋白等毒素蛋白。使用Prophage Hunt? er网上工具发现J2_5基因组存在3个前噬菌体,并且前噬菌体上带有1个毒力基因。结论：全基因组测序结果表明J2_5携带更多的毒力基因及耐药基因,是其致病性强和具有多种抗生素耐药性的原因。     

55株大肠杆菌临床分离株噬菌体分型

作者将临床分离的55株大肠杆菌进行了系统生化鉴定，并用5株埃希氏菌属分型噬菌体进行了分型。结果55株大肠杆菌中有47例均被5株噬菌体中的一至数株裂解，分型率为85．5％，其中E－1、E－2……E－5裂解率分别是为32．8％，30．9％，10．9％，43．6％，32．8％，其中E－4裂解率最高，达43．6％。共可分18个噬菌体型别，以4型（包括4，4b，4C）最多。     

应用蛋白质组学及噬菌体抗体库技术筛选大肠癌特异性抗原及抗体方法的建立

目的　构建大肠癌患者转移淋巴结Fab段噬菌体抗体库并结合蛋白质组学相关技术进行初步筛选大肠癌特异性抗原蛋白及相应的噬菌体抗体。方法　取大肠癌患者系膜转移淋巴结 ,提取总RNA ,RT PCR扩增重链Fd和轻链cDNA ,将扩增产物依次插入载体pComb3,电转感受态大肠杆菌XLI Blu ,加噬菌体VCSM13超感染。以二维凝胶电泳分离大肠癌细胞和正常大肠粘膜蛋白组并转至PVDF膜 ,将银染胶图用Melanie 112 DE分析软件进行分析 ,以大肠癌组织匀浆为靶抗原对初级抗体库进行三轮淘洗 ,再用富集抗体库和PVDF膜进行Western Blot印迹实验。结果　成功建立了大肠癌Fab段噬菌体抗体库。建立了平均 877个斑点的大肠癌平均胶图和 84 7个斑点的正常大肠粘膜平均胶图。经Western Blot印记实验我们发现了至少八个大肠癌表达而正常大肠粘膜不表达的有噬菌体抗体特异性结合活性的抗原蛋白。结论　成功建立了双盲、双向、高通量筛选大肠癌特异性抗原及其相应噬菌体抗体的方法。     

个人饮水消毒管的研究

根据接触消毒作用原理,研制了碘树脂个人饮水消毒管(长174mm,重24g)。该管随身携带,插入水中即可吸饮。在15～18℃条件下,以消毒管吸滤,流量100～140ml/min,可使水中含菌量减少到国家规定的卫生标准。     

噬菌体宿主谱改变核酸分析研究

目的 探讨一种高效提取RNA噬菌体核酸的新方法，并通过核酸分析从基因水平了解宿主谱改变对噬菌体核酸的影响。方法 采用传统的聚乙二醇（PEG）沉淀-蛋白酶消化-酸性酚提取法、Tripure提取法以及抗体沉淀-盐酸胍一步法3种方法分别提取大肠埃希菌f2噬菌体及其宽宿主谱株的RNA，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度。采用兼并引物逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及随机引物随机扩增多态性DNA聚合酶链反应（RAPD-PCR）比较分析噬菌体宿主谱改变前后其核酸序列组成的变化。结果 抗体沉淀-盐酸胍一步法提取的噬菌体核酸具纯度高、条带完整等优点；f2噬菌体及其宽噬株均为6000bp左右的单链RNA噬菌体；两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPD-DNA片段差异明显，其中26条为可区分的DNA带型；噬菌体f2cDNA在450bp附近出现重复性较好的扩增片段，而其宽噬株cDNA在相同条件下未出现扩增产物。结论 抗体沉淀-盐酸胍一步法较其他两种RNA病毒核酸提取法具有明显的优势，具有应用价值的新的RNA噬菌体核酸的提取方法；宽宿主谱噬菌体的宿主特异性裂解效应已从基因水平发生了变化。     

抗CD147人源单链抗体的筛选及生物特性初步鉴定

目的利用噬菌体展示技术筛选特异性抗CD147人源单链抗体(human anti-CD147 sc Fvs)并进行生物特性鉴定。方法以真核表达的CD147蛋白为抗原,采用"酸洗脱法"对库进行4轮富集性筛选、以ELISA法对筛选克隆的结合活性进行测定,以竞争ELISA和Western blot实验对获得的噬菌体抗体和可溶性sc Fv的特异性进行鉴定,通过DNA测序核实特异性sc Fvs的人源性及其亚群,以硫氰酸盐洗脱法对获得的抗体进行相对亲和力分析。结果经过4轮的富集性筛选,共筛出4个与CD147特异性结合的阳性克隆,其中3个获得可溶性表达,竞争抑制及Western blot实验证实其能与CD147特异性结合。DNA序列分析证实3个阳性克隆具有不同的基因型,三者的轻链可变区分别属于V_λⅠ、V_κⅡ、V_λⅢ亚群,重链可变区分别属于V_HⅠ、V_HⅢ、V_HⅢ亚群。硫氰酸盐洗脱法测出13号、15号和168号3个human anti-CD147 sc Fvs的亲和力分别为0.20 mol/L、0.35 mol/L和0.6 mol/L。结论成功从大容量噬菌体抗体库中筛选到特异性human anti-CD147 sc Fvs,为进一步研究该抗体的功能及应用前景奠定了基础。     

类炭疽芽孢杆菌裂性噬菌体的筛选及其杀菌效应的初步观察

从环境中筛选类炭疽杆菌裂性噬菌体,采用电镜观察其超微结构、血清中和试验、一步生长试验和模拟杀菌试验,检测该噬菌体的生物学特性和对宿主菌的灭活效果。结果,筛选所得的噬菌体为直径 22 ~45nm圆形或椭圆颗粒,无尾;宿主菌平均释放量为 89pfu/细胞,血清中和试验K值为 284. 54,潜伏期约 40~45min。在所设定的不同环境条件下,噬菌体对模拟污染土壤中类炭疽杆菌芽孢杀灭率可达到 60. 13% ~92. 09%;随噬菌体含量、反应温度升高和作用时间延长则杀灭率有增高的趋势。结论,所筛选的类炭疽杆菌噬菌体可能是一新的噬菌体株,对宿主菌杀灭效果较好,其杀菌率明显受到噬菌体含量、反应温度和作用时间等因素的影响。     

噬菌体裂解法与TaqMan-PCR法检测结核分支杆菌的比较

目的 :比较研究噬菌体裂解法与 Taq Man- PCR法在结核分支杆菌快速检测中的价值。方法 :用噬菌体裂解法和 Taq Man- PCR法检测 3株结核分支杆菌标准株、1 3株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌以及 2 4 5份肺结核患者的痰标本、1 2 8例结核性胸膜炎胸腔积液、4 9例非结核性痰标本。结果 :噬菌体裂解法 :3株结核分支杆菌标准株均为阳性 ,而 1 3株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌、4 9例非结核性痰标本均为阴性 ;应用噬菌体裂解法和 Taq Man- PCR法检测 2 4 5份肺结核患者的痰标本的阳性率分别为 4 6 .9%和 5 1 .0 %,二者差异无显著性 (P>0 .0 5 )。两种方法检测 1 2 8例结核性胸膜炎胸腔积液阳性率分别为 4 0 .6 %和 4 2 .2 %,二者差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :噬菌体裂解法简便、快速 ,具有较高的敏感性和特异性 ,是一种崭新的结核分支杆菌快速检测方法。     

病原生物学检验与临床噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆

孕妇B型链球菌感染率及药物敏感性分析，粪肠球菌与屎肠球菌药敏表型和耐药基因的比较，噬菌体生物扩增法、DNA序列分析及单链构象多态性分析检测结核分枝杆菌耐药性，噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌标准化研究，噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌标准化研究，噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性……