噬菌体表面展示技术筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白

目的:通过筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白,为隐源性肝炎的发病机制研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,将隐源性肝炎患者血清作为固相筛选蛋白,用噬菌体正常人肝细胞T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析,将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列,然后再探讨该蛋白在隐源性肝炎发病机制中的作用.结果:噬菌体经过5轮生物富集后,从随机筛选的60个克隆中得到24个阳性克隆,经序列测定后进行同源搜索,初步确定人类HCVNS5A转化调节蛋白13(NS5ATP13)为人体肝脏中固有的与隐源性肝炎血清蛋白结合的蛋白.结论:应用T7cDNA噬菌体表面展示技术,我们发现隐源性肝炎血清蛋白与人类肝细胞HCVNS5A转化调节蛋白13相互作用,在隐源性肝炎发生及抗病毒治疗有重要意义.     

生物药物研发与创新青年学者高峰论坛

为了更好地发挥学科导向作用,国家自然科学基金委将于2014年10月在南京中国药科大学举办＂生物药物研发与创新青年学者高峰论坛＂。论坛将邀请生物医药领域的院士专家及青年学者就＂创新生物药物研发＂展开交流讨论;还将组织参会者参观江苏知名生物医药企业,促进学者与企业之间的相互了解,为产学研合作搭建桥梁。会议采用大会报告、专题报告、专题讨论、壁报展示等形式。为了便于参会学者之间更好地进行学术探讨和经验交流,本次会议将汇编《生物药物研发与创新高峰论坛论文集》,研究论文与综述论文择优分别刊登在《药物生物技术》和《药学进展》上。热诚欢迎从事生物药物研究的人士就本次会议主题积极撰稿。     

3种检测方法在携带鼠疫噬菌体现场样本中的联合应用

2008年6月青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室收到青海省天峻县疾病预防控制中心送交的6份疑似鼠疫样本。为及时判定疫情,同时用胶体金免疫层析法（RGICA）、鼠疫反向间接血凝试验（RIHA）和细菌分离培养法平行检测6株疑似鼠疫样本,结果均为阳性。在细菌分离培养过程中发现4号和6号样本携带鼠疫噬菌体,出现此类情况,     

大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用

目的优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法，提高筛选效率。方法通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA，经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定，并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92．73％、93．75％，差异无统计学意义（P〉0．05）；两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致；第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定，发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1．04％、4．17％和22．69％（P〈0．01）。结论PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用，值得推广。     

利用噬菌体展示技术筛选日本血吸虫模拟抗原表位

目的　从噬菌体肽库筛选日本血吸虫抗原模拟抗原表位。方法　制备亲和纯化的日本血吸虫病人血清抗体 Ig G,用此 Ig G包被酶标板对 12肽库进行反复淘选 ,对获得的目的噬菌体进行鉴定及免疫原性分析。结果　获得一批阳性噬菌体克隆 ,其中一部分与血吸虫病人血清反应产生较高的吸光值 ,Western blotting分析表明这些噬菌体能被血吸虫病人血清所识别 ,具有类似于血吸虫抗原的免疫原性。结论　获得一批具有模拟日本血吸虫抗原表位的噬菌体克隆 ,为今后进一步研究它们在血吸虫病诊断及疫苗研究中的作用奠定了基础。     

噬菌体法检测结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的：利用噬菌体法进行结核分枝杆菌检测,对链霉素、异烟肼、利福平药物敏感性测定,来分析其实验方法的灵敏度、特异性及药物敏感性同比例法的符合率,指导临床诊断和合理用药治疗。方法利用噬菌体法进行结核分枝杆菌的检测,链霉素（S）、异烟肼（H）和利福平（R）药物敏感性测定,以比例法为对照,来分析噬菌体法的灵敏度、特异性及符合率。结果噬菌体法药物敏感测定结核分枝杆菌同比例法的符合率为90.2%,分别为S 92.6%、R 91.1%、H 88.6%;噬菌体法直接检测肺结核患者痰样本结核分枝杆菌,涂阳培阳、涂阴培阳、涂阴培阴样本检出率分别为96.2%、80.0%、26.2%。结论噬菌体法可快速检测肺结核患者痰样本中结核分枝杆菌,检出率明显高于涂片法,敏感性、特异性较高;噬菌体法对临床分离株进行药物敏感性测定,与比例法比较符合率较高,报告时间只需3 d,且无需特殊仪器、费用低,对临床早期诊断与治疗具有重要意义。     

用噬菌体展示技术筛选喉癌细胞靶向肽的研究

目的筛选人源喉癌Hep-2细胞株特异结合的短肽,作为喉癌靶向治疗的载体。方法体外培养Hep-2细胞株作为靶细胞,人正常喉黏膜上皮细胞为吸附细胞;用噬菌体展示十二肽库进行3轮差减筛选,随机挑取10个噬菌体克隆进行测序;采用酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法鉴定噬菌体与Hep-2细胞的结合活性;通过免疫荧光鉴定喉癌细胞特异性结合肽（F2）噬菌体阳性克隆与喉癌细胞结合的特异性。结果经过3轮筛选后,噬菌体在靶细胞Hep-2上出现明显富集;ELISA分析鉴定显示5个阳性克隆能与Hep-2细胞特异结合,其中F2噬菌体克隆对喉癌细胞的结合靶向性明显高于对照细胞（P〈0.05）;免疫荧光显色显示,F2能特异性地与喉癌细胞结合。结论利用噬菌体展示肽库技术,可以成功筛选到F2,其可能成为喉癌靶向治疗的载体。     

铜绿假单胞菌噬菌体的分离及其裂解谱的测定与分析

目的了解医院外环境及病人脓汁标本中是否存在铜绿假单胞菌噬菌体,分析分离得到的铜绿假单胞菌噬菌体对临床分离宿主菌的裂解情况。方法采集医院外环境、病人脓汁标本共69份,以标准菌株对其进行噬菌体的分离、培养及纯化。对所得噬菌体用123株临床分离铜绿假单胞菌经双层平板法对其进行裂解谱的测定。结果共分离得到6株铜绿假单胞菌噬菌体,其中4株分离自医院未处理污水,2株分离自病人脓汁标本,总体分离率为8. 7%。医院未处理污水中分离得到的噬菌体裂解能力高于病人脓汁标本中分离得到的噬菌体,差异有统计学意义(χ~2=181. 4,P <0. 01)。结论医院未处理污水及病人脓汁标本中存在铜绿假单胞菌噬菌体,且分离得到的噬菌体之间对临床菌株裂解能力存在差异。医院未处理污水及病人浓汁标本中存在的铜绿假单胞菌噬菌体可对临床分离铜绿假单胞菌有裂解作用,后期可对由铜绿假单胞菌引起的感染性疾病起到治疗作用。     

全人源抗PSMA单链抗体的筛选及免疫活性鉴定

目的 从全人源单链噬菌体抗体库中筛选出抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)特异性单链抗体并进行免疫活性鉴定.方法 以合成的PSMA多肽为抗原,经过五轮吸附-洗脱-扩增,从单链噬菌体抗体库中筛选出特异性抗PSMA噬菌体抗体,ELISA检测其抗原结合能力,并对特异性较强的克隆提取质粒,表达可溶性抗体.Western Blott...     

噬菌体表面呈现技术及其在原虫免疫学研究中的应用

噬菌体表面呈现技术(Phage Display Technique，PDT)是以噬菌体为载体将外源蛋白或小分子多肽与噬菌体衣壳蛋白融合并呈现于噬菌体表面，表达的外源蛋白和多肽保持相对独立的空间结构和生物活性并且这种表达不影响噬菌体的侵染能力，因此可以被其相应的结合分子识别筛选。该技术将基因表达产物展示于噬菌体表面，在蛋白基因型和表型