宫颈癌组织DcR3的表达与高危型人乳头状瘤病毒感染的相关性研究

  目的  观察宫颈癌组织诱捕受体3（decoy receptor 3，DcR3）表达与高危型人乳头状瘤病毒（high-risk human papilloma virus，HR-HPV）感染的相关性。  方法  分别采用免疫组织化学（streptavidin-perosidase，SP）法和第2代杂交捕获法检测35例正常宫颈组织（normal cervical tissues，NCE）、39例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasm，CIN）及44例宫颈癌组织（cervical squamous epithelial carcinoma，CSES）DcR3和HR-HPV的表达。设计并合成靶向HR-HPV16 E7基因的HR-HPV16 E7小干扰RNA（siRNA）和阴性对照HR-HPV16 E7 siRNA，脂质体法转染SiHa细胞，实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）法和蛋白质印迹（western blot，WB）法检测HR-HPV16 E7基因沉默对DcR3 mRNA和蛋白表达的影响，四甲基偶氮唑盐比色（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法检测细胞增殖情况。  结果  NCE、CIN及CSES组DcR3蛋白阳性表达率分别为8.6%（3/35）、48.7%（19/39）、77.3%（34/44），表达呈逐渐增高趋势，差异具有统计学意义（χ2=36.942，P<0.001）。NCE、CIN及CSES组HR-HPV阳性检出率分别为5.7%（2/35）、56.4%（22/39）、93.2%（41/44），差异具有统计学意义（χ2=60.322，P<0.001）。DcR3表达与HR-HPV感染呈正相关（r=0.893，P=0.004）。HR-HPV基因沉默后DcR3在mRNA和蛋白水平的表达均明显降低，且细胞增殖受到抑制。  结论  DcR3在宫颈癌中异常高表达，其表达升高与HR-HPV感染密切相关，提示DcR3可能参与了宫颈癌的发生发展。siRNA技术成功诱导HR-HPV基因沉默可通过下调DcR3的表达抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖。     

Nrf2点突变稳转肺癌细胞株构建及鉴定

目的构建核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)点突变逆病毒稳转细胞株,并检测其在A549人肺癌细胞中的表达效果,为基因靶向治疗提供研究基础。方法针对人Nrf2基因序列,扩增目的片段并与Teasy载体连接,构建Nrf2-Teasy重组质粒,用Fast Mutagenesis System对Nrf2进行定点诱变,使其第2号外显子有T35C和G37A的点突变。并将突变的Nrf2片段插入逆病毒载体pMSCV,构建pMSCV-MUT-Nrf2重组质粒。利用逆病毒系统将其稳转入A549肺癌细胞,运用RT-PCR技术检测Nrf2 mRNA表达水平。结果稳转后的A549目的细胞可观察到荧光,且其Nrf2 mRNA表达水平较未转染细胞显著增高。结论成功构建点突变的逆病毒质粒,并有效感染目的细胞,为进一步研究Nrf2基因突变在肺癌中的作用提供细胞模型。     

HIV感染/AIDS患者相关支原体感染与免疫指标及炎症因子水平的关联性

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者相关支原体感染与免疫指标、炎症因子水平的关联性。方法选取2015年1月-2017年12月的102例HIV感染/AIDS患者作为研究对象,对其尿液样本中的生殖支原体、梨支原体、发酵支原体等相关支原体的感染情况、外周血CD_4~+T淋巴细胞计数、血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平进行检测和分析。结果:共有67例患者尿样中检出支原体核酸,感染率为65.69%;其中,检出生殖支原体感染23例、检出梨支原体感染15例,检出发酵支原体感染29例,感染率分别为22.55%、14.71%、28.43%,差异无统计学意义(P=0.059);HIV感染患者与AIDS患者三种支原体感染率的差异均无统计学意义;CD_4~+T淋巴细胞水平<500个/μL患者的三种支原体感染率高于CD_4~+T淋巴细胞水平≥500个/μL的患者(P<0.05);合并支原体感染患者的血清IL-2、TNF-α水平均低于未合并支原体感染患者,血清IL-4水平高于未合并支原体感染患者(P <0.05)。结论 HIV感染/AIDS患者具有较高的致病性支原体感染率,免疫功能较差患者的支原体感染率较高,支原体感染患者可表现为炎症因子的低表达,但尚不能认为支原体感染能够影响患者的免疫功能。     

国产新冠病毒灭活疫苗接种16问(上)

世界卫生组织根据新冠病毒疫苗的研发途径及组成成分的不同,把新冠病毒疫苗分为灭活疫苗、腺病毒载体疫苗、mRNA核酸疫苗、重组蛋白疫苗等。这些不同的新冠病毒疫苗的组成成分分别为灭活的新冠病毒或其裂解片段、无害的腺.病毒和新冠病毒的S蛋白基因、编码新冠病毒S蛋白的基因片段新冠病毒的S蛋白等。     

UPLC-QTOF-MS法探讨温肾清毒方对大鼠生殖器官中依非韦伦浓度的影响

目的?探索温肾清毒方“艾可清”对大鼠生殖器官中依非韦伦浓度（EFV）的影响。方法?24只雄性SD大鼠随机分为4组， EFV+高剂量艾可清组、EFV+低剂量艾可清组、EFV组及空白组，每组6只。大鼠灌胃给药7天后处死；腹腔静脉采血，取上清液；取前列腺、睾丸、附睾、膀胱组织，按组织和4 ℃双蒸水1：2比例配置匀浆液。超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱分析（UHPLC-QTOF/MS） 检测血清和匀浆中EFV响应浓度。结果?空白组无离子响应。EFV组、EFV+高剂量组、EFV+低剂量组各组内血浆和组织中离子响应浓度比较差异无统计学意义（均P>0.05）；3个组的血浆的EFV浓度比较差异无统计学意义（P>0.05），但是EFV+高剂量艾可清组及EFV+低剂量艾可清组组织中EFV浓度高于EFV组（P=0.018）。各组组织和血浆中EFV的分布如下：EFV+低剂量组> EFV+高剂量组>EFV组。结论?艾可清能够提高大鼠生殖器官组织中EFV浓度。