不同浓度羟基脲对K562 ATM/ATR基因表达及细胞凋亡与周期变化的研究

目的探讨不同浓度羟基脲对K562细胞ATM（ataxia telangiectasia mutated）／ATR（ATM—Rad3-Related）基因表达的影响及相应的细胞周期变化和细胞凋亡机制。方法以不同剂量的羟基脲作用于K562细胞株，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测ATM／ATR基因表达，流式细胞术检测BCL-2、AnnexinV和细胞周期。结果随药物浓度升高，ATM基因表达量增强而ATR基因表达量降低，BCL-2蛋白表达阳性率分别为38％，33％，30％，28％和18％，0．25与2．0μmoL／L羟基脲作用差异有统计学意义（P〈0．05），细胞凋亡差异有统计学意义；不加入药物的K562细胞ATM和ATR几乎不表达，亚二倍体和G1期细胞数增多，s期和G2／M期细胞减少。结论不同药物浓度下，ATM和ATR基因表达模式的变化与BCL-2水平、细胞周期和细胞凋亡率的改变相关，这提示ATM和ATR途径存在相互调节机制并涉及不同的胞内信号传导途径。     

血小板膜糖蛋白CD41/CD61基因多态性及其表达率与动脉粥样硬化性急性脑梗死的关系

目的探讨血小板膜糖蛋白CD41/CD61基因多态性及其表达率与动脉粥样硬化性急性脑梗死的关系。方法选择动脉粥样硬化性急性脑梗死患者162例作为脑梗死组,同期健康体检者131例作为对照组,采用测序仪分析CD41/CD61基因多态性,采用流式细胞仪检测CD41和CD61表达率,采用多因素logistic回归分析发生动脉粥样硬化性急性脑梗死的危险因素。结果两组CD41多态性基因型和等位基因频率比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。TG+GG基因型及G等位基因与动脉粥样硬化性急性脑梗死发病风险增加有关（均P＜0.05）。脑梗死组CD41表达率高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,但两组CD61表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。脑梗死组TG+GG基因型CD41表达率高于TT基因型组,差异有统计学意义（P＜0.05）。多因素logistic回归分析显示高血压史、收缩压、空腹血糖、同型半胱氨酸、TG+GG基因型是发生动脉粥样硬化性急性脑梗死的危险因素（均P＜0.05）。结论CD41基因多态性TG+GG基因型影响CD41表达率,其与动脉粥样硬化性急性脑梗死发病密切相关;G等位基因是动脉粥样硬化性急性脑梗死的遗传易感基因。     

CD19+ CD24high CD27+调节性B细胞在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义

目的 探讨调节性B细胞（Breg）在儿童传染性单核细胞增多症（IM）中的作用。方法 应用流式细胞术检测53例IM患儿外周血T淋巴细胞亚群,CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达情况。用荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA。同时用ELISA方法分析血清IL-10、TGF-β分泌水平。以50例健康儿童为对照。结果 IM急性期组与对照组比较CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显降低（t=19.99,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显增高（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值降低（t=16.79,P<0.01）。IM恢复期组与急性期组比较,CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显增高（t=21.54,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显降低（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值增高（t=16.68,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平13.4%±1.87%,与对照组比较显著降低,差异有统计学意义（t=14.61,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平与EBV-DNA病毒载量呈负相关（r=-0.52,P<0.01）。经治疗后IM恢复期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平18.3%±2.11%与IM急性期组比较显著增高,差异有统计学意义（t=12.61,P<0.01）。IM急性期组血清IL-10较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=11.50,P<0.01）。治疗后IM恢复期组IL-10较IM急性期组明显增高,差异有统计学意义（t=9.40,P<0.01）。结论 IM急性期存在明显免疫失衡,即CD3⁺ CD8⁺ T细胞增多,CD4/CD8比值降低,可能与Breg细胞表达减低导致的免疫抑制功能不足有关。     

87例成人急性白血病三色流式细胞术免疫分型

目的探讨成人急性白血病( AL)免疫分型标准及其意义,了解成人 AL抗原表达规律和免疫亚型分布情况.方法细胞膜抗原采用单克隆抗体三色直接免疫荧光标记法,胞浆内抗原采用双色直标法用流式细胞术测定.分型标准试用抗体积分系统.结果 (1)未分化型 2.3%;单纯型 54.0%,其中急性髓系白血病( AML) 43.6%,淋系 10.3%;变异型 37.9%,其中髓系 28.7%,淋系 9.1%;混合型 5.7%. (2)AL患者 CD34、 CD38 HLA- DR均阳性约 70%, M3患者 HLA- DR与 CD34均阴性, CD38强阳性; AML变异型伴 CD7、 CD19 阳性最常见,其次为 CD2、 CD4、 CD56 ; B- ALL变异型依次为 CD33、 CD13阳性. CD117对髓系特异性强.结论本方法直接准确地反映成人 AL免疫分型特点.     

CD66c在成人急性白血病细胞上的表达及意义

目的探讨CD66c及其基因CEACAM6在成人急性白血病细胞上的表达及意义.方法体外培养HL-60、K562、LCL721.221和Jurkat等急性白血病细胞,RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞和白血病细胞中CEACAM6 mRNA的表达,并用多参数流式细胞术检测白血病细胞及白血病患者骨髓细胞CD66c分子的表达.同时对199例白血病患者骨髓细胞作细胞遗传学分析,并对25例CD66c阳性急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者进行白血病微量残留病（MRD）分析.结果①HL-60、K562、LCL721.221和Jurkat细胞的细胞膜和细胞质CD66c均阴性.②127例急性髓系白血病（AML）患者中4例CD66c阳性（3.15%）,以M2、M4为主;79例ALL中CD66c阳性28例（35.44%）,均为B-ALL;CD66c只在common B-ALL（54例中有20例）和pre B-ALL（11例中有8例）亚型表达,8例Ph＋B-ALL患者CD66c均阳性.③MRD阳性与阴性组患者比较,6个月内复发率差异有统计学意义（维持治疗14周时MRD阳性者8例,其中6例复发;MRD阴性者17例,其中2例复发）.④CEACAM6 mRNA在CD66c阳性B-ALL细胞强表达,在HL-60细胞呈弱表达,在K562、LCL721.221和Jurkat细胞不表达.结论CD66c在ALL中阳性表达是白血病MRD检测的标志之一.CD66c抗原表达与CEACAM6 mRNA的表达高度相关.     

出血热肾病综合征患者淋巴细胞亚群动态变化

目的探讨出血热肾病综合征(HFRS)患者淋巴细胞亚群百分比动态变化的意义.方法应用流式细胞仪检测42例HFRS患者的79份外周血标本淋巴细胞亚群百分比.结果在HFRS各病期中,T淋巴细胞(CD3+)、CD3+CD4+淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值在发热期开始减低,低血压少尿期降至最低(P＜0.05);CD3+CD8+淋巴细胞、B淋巴细胞(CD3-CD19+)百分比在发热期开始升高(P＜0.01).结论 HFRS患者各病期淋巴细胞亚群比例严重失衡,动态检测淋巴细胞亚群有助于疾病的分期、治疗和预后判断.     

急性冠脉综合征患者的小凹蛋白-1及白三烯B4表达

目的:探讨小凹蛋白-1及白三烯B4在急性冠脉综合症(ACS)患者中表达的变化及其意义。方法:选择45例经冠状动脉造影及临床证实为ACS的患者与20例无冠状动脉病变的对照组进行研究,以流式细胞技术检测外周血单核细胞小凹蛋白-1(Cav-1)的表达水平;采用ELISA检测30例ACS患者及对13例照组血清中白三烯B4(LTB4)的表达水平。结果:ACS组单核细胞Cav-1表达水平显著低于对照组(P0.01);ACS组血清LTB4水平显著高于对照组(P0.05)。Cav-1在急性心肌梗死(AMI)与不稳定心绞痛(UAP)组均显著低于非冠心病组(P0.01);AMI患者血清中LTB4水平显著高于UAP组及非冠心病组(P0.01)。经多元Logistic回归分析ACS与非冠心病组,显示LTB4总预测准确率70.7%,Cav-1总预测准确率78%,而结合LTB4及Cav-1两类指标总预测准确率上升为80.5%。结论:单核细胞上小凹蛋白-1在ACS患者表达降低,AMI患者血清中LTB4表达上调,结合两类指标对预测发生ACS的准确率比单个指标的评价更有意义。     

肺癌患者外周血调节性B细胞的表达及其临床意义

目的 检测肺癌患者外周血调节性B细胞(CD19+CD5+CD1d+B细胞,Bregs)的表达及其临床意义.方法 收集72例肺癌患者和29例健康体检者的外周血,采用流式细胞仪检测Bregs细胞数量,ELISA法检测外周血清IL-10和TGF-β的水平.比较肺癌患者与健康对照,肺癌Ⅰ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期患者Bregs细胞比例、外周血IL-10和TGF-β水平的差异;分析肺癌患者Bregs细胞比例与外周血IL-10和TGF-β水平的相关性.结果 肺癌患者外周血Bregs细胞比例明显高于健康对照(5.01％±1.20％vs 2.78％±0.56％,P＜0.01),Ⅲ+Ⅳ期患者高于Ⅰ+Ⅱ期患者(5.63％±1.04％ vs 4.13％±0.78％,P＜0.01).肺癌患者外周血清IL-10和TGF-β水平明显高于健康对照(2.34±0.79pg/ml vs 1.29±0.51pg/ml,56.64±6.93ng/ml vs 22.42±4.42ng/ml,P＜0.01),Ⅲ+Ⅳ期患者高于Ⅰ+Ⅱ期患者(2.79±0.60pg/ml vs 1.71±0.59pg/ml,59.88±6.63ng/mlvs 52.10±4.37ng/ml,P＜0.01).相关分析显示,肺癌患者外周血Bregs细胞比例与IL-10水平呈正相关(r=0.69,P＜0.01),而与TGF-β3水平无明显相关性.结论 肺癌患者外周血Bregs细胞比例及血清IL-10、TGF-β水平增高,提示Bregs细胞可能与肺癌的进展相关.     

深低温冻存降低人脐静脉血管内皮细胞的免疫原性

目的 探讨深低温冻存对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)免疫原性的影响.方法 体外分离、培养HUVEC,将传代至第2代的HUVEC进行冻存、复苏.将复苏的HUVEC与人淋巴细胞进行单向混合人淋巴细胞-血管内皮细胞培养(MLEC),观察HUVEC刺激下淋巴细胞增殖情况(测定刺激指数);利用流式细胞仪检测冻存前后HUVEC的HLA-A、B、C及HLA-DR抗原表达的变化;检测不同浓度γ干扰素(IFN-γ)作用下新鲜及冻存HUVEC的HLA-A、B、C及HLA-DR抗原的表达情况.结果 新鲜HUVEC的刺激指数为1.716±0.181,冻存HUVEC为1.686±0.145,二者间的差异无统计学意义(P>0.05).新鲜HUVEC和冻存HUVEC的HLA-A、B、C抗原表达率分别为(96.6±1.9)%和(96.0±1.4)%,表达强度分别为84.1±5.7和82.4±4.8,二者间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).新鲜HUVEC和冻存HUVEC均不表达HLA-DR抗原.当IFN-γ的浓度≥100 U/ml时,新鲜HUVEC和冻存HUVEC的HLA-A、B、C表达强度逐渐增强(P<0.01),同一IFN-γ浓度下,新鲜HUVEC和冻存HUVEC的HLA-A、B、C表达强度的差异均无统计学意义(P>0.05);新鲜HUVEC和冻存HUVEC的HLA-DR表达随IFN-γ浓度的升高逐渐加强,其表达率和强度均呈剂量依赖性(P<0.01),新鲜HUVEC较冻存HUVEC表达更显著(P<0.01).结论 在无或低浓度IFN-γ(≤50 U/ml)条件下,深低温冻存对HUVEC免疫原性的影响不显著,而在高浓度IFN-γ(≥100 U/ml)条件下,深低温冻存的HUVEC的HLA-DR抗原表达显著低于新鲜HUVEC,这可能是冷冻降低免疫原性的机制之一.     

血小板活化与脑梗死及颈动脉粥样硬化的相关性

探讨血小板活化程度与脑梗死及颈动脉粥样硬化的关系。用流式细胞术检测 73例动脉粥样硬化性脑梗死患者及 6 1例对照者全血血小板膜糖蛋白PAC 1和CD6 2P阳性率 ,同时行颈动脉彩色多谱勒超声检查。与对照组相比 ,脑梗死组PAC 1和CD6 2P阳性率 (颈动脉粥样硬化脑梗死组分别为 14 .13± 5 .75和 15 .80± 8.89,颈动脉正常脑梗死组分别为 11.70± 5 .32和 12 .36± 6 .4 9)均显著高于对照组 (颈动脉粥样硬化对照组分别为 7.78± 5 .17和7.5 5± 5 .2 8,颈动脉正常对照组分别为 4 .77± 3.71和 5 .0 5± 4 .0 1) (P <0 .0 1) ;不管在脑梗死组还是对照组中 ,颈动脉粥样硬化者PAC 1和CD6 2P阳性率显著高于颈动脉正常者 (P <0 .0 5 ) ,且以颈动脉粥样硬化脑梗死组最高。此结果提示 ,血小板活化程度与脑梗死、颈动脉粥样硬化二者均有关系 ,活化血小板在动脉粥样硬化性脑梗死患者发病中可能起着重要作用。