TRAIL及其5种受体DNA片段的扩增与序列分析

目的：制备TRAIL及其5种受体的特异性基因探针。方法：以PHA刺激人外周血淋巴细胞(PBL)增殖，从而诱导TRAIL及其受体的mRNA转录水平提高，然后用RT-PCR方法扩增出TRAIL及其5种受体的DNA基因片段，并采用基因测序法确证所得基因片段序列的正确性。结果：获得了TRAIL及其5种受体的DNA基因片段。结论：所用方法正确，为研究TRAIL及其受体调控细胞凋亡的机制提供了有价值的工具。     

小鼠Foxp3融合蛋白的原核表达及纯化

目的克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白。方法RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入T Easy Vector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从T Easy vector切下,并将其连接到用相同酶切,含有硫氧还蛋白(含6个组氨酸“标签”)的pET 32a( )原核表达载体中构建pET 32a( )-MFoxp3表达载体。用IPTG诱导转化pET 32a( )-MFoxp3表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化MFoxp3融合蛋白。结果经RT-PCR成功地克隆了1,290 bp的小鼠Foxp3基因,测序正确后转化大肠杆菌原核表达载体pET 32a( ),重组质粒在BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为63 kD的融合蛋白,运用Ni-NTA方法纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白纯度达80%,并用Western Blotting检测蛋白的灵敏度和特异性。结论构建了小鼠Foxp3的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出小鼠Foxp3的融合蛋白。     

髓系抑制性细胞特点及在抗肿瘤治疗中研究进展

髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)作为一群具有免疫抑制功能的异质性细胞,与肿瘤免疫逃逸密切相关,可以通过多种途径促进肿瘤的发生发展及转移。当前研究提示MDSCs还在抗肿瘤治疗中发挥负性调控作用,降低临床治疗措施的效能并可能协助肿瘤细胞产生耐药,但具体机制尚不很明确。本文就MDSCs的一般生物学特征,以及MDSCs在肿瘤免疫治疗、分子靶向治疗与化疗中所发挥作用及相应机制作一综述,以期为打破肿瘤内科治疗的局限性提供参考。     

Smac在TRAIL诱导人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用

目的:初步研究Smac在TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用.方法:观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL作用的Saos-2细胞DNA片段,利用流式细胞术及细胞计数法比较Smac或Bcl-2表达不同的细胞的凋亡程度,同时以Western 印迹半定量检测细胞胞质内Smac表达水平.结果:Saos-2细胞在TRAIL的作用下出现典型的凋亡样改变.在TRAIL作用Saos-2细胞时,Smac在胞质中的含量明显增加.在TRAIL作用24 h后,Smac在Saos-2细胞中过表达,细胞凋亡率由12.7%增加到31.4%.TRAIL作用Saos-2细胞48 h后,转染Bcl-2的细胞与转染空载体的Saos-2细胞相比,凋亡率显著降低(由24%降至15%),且胞质中Smac的表达水平也明显降低.结论:在TRAIL诱导的凋亡中Smac起促进作用,Bcl-2可以通过阻止Smac从线粒体释放到胞质中来抑制细胞凋亡.     

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的鉴定

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)是继TNF、FasL之后发现的具有诱导细胞凋亡能力的细胞因子配体．存在于细胞表面,在多种组织和细胞中广泛表达。人TRAIL由281个氨基酸组成,为Ⅱ型膜糖蛋白．胞外区可被半胱氨酸蛋白酶剪切到体液中．形成相对分子质量为19000     

反义人IGF—I基因转移预防血管损伤后新生内膜增殖的实验研究

目的：观察人反应ＩＧＦ－Ｉ基因转移对抑制血管平滑肌细胞增殖的效果。方法：将反义ＩＧＦ－Ｉ基因转录导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１天后观察其对新生内膜形成的影响。结果；与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４１％。结论：反义人ＩＧＦ－Ｉ基因治疗可能对血管成形术后再狭窄有一定的预防作用。     

转4-1BBL基因细胞诱导带瘤宿主抗瘤效应的体内研究

目的 观察协同刺激分子4-1BBLigand(4-1BBL)基因导入小鼠肝癌细胞Hepal-6后在小鼠体内诱导的抗瘤效应。方法 应用逆转录病毒载体，将小鼠4-1BBL导入小鼠肝癌细胞Hepal-6细胞中，Histidinol(HisD)筛选后获高表达4-1BBL分子阳性细胞克隆，经丝裂霉素C（MMC）处理制备成肿瘤细胞瘤苗TCV4-1BBL，观察其对不同动物模型的体内免疫保护作用和免疫治疗作用，结果 （1）能对同系肝癌细胞产生完全的免疫保护作用，并能保持无瘤状态长期存活（100d以上）；（2）对早期（接种7d)形成的肿瘤有强的治疗作用。（3）对晚期（接种14d)肿瘤，有明显的治疗作用。使大部分小鼠的肿瘤消退。结论 4-1BBL修饰的肿瘤细胞疫苗能明显刺激增强带瘤宿主的抗瘤效应。     

FMC SeaKem HGT Agarose生物学特性的研究

目的：研究ＦＭＣ ＳｅａＫｅｍ ＨＧＴ Ａｇａｒｏｓｅ的生物学特性。方法：急性毒性采用大鼠下腔静脉内直接注射观察法；过敏试验采用豚鼠肌肉、静脉内注射法；吸收试验在兔、鼠皮下及肝内注射后观察。结果：ＦＭＣ ＳｅａＫｅｍ ＨＧＴ Ａｇａｒｏｓｅ无急性毒性、无过敏反应，在兔、鼠皮下及肝内观察３个月均不能被吸收，其溶液能良好地溶解化疗药物卡铂和丝裂霉素。结论：ＦＭＣ ＳｅａＫｅｍ ＨＧＴ Ａｇａｒｏｓｅ有     

重组B7-1/B7-2逆转录病毒载体的构建及其在小鼠肝癌基因治疗中的应用

目的构建表达Ｂ７－１／Ｂ７－２的重组逆转录病毒载体，并观察Ｂ７－１／Ｂ７－２的表达对体内外抗小鼠肝癌免疫反应的影响。方法粘端定向克隆构建重组逆转录病毒载体ＬＸＳＮ－ｍＢ７－１和ＬＸＳＮ－ｍＢ７－２，依次转导包装细胞系ＰＥ５０１和ＰＡ３１７，并用重组病毒上清感染小鼠肝癌细胞系Ｈｅｐａｌ－６，流式细胞术检测Ｂ７－１／Ｂ７－２的表达，并用Ｂ７－１／Ｂ７－２表达阳性的Ｈｅｐａｌ－６在体内外诱导抗肿瘤免疫反应。结果１．表达Ｂ７－１／Ｂ７－２阳性的Ｈｅｐａｌ－６致瘤性明显降低；２．单独Ｂ７－１／Ｂ７－２基因转染仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应；３．Ｂ７－１／Ｂ７－２基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强烈的细胞毒性和完全的抗Ｈｅｐａｌ－６保护性免疫反应。结论Ｂ７－１／Ｂ７－２共刺激分子在小鼠肝癌的表达是激活抗肿瘤免疫所必需的但不是充分的条件，而Ｂ７基因转染联合ＩＦＮ－γ等细胞因子处理能诱导彻底的抗肿瘤免疫反应