复方鳖甲软肝片抗肝纤维化机制的实验研究

目的　研究复方鳖甲软肝片 (FFBJRGP)抗肝纤维化作用机制 ,为FFBJRGP的临床应用及抗肝纤维化药物的研发提供参考。方法　应用Chevallier半定量计分系统、酶图法、免疫组织化学、核酸原位杂交及图像分析等技术方法 ,系统观测高、中、低剂量FFB JRGP治疗CCl4诱导肝纤维化模型后各时间段肝组织内关键性纤维化指标的变化 ,包括主要细胞外基质 (ECM)蛋白、基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)表达量及酶活性 ,肝星状细胞 (HSC)的活化与增殖状况 ,以及MMP和膜型MMP(MT MMP)mRNA的表达等。结果　与对照组比较 ,不同剂量FFBJRGP治疗 3个月、6个月结束时及停药后 3个月和 6个月肝组织Chevallier纤维化评分均明显减少(P <0 0 1或P <0 0 5 )。各观察时间段肝组织内TIMP 1和TIMP 2表达量不同程度减少 ,其中高、中治疗剂量组于治疗 3个月结束时降至最低 ,而MMP 2、MMP 13酶降解活性达高峰 ,并维持较高水平至停药后 3个月 ,MMPs和MT MMPs酶蛋白及mRNA表达明显上调 ,肝组织内TGF β1及其mRNA表达、α SMA阳性HSC数量显著减少 ;Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原降解幅度与MMPs及MT MMPs表达量及酶活性大致呈平行关系。结论　FFBJRGP可能通过多靶位影响肝纤维化逆转及形成环节产生抗肝纤维化疗效     

他莫昔芬对人子宫内膜癌细胞增殖及细胞内钙的影响

目的探讨他莫昔芬（Tamoxifen,TAM）对人子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞周期及细胞内Ca^2＋的影响。方法利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定TAM对细胞增殖量效的影响;采用流式细胞仪检测TAM对Ishikawa细胞周期的影响;应用激光共聚焦显微镜动态检测TAM作用后细胞内Ca^2＋的变化。结果TAM浓度为1×10^-9～1×10^-6mol/L时,呈剂量依赖性促进Ishikawa细胞的增殖,TAM浓度为1×10^-7mol/L时,作用最显著;TAM（10^-7mol/L）可促进细胞周期由G0/G1期进入S期,G0/G1期的DNA含量由51.58%下降到44.85%,S期的DNA含量由34.73%上升到43.64%;TAM使细胞内钙的荧光强度快速升高,约在20 s后开始增高,90 s左右到达峰值,约为静息状态的2.52倍,持续约120 s。结论TAM通过调节细胞周期和介导细胞内Ca2＋浓度的快速增高来促进Ishikawa细胞增殖。     

顺铂诱导颗粒细胞损伤及二仙汤含药血清保护颗粒细胞的作用机制

目的:探讨顺铂对卵巢颗粒细胞的影响及二仙汤含药血清改善大鼠卵巢颗粒细胞损伤的作用机制。方法:选取大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂处理的方法,将顺铂处理后卵巢颗粒细胞随机分为:c DDP组、c DDP+雌二醇组、c DDP+二仙汤组,另设正常组,加入相应药理血清连续培养48 h。采用Western Blotting法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞bcl-2、bax蛋白表达; RT-PCR法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞bcl-2、bax mRNA表达。结果:与正常对照组比较,c DDP组bax mRNA及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P 0. 05)。与c DDP组比较,CDDP+雌二醇组及c DDP+二仙汤组Bax mRNA及蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P 0. 05)。与正常组比较,c DDP组bcl-2 mRNA水平及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P 0. 05)。与c DDP组比较,CDDP+雌二醇组及c DDP+二仙汤组bcl-2 mRNA转录及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:二仙汤能够抑制c DDP诱导的卵巢颗粒细胞损伤,其作用机制可能与调节bcl-2/bax平衡有关。     

肺痿论治干预肺纤维化大鼠肺功能的实验研究

目的:比较麦门冬汤和甘草干姜汤在肺纤维化阶段对大鼠模型肺功能的干预作用。方法:用博莱霉素造模14 d的SD大鼠,灌胃麦门冬汤(7.5 g/kg、15 g/kg、30 g/kg)和甘草干姜汤组(3.75 g/kg、7.5 g/kg、15 g/kg),模型组和正常组大鼠灌胃等体积饮用水。中药灌胃14 d后检测用力肺活量(FVC)、肺动态顺应性(Cdyn)、0.4秒率(FEV0.4/FVC%)、呼气峰值流速(PEF)、最大呼气中期流速(MMF)等指标,检测血气变化,称量脏器质量、计算脏器系数,HE染色观察肺组织病理。结果:麦门冬汤高剂量组能够降低模型动物肺脏质量、肺脏系数(P0.05),提高肺顺应性、FVC和质量FVC(P0.05);甘草干姜汤高剂量能够改善肺顺应性和FVC(P0.05);甘草干姜汤中剂量能够改善质量FVC、降低0.4秒率(P0.05),保护非纤维化区肺泡结构;甘草干姜汤能够提高肺纤维化大鼠的PO2和SO2(P0.05)。结论:麦门冬汤和甘草干姜汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺脏功能均具有改善作用,前者主要是改善气道周围纤维化区的间质增生,后者主要是保护非纤维化区的肺泡结构和功能。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞胶原表达及降解的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cell，HSC)中Ⅰ，Ⅲ型胶原及组织金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)表达的影响，以探讨防治肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，免疫组化检测实验各组肝星形细胞中Ⅰ，Ⅲ型胶原及TIMPs的表达经图像分析系统定量分析。结果：培养72h，高、中、低剂量药物组Ⅲ型胶原的表达[Ⅲ型胶原反应物吸光度(A值)为178．364-5．82，182．274-20．32，220．38&;#177;19．32]早于Ⅰ型胶原(Ⅰ型胶原反应物A值为300．23&;#177;25．80。329．37&;#177;45．98，425．38&;#177;19．32)，与模型组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。高、中剂量药物组均可有效抑制Ⅰ，Ⅲ型胶原的表达，并呈药物量效关系；培养24k实验各组均无TIMPs的表达，培养48h后TIMPs开始表达，培养72h时，高、中、低药物组与模型组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，可显著抑制TIMPs的表达。结论：复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时肝星形细胞中Ⅰ，Ⅲ型胶原及TIMPs的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与减少细胞外基质生成的同时，加速已生成的细胞外基质降解有关。     

肾康注射液对肾小管上皮细胞LLC-PK1分泌纤维连结蛋白的影响

探讨肾康注射液对肾小管上皮细胞LLC -PK1分泌纤维连接蛋白 (FN)的影响。采用酶连免疫吸附测定 (ELISA) ,以单味大黄注射液为实验对照组 ,检测肾康注射液对肾小管上皮细胞LLC PK1分泌FN含量的影响。结果显示 :肾康注射液可以显著抑制肾小管上皮细胞LLC PK1分泌FN的含量 ,并呈剂量依赖关系 ;肾康注射液作用明显优于同等含量的单味大黄注射液。说明肾康注射液抑制肾小管上皮细胞LLC PK1分泌FN含量 ,是该方延缓慢性肾功能衰竭进展的机理之一。     

中医药产业 呼唤风险投资

随着人类迈向２１世纪,知识经济逐渐成为社会经济发展的主体,日益显示出不可估量的能量,知识与资本的结合已经成为经济发展的重要推动力量,自７０年代以来,科技进步日渐成为经济发展的决定性因素,“科学技术是第一生产力”已成为现实。风险投资是知识经济的催化剂,是当代发展高科技产业最先进的运作方式,也是国外发展医药高新技术产业的重要方法和有效投资工具,在世界经济一体化的形势下,发展高新技术产业是提高国家竞争力的主要途径。谁掌握了高新技术,谁就掌握了技术的制高点,就掌握了竞争中的主动权。风险投资可以向创业者提供资金支持,而且可以协助其开拓市场,并通过选人和理财来加强对企业的管理和监控,有助于企业的成功。风险     

紫草素抗雌激素对人乳腺癌MCF-7细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨紫草素(shikonin,SK)在雌激素作用下对人乳腺癌MCF-7细胞周期蛋白(cyclin D1)表达的影响。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,不同浓度的紫草素及在雌激素干预下作用于细胞后,通过免疫组织化学技术、Western blot法检测cyclin D1蛋白的表达变化。结果 与空白对照组比较,雌二醇组cyclin D1表达量显著增多,SK各组表达含量显著降低,且cyclin D1蛋白表达量随SK浓度升高逐渐被抑制(P<0.05);雌二醇干预后,SK对cyclin D1蛋白量的表达同样具有抑制作用(P<0.05)。结论 SK能降低MCF-7细胞中cyclin D1蛋白水平表达,具有浓度依赖性,并且对雌激素上调cyclin D1表达具有明显的抑制作用。     

去甲斑蝥素对体外培养人脐静脉内皮细胞生长的影响

近年来,肿瘤抗血管形成治疗(anti-angiogenesistherapyoftumor)已成为一个新的研究热点,肿瘤血管形成的研究也得到了广泛重视。本实验通过检测去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对体外培养人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)的作用,为中药控制肿瘤血管形成提供初步理论基础。实验中,以传代培养人脐静脉内皮细胞(复苏后6代内)为材料,细胞培养、传代、冻存、复苏均按常规操作。MTT实验、生长曲线测定实验证明去甲斑蝥素对HUVEC的药效作用为剂量、时间依赖性,半数有效浓度为40μmol/L。消化细胞、离心涂片后进…     

槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌T47D细胞两种受体亚型表达的影响

目的探讨槲皮素和补骨脂素的雌激素作用以及调控雌激素受体亚型表达的作用机制。方法10μmol.L-1槲皮素和10μmol.L-1补骨脂素分别处理T47D细胞48 h,采用RT-PCR和Western blot方法测定对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D雌激素受体亚型ERα和ERβ表达的影响,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价槲皮素和补骨脂素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系。结果槲皮素、补骨脂素在10μmol.L-1可明显诱导T47D细胞ERαmRNA和蛋白表达,而对ERβ表达没有影响。当与ICI182,780共孵育T47D细胞ERα表达被拮抗。结论槲皮素、补骨脂素产生的促进ER阳性细胞增殖的雌激素样作用是通过增加ERα表达实现的。