乌头碱调节 C-C基序趋化因子配体 2/C-C基序趋化因子受体 2信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究

目的探讨乌头碱调节 C-C基序趋化因子配体 2(CCL2)/C-C基序趋化因子受体 2(CCR2)信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究。方法研究起止时间为 2021年 12月至 2022年 10月。采用细胞计数试剂盒( CCK-8)法检测 2.5、5.0、10.0、20.0、30.0 μmol/L乌头碱处理后的人膀胱癌 5637细胞存活率,筛选出合适的乌头碱作用浓度。将 5637细胞分为对照组、乌头碱低剂量( 10 μmol/L)组、乌头碱高剂量( 20 μmol/L)组、乌头碱高剂量(20 μmol/L)+空载组、乌头碱高剂量( 20 μmol/L) +CCL2过表达组,分组处理后,采用 CCK-8法、 5-乙炔基 -2''-脱氧尿苷( Edu)染色法及 Hoechst 33258染色分别检测各组 5637细胞存活率、增殖率、凋亡率;采用 Transwell实验及划痕实验分别检测各组 5637细胞侵袭数、迁移率;采用免疫荧光染色检测各组 5637细胞凋亡相关蛋白 BCL2相关 X蛋白( Bax)和 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)表达比值( Bax/Bcl-2);采用免疫印迹法检测各组 5637细胞 CCL2/CCR2信号通路相关蛋白及上皮间质转化标志蛋白［神经钙黏素( N-cadherin)、锌指 E盒结合同源盒 1(ZEB1)、紧密连接蛋白 1(ZO-1)、上皮钙黏素( E-cadherin)］表达。结果与对照组相比,乌头碱低剂量组、乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量 +空载组细胞 CCL2(0.69±0.09、0.20±0.03、0.19±0.04比 1.21±0.13)CCR2(0.78±0.12、0.26±0.06、0.27±0.07比 1.33±0.20)、 Ncadherin(0.65±0.06、0.12±0.02、0.11±0.03比 1.24±0.12)与 ZEB1蛋白存活率、增殖率、侵袭数、迁移率均降低( P<0.05), Bax/Bcl-2、细胞 ZO-1与 E-cadherin蛋白表达均升高( P<0.05);乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量 +空载组细胞 CCL2、CCR2、N-cad? herin与 ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率相比乌头碱低剂量组进一步降低( P<0.05)Bax/Bcl-2、细胞 ZO-1与 Ecadherin蛋白表达进一步升高( P<0.05)。与乌头碱高剂量组相比,乌头碱高剂量 +CCL2过表达组CCL2、CCR2、N-cadherin与 ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率升高( P<0.05)Bax/Bcl-2、细胞 ZO-1与 E-cadherin蛋白表达降低( P<0.05)。结论乌头碱可通过 CCL2/CCR2信号通路而抑制膀胱癌细胞存增殖及侵袭和迁移,促使其凋亡。     

高效液相色谱法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量

目的建立高效液相色谱法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量。方法采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氢钾(用氢氧化钠调pH值为5.0)(22∶78)为流动相,流速:1.0 m l.m in-1,检测波长为347 nm,柱温:30℃。结果测定线性范围为0.562~28.1 mg.L-1,r=0.99998,平均回收率为99.9%。结论该法简便、快速,准确。     

小檗碱调节翼状胬肉成纤维细胞增殖能力的机制研究

目的:探讨小檗碱对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖能力的影响及可能的作用机制。方法:通过对手术获取的翼状胬肉组织进行培养,获取翼状胬肉成纤维细胞。采用不同终浓度(0、20、40、80μmol/L)小檗碱对细胞进行诱导,检测小檗碱诱导后翼状胬肉成纤维细胞凋亡水平、线粒体膜电位和凋亡相关因子mRNA与蛋白表达水平变化。结果:小檗碱能够以剂量依赖的方式提高体外培养翼状胬肉成纤维细胞线粒体去极化水平、细胞凋亡比率、促凋亡基因Bax和Bad mRNA与蛋白的表达水平,降低Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。结论:小檗碱可能通过提高体外培养翼状胬肉细胞线粒体去极化水平诱导胬肉细胞发生凋亡。     

吡美莫司乳膏联合盐酸小檗碱溶液湿敷治疗酒渣鼻疗效观察

目的:评价吡美莫司乳膏联合盐酸小檗碱溶液湿敷治疗酒渣鼻的临床疗效。方法:入选的42例酒渣鼻患者均外用1%吡美莫司软膏联合3%盐酸小檗碱溶液湿敷,2次/天,共4周。于治疗前及治疗后第1、2、3和4周时各随访1次。结果:42例患者中33例完成临床实验,治疗后第1、2、3和4周时,丘疹脓疱型酒渣鼻有效率分别为12.12%、18.18%、27.27%和36.36%,红斑型有效率分别为42.42%、57.56%、69.70%和78.79%。吡美莫司软膏联合盐酸小檗碱溶液湿敷对表现为红斑型酒渣鼻患者的疗效优于丘疹、脓疱型。在治疗3~5天时,21.43%的患者出现局部刺激反应。结论:吡美莫司乳膏联合盐酸小檗碱溶液湿敷治疗酒渣鼻安全、有效,对以红斑为主要临床表现的酒渣鼻患者疗效较好。     

生川乌、生草乌中毒致死1例

患者女，65岁，因下肢风湿痛多年．就诊于个体医生。该医生给患者配制中药1剂（蜈蚣2条、地龙15g、黄柏15g、红花15g、防己15g、乌蛇15g、甘草15g、全蝎6g、木通15g、羌活15g、乌梅15g、防风15g、生川乌5g、生草乌5g、杜仲20g、川断15g），嘱浸30度米酒2000mL并将其埋入地下7-10d后饮用。每次饮1瓦匙（约10mL），每日2次。药酒埋地下15d后患者开始饮用。服药酒2d后四肢出现轻度麻痹感，未作处理，继续服至第8天．四肢躯体麻痹、乏力感加重，呼吸紧迫．烦躁不安，恶心呕吐，于当晚11时20分送入当地医院急救。入院后，患者出现潮式呼吸，烦躁不安加重，大汗淋漓，呕吐．全身麻痹，心电图呈频发性多源性早搏，短阵性室扑。经抢救无效，3h后死亡。     

青藤碱抗肿瘤作用与分子机制研究进展

肿瘤为机体在多重致瘤因子的影响下,导致局部组织细胞增生产生的病因未明的新生物,严重威胁人类生命和健康。肿瘤根据其病理性质分为良性肿瘤、交界性肿瘤、恶性肿瘤;其中恶性肿瘤统称为癌症,目前尚无特效药及可靠的治愈手段,为当前医学界研究的一大热点和难点。文献古籍中多有中草药治疗肿瘤屡建良效的记载,且现代药理研究表明,越来越多的中药活性成分已逐步凸显其对多种不同类型肿瘤的抑制作用。青风藤作为我国传统中草药治疗风湿类疾病具有悠久的历史,青藤碱为中药青风藤中含量较高的主要活性成分,具有抗炎、免疫抑制、镇痛、镇静等广泛药理作用,因微溶于水的特性故临床多应用其盐酸盐,商品名为正清风痛宁。近年研究表明,青藤碱单用或联合放化疗对多种肿瘤有显著或协同的抑制作用,被称为肿瘤抑制剂、放化疗增敏剂,其作用机制主要通过抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,阻滞肿瘤细胞周期,抑制肿瘤侵袭、转移,诱导肿瘤细胞自噬,逆转肿瘤细胞多药耐药,结合纳米材料增效减毒等。该文通过总结近年来青藤碱抗肿瘤抗癌相关实验研究成果,并根据其体内外药理作用及作用机制进行分类叙述,以期为青藤碱作为抗肿瘤治疗潜在药物提供理论依据,亦为其抗肿瘤的进一步机制研究提供参考。     

辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法 设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50,100,200,300,400,500,600,800,1 000 μmol·L^-1）处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预（200,400,800 μmol·L^-1）后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（200,400 μmol·L^-1）干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53（p-p53）,抑癌基因［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）］,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA（mRNA）沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L^-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L^-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L^-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低（P<0.01）,呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L^-1处理可明显诱导细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）;200,400 μmol·L^-1 辣椒碱干预下,细胞生长表现为G₂/M期阻滞,800 μmol·L^-1表现为G₀/G₁期阻滞（P<0.05）;与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L^-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白（p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP）的表达（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.01）;沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

豨莶草水洗脱部位对人肺纤维细胞的毒性与药效作用

目的 检测不同浓度豨莶草水洗脱部位（SWEF）对MRC-5人肺纤维细胞的毒性作用及对MRC-5细胞α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）表达与炎症因子的影响,从而发现豨莶草毒效与药效作用物质基础。方法 以MRC-5细胞为研究对象,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法结合流式细胞术、台盼蓝染色判定SWEF（1,6,10,20,50 g·L^-1）对MRC-5细胞的毒效作用;通过测定沉默基因前后α7nAChR的表达及炎症因子水平的变化探讨SWEF对MRC-5细胞的药效作用。结果 SWEF（≥6 g·L^-1）显著降低MRC-5细胞的存活率（P<0.01）,促进MRC-5细胞凋亡与坏死（P<0.01）,其半数抑制浓度（IC₅₀）为6.03 g·L^-1;MRC-5细胞α7nAChR表达与炎症因子检测显示SWEF含有α7nAChR激动剂样物质,该物质可增高α7nAChR基因和蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）,降低炎症因子水平（P<0.05,P<0.01）,SWEF下调炎症因子的作用可能与其上调α7nAChR mRNA表达有关,二者呈负相关（P<0.01）。结论 SWEF（≥6 g·L^-1）对MRC-5细胞具有显著的毒性作用,药效作用研究证实SWEF含有α7nAChR激动剂样物质,该物质可增高α7nAChR的表达,降低炎症因子水平,推测过量的α7nAChR激动剂样物质可能为豨莶草的毒性成分之一。     

基于多指标质量差异关键属性优化厚朴产地加工“发汗”工艺

目的基于厚朴"发汗"前后多指标质量差异关键属性优化厚朴"发汗"工艺。方法采用HPLC法同时测定"发汗"厚朴中紫丁香苷、木兰花碱、厚朴苷A、和厚朴酚及厚朴酚含量,采用CRITIC-层次分析法(CRITIC-AHP)复合加权法计算权重系数,多指标综合评分,结合Box-Behnken响应面法考察水煮时间、堆积天数、干燥温度及干燥时间对"发汗"厚朴质量的影响,优选厚朴"发汗"工艺。结果厚朴较佳发汗工艺为取厚朴药材,沸水水煮2min,堆积发汗1d,晾晒7 d后于45℃烘箱内干燥36 h。结论采用多指标含量测定、CRITIC-AHP复合加权法结合响应面法优厚朴"发汗"工艺,为厚朴产地加工"发汗"工艺考察提供参考。     

蝙蝠葛碱复合纳米胶束的制备及大鼠体内药动学研究

目的使用聚乙烯己内酰胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus~?)和D-α-维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)作为载体材料制备蝙蝠葛碱复合纳米胶束(dauricine composite nanomicelles,Dau-CNMs),并通过大鼠ig给药评价其药动学情况。方法采用溶剂蒸发-薄膜分散法制备Dau-CNMs,通过单因素实验筛选了Dau-CNMs处方中Soluplus~?与TPGS用量配比;分别考察了Dau-CNMs和蝙蝠葛碱单纯纳米胶束(dauricine single nanomicelles,Dau-SNMs)的微观形态、粒径分布、Zeta电位等理化性质;并通过MTT法评估了Dau-CNMs的细胞毒性,采用Caco-2细胞单层模型评价了蝙蝠葛碱原料药、Dau-SNMs和Dau-CNMs的细胞跨膜转运性质;通过大鼠ig给药比较蝙蝠葛碱混悬液、Dau-SNMs和Dau-CNMs的体内药动学特征。结果经实验筛选得到Dau-CNMs的最优处方:Soluplus~?与TPGS用量比为7∶1;在透射电子显微镜下可观察到Dau-SNMs和Dau-CNMs均呈圆整球状分布;Dau-CNMs的细胞毒性较低,且能够有效提高药物的跨膜转运能力;与蝙蝠葛碱混悬液组和Dau-SNMs组比较,Dau-CNMs组大鼠ig给药显著提高了药物达峰浓度和口服生物利用度。结论以Soluplus~?与TPGS作为载体材料,将蝙蝠葛碱制备成复合纳米胶束,能够显著增加药物生物利用度。