槟榔碱对血管内皮细胞增殖和分泌NO的影响

目的：观察去除槟榔碱干预后血管内皮细胞（EC）增殖和分泌一氧化氮（NO）的变化。方法：采用MTT法检测去除槟榔碱干预后的EC存活率，硝酸还原酶法检测EC分泌NO量。结果：30μg／ml～90μg／ml槟榔碱干预EC 24h，去除刺激并继续孵育48h，EC的增殖能力可恢复，且分泌NO增多（p〈0．05）；但120μg／ml槟榔碱干预24h、30μg／ml～120μg／ml槟榔碱干预48h并继续孵育48h，EC的增殖能力难以恢复（P〈0．05）。结论：去除低浓度、短时间槟榔碱干预后EC增殖能力的恢复可能与具有自我保护效应的NO分泌量增加有关。     

槟榔碱对血管内皮细胞增殖活动影响的实验研究

目的：观察槟榔碱对血管内皮细胞（endothelial cell,EC）增殖活动的影响。方法：采用MTT法检测槟榔碱干预后的EC存活率。结果：30～120μg/ml槟榔碱抑制EC的增殖,并呈浓度和时间依赖效应（P〈0.05）,60μg/ml槟榔碱干预EC24h细胞数量减少,120μg/ml槟榔碱干预EC72h细胞存活率达到最低（p〈0.05）。结论：一定浓度范围的槟榔碱可抑制EC的增殖。     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞分泌整合素α2的影响

目的：通过研究槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞（FB）表达整合素α2的影响,探讨整合素α2在口腔黏膜成纤维性变（OSF）发病机制中的可能作用。方法：体外培养人正常口腔黏膜成纤维细胞（FB）,培养基中加入不同浓度（0、10、20、40、80、160μg/ml）的槟榔碱孵育,MTT法12h后检测FB的增殖水平。RT-PCR法24h后检测0、10、20、40μg/ml浓度组整合素α2mRNA的表达水平。结果：槟榔碱浓度为20μg/ml时,FB增殖活性开始下降,与对照组相比无统计学差异（p〉0.05）,40μg/ml时下降明显与对照组相比有统计学差异（p〈0.05）。正常对照组整合素α2mRNA表达量低,随槟榔碱浓度增高其表达量呈增高趋势（p〈0.05）。结论：槟榔碱具有刺激FB表达整合素α2的作用,提示FB分泌整合素α2增多,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。     

左旋含羞草碱通过调控LATS1表达对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】目的 探讨左旋含羞草碱对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法 结直肠癌细胞SW480分为对照组、左旋含羞草碱低、中、高浓度组、pcDNA组、pcDNA LATS1组、左旋含羞草碱+si NC组、左旋含羞草碱+si LATS1组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖抑制率;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）、B细胞淋巴瘤/白血病 2（Bcl 2）、Bcl 2相关X（Bax）、大肿瘤抑制基因1（LATS1）蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR（RT qPCR）检测LATS1 mRNA表达水平。结果 左旋含羞草碱低、中、高浓度处理的结直肠癌细胞SW480细胞增殖抑制率升高,细胞凋亡率升高,LATS1表达水平升高,且呈浓度依赖性（P＜005）。过表达LATS1抑制结直肠癌细胞增殖,并促进细胞凋亡。抑制LATS1表达逆转了左旋含羞草碱对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用。结论 左旋含羞草碱可能通过上调LATS1表达抑制结直肠癌细胞增殖,并促进细胞凋亡。     

槐果碱对肺癌A549细胞增殖凋亡的作用机制

目的 探讨槐果碱对肺癌细胞的体外抑制作用及可能的作用机制.方法 不同浓度(1、2、4、8、16、32、64 mmol/L)槐果碱处理肺癌细胞A549,MTT检测槐果碱对A549的IC50,选择适宜浓度的槐果碱处理肺癌细胞A549(槐果碱组),未作处理的A549细胞作为对照组,克隆形成实验和BrdU实验检测两组细胞增殖,TUNEL和流式细胞数检测两组细胞凋亡,Western blot检测增殖细胞核抗原(PC-NA)、MYC、Bax、Bcl-2和脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)和PTGDR2蛋白表达,A549细胞给与5 ng/ml PGD2激活剂处理(PGD2组),克隆形成实验、TUNEL实验和Western blot实验检测PGD2对A549细胞增殖和凋亡的影响.结果 槐果碱对A549的IC50为5.196 mmol/L.克隆形成和BrdU实验结果显示,5 mmol/L槐果碱处理的槐果碱组肺癌细胞A549细胞增殖低于对照组,凋亡高于对照组,PC-NA、MYC、Bcl-2蛋白表达低于对照组,Bax蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);槐果碱组L-PTGDS和PTGDR2蛋白表达高于对照组(P＜0.05),给予5 ng/ml PGD2激活剂处理的A549细胞增殖受到抑制,凋亡显著增加(P＜0.05).结论 槐果碱可以抑制肺癌细胞增殖,促进凋亡,激活PGD2/PTGDR2通路,从而抑制肺癌的发生.     

小檗碱调节ERK/NF-κB信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖

目的 探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)诱导的系膜细胞(MCs)异常增殖的调节作用及可能的机制.方法 体外培养MCs,实验分为对照、高糖模型和BBR给药组(30、60、90μmol/L);CCK-8法检测细胞增殖活力;高内涵系统成像法检测细胞的增殖能力;激光共聚焦法检测细胞外基质沉积蛋白(ECM)Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)表达情况;Western blot法检测细胞上细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、磷酸化促分裂原激活激酶1(p-MSK1)、IκB、p-IκB、p65、p-p65的蛋白表达情况.结果 CCK-8法结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)均可抑制MCs的增殖活力;高内涵系统成像结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)可抑制HG诱导的MCs的异常增殖;激光共聚焦实验结果显示,BBR(90μmol/L)能降低ECM上的Col-Ⅳ、FN的表达水平;Western blot实验结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)能降低MCs上p-ERK、p-MSK1、p-IκB、p-p65蛋白的表达水平.结论 BBR可能调节MCs上的ERK/NF-κB的信号通路,改善HG诱导的MCs异常增殖.     

盐酸青藤碱通过C/EBPβ-COX-2通路抑制LPA诱导的肝癌细胞增殖

目的 观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用.方法 采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖.结果 用10μmol/L LPA处理Huh7细胞不同时间(0～6 h)后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性升高;分别用不同浓度的LPA(0～10μmol/L)处理Huh7细胞6 h后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达均呈浓度依赖性升高;SIN浓度依赖性抑制LPA所诱导的C/EBPβ、COX-2表达及细胞增殖.结论 LPA通过诱导C/EBPβ-COX-2通路表达促进人肝癌Huh7细胞增殖,而SIN能够通过下调C/EBPβ-COX-2表达抑制LPA所诱导的细胞增殖.     

α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除小鼠牙髓炎模型的构建

目的：构建α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotine acetylcholine receptor,α7 nAChR）基因敲除小鼠牙髓炎模型,为研究α7 nAChR在牙髓炎发生发展过程中的作用机制提供实验模型。方法：取16只α7 nAChR基因敲除（knock out,KO）小鼠和16只野生型（wide type,WT）C57BL/6鼠的上颌第一磨牙的牙髓暴露法建立牙髓炎模型,分别在牙髓暴露后1、3、7 d处死小鼠,HE染色、免疫组化检测牙髓组织NOD样受体蛋白3（NOD?like receptor protein 3,NLRP3）表达情况。结果：HE染色结果显示牙髓暴露后1 d,α7 nAChR KO鼠及WT鼠的穿髓孔周围血管充血、组织水肿;牙髓暴露后3 d,炎症细胞聚集,α7 nAChR KO鼠炎症细胞聚集已达冠髓底部,WT鼠的炎症细胞主要聚集在穿髓孔周围的牙髓组织中;牙髓暴露后7 d,α7 nAChR KO鼠的牙髓炎症细胞浸润至根部牙髓,而 WT鼠的牙髓炎症细胞仍然主要聚集于冠髓底部。免疫组化染色结果显示,牙髓暴露后,α7 nAChR KO鼠牙髓NLRP3表达高于WT鼠,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：成功建立了α7 nAChR基因敲除鼠的牙髓炎模型,而且α7 nAChR基因敲除鼠牙髓炎症浸润明显快于WT小鼠。     

α7⁃nAChR通过抑制软骨细胞凋亡延缓小鼠膝骨关节炎关节软骨退变

目的：探讨激活α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7?nAChR）对小鼠骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨细胞凋亡的作用及机制。方法：通过关节腔内注射碘乙酸钠（monosodium iodoacetate,MIA）建立小鼠OA模型。模型小鼠随机分成MIA单独给药组、0.5 mg/kg烟碱（nicotine,Nic）治疗组、1 mg/kg Nic治疗组和Nic +α7?nAChR特异性拮抗剂甲基牛扁碱（methyllycaconitine,MLA）治疗组,对照组小鼠则注射等体积的生理盐水。模型制备后7、14、21 d应用Von Frey纤维丝评价小鼠疼痛行为指标机械缩足反射潜伏期;第21天时处死小鼠,取膝关节标本进行甲苯胺蓝和番红固绿染色,评估膝关节软骨破坏情况并进行关节软骨退变评分;应用原位末端转移酶标技术（terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick end labelling,TUNEL）分析关节软骨细胞的凋亡水平;应用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl?2、Bax、cleaved caspase?9和caspase?9的表达。结果：模型制备后21 d,MIA组小鼠机械缩足反射潜伏期阈值显著下降至（0.28 ± 0.02）g,关节软骨退变评分和蛋白聚糖损失评分分别升高至（5.33 ± 1.19）分和（2.33 ± 0.27）分,关节软骨细胞凋亡率升高至（31.83 ± 3.89）%。而1 mg/kg Nic能显著减轻MIA引起的小鼠膝关节疼痛行为（P < 0.05）,降低MIA诱导的软骨退变（P < 0.05）和关节软骨细胞凋亡坏死（P < 0.05）。进一步机制研究发现,MIA可明显降低Bcl?2的表达,增加Bax和cleaved caspase?9的表达,而Nic治疗组能逆转MIA诱导的软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响,显著升高Bcl?2的表达,降低Bax的表达和cleaved caspase?9/caspase?9的比率（P < 0.05）,上述这些Nic的作用均能被MLA消除。结论：激活α7?nAChR能抑制关节软骨细胞的凋亡,对OA模型小鼠的软骨损伤具有保护作用,其抗凋亡机制可能与线粒体凋亡途径有关。     

AB-8型大孔吸附树脂纯化左金丸有效部位的工艺优选

目的:优选左金丸的大孔树脂纯化工艺。方法:以总生物碱、盐酸小檗碱、吴茱萸碱的吸附-洗脱率为指标,采用单因素试验考察上样液质量浓度、径高比、洗脱剂等对左金丸大孔树脂纯化工艺的影响。结果:优选的纯化工艺为上样液质量浓度0.14g/mL,树脂柱径高比1︰10,上样量与树脂体积比1︰2.4(吸附3h),加2BV水洗除杂,用7BV70%乙醇洗脱,收集洗脱液。结论:该纯化工艺合理、稳定,可推广于大生产应用。