负压吸附式止血敷贴的制备及其生物相容性

背景:部分止血材料存在有毒性及价格昂贵的缺陷。目的:观察负压吸附式止血敷贴在动物体内的生物相容性。方法:健康家猪6只在肝及肾划出长约1cm,深约0.5cm的条形切口,用负压吸附式止血敷贴覆盖。移植前观察检测血常规、肝肾功能及体液免疫学指标;移植后第14天观察再次检测血常规、肝肾功能及体液免疫学指标,并观察局部组织形态学变化。结果与结论:植入前后血生化和免疫学等指标差异无显著性意义(P>0.05),肝肾组织切片显示无明显炎症反应,未见明显纤维细胞包膜。动物体内实验提示,负压吸附式止血敷贴无毒性、无排斥反应、无免疫反应、无过敏反应,具有良好的生物相容性。     

低剂量他克莫司为基础四联免疫抑制方案在肾移植中的应用：4年随访结果

背景：免疫抑制药物日新月异的发展及药物应用存在较大的个体差异使得目前国内外对于肾移植后免疫抑制的选择和应用剂量等仍无法达成完全统一的共识。目的：观察以低剂量他克莫司为基础的四联免疫抑制剂方案的免疫抑制效能、保护肾功能的作用和安全性。方法：以他克莫司+酶酚酸酯+泼尼松龙(方案1)为对照组;将方案1中他克莫司和酶酚酸酯减量为方案2,以方案2+西罗莫司为组1;方案2+咪唑立宾为组2。检测3组受者肾移植后第2,4周、6个月及1年时淋巴细胞对供体树突状细胞的反应强度;每6个月测定1次受者尿转化生长因子β1;移植后每1~3个月检查肝肾功能、血尿常规、血糖,随访时间为4年。结果与结论：3组急性排斥反应发生率及感染发生率无显著差异;移植4周,组1,组2的反应强度明显低于对照组 (P < 0.05);移植1年,组1、组2尿转化生长因子β1浓度均显著低于对照组(P < 0.05);移植2年,组1、组2血肌酐和肌酐清除率降低值均显著低于对照组(P < 0.05);组1、组2肝功损害、高血糖等不良反应发生率均低于对照组 (P < 0.05)。提示与常规剂量他克莫司为基础的三联免疫抑制方案相比,低剂量他克莫司为基础的四联免疫抑制方案能够发挥同样的免疫抑制效果,同时能减轻移植肾纤维化进程,改善移植肾功能,减少严重不良反应发生率,更有利于移植肾长期存活。     

多孔止血淀粉在肝及脾中的止血效果

对实质性脏器的缝扎止血是必要的,但易导致组织切割破损,造成裂口出血或针眼出血;另外,缝扎止血可影响脑、肾、肝等重要脏器功能[1].对实质性脏器创面出血的治疗仍然是外科领域面临的难题[2].对此,美国Medafor公司研发了Arista止血粉,并显示了很好的安全性及较好的止血效果,但其价格昂贵.我们采用一种新的方法,制备出多孔性更明显的多孔止血淀粉(PHS).本研究旨在观察PHS的制备并观察其在肝脏及脾脏中的止血效果.     

血管紧张素转换酶抑制剂治疗慢性移植肾肾病的疗效观察

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)依那普利 (enalapril)能否改善早期慢性移植肾肾病(CAN)患者的肾功能及其机制。　方法:对病理诊断为CANⅠ级的 23例患者(A组)于肾功能不全 2个月内开始服用依那普利(10mg/d),持续 1年以上,与同期内未服用ACEI的 25例CANⅠ级患者(B组)进行对比,比较两组患者 1年后肾功能、血和尿转化生长因子β1 (TGF β1 )水平(ELISA法测定);及治疗后移植肾组织中TGF β1mRNA表达量的变化(RT PCR法)。　结果:治疗 1年后,A组 15例(65 .2% )患者移植肾功能好转或稳定,B组中 4例(16. 0% )移植肾功能稳定,两组相比差异显著(P<0. 05)。观察终点时,A组肌酐清除率(Ccr)减损量[ (6 .6±5. 6 )vs(16 .3±9 .3)ml/min,P<0 01]、尿TGF β1 浓度(268 .2±82. 2vs458. 9±78 8pg/mg·Cr,P<0 .01)均明显低于B组;两组患者血TGF β1 浓度无明显差异。A组治疗后移植肾TGF β1mRNA表达量由 1 58±0 33降至 0 96±0 28(P<0 01)。　结论:依那普利能改善早期CAN患者的肾功能,抑制移植肾内TGF -β的表达。     

人BMP-7基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的 构建含有人骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)基因的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定,观察其对肾小管上皮细胞株(HKC)细胞的转染情况.方法 用基因工程技术将人BMP-7基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pDC316上,利用脂质体介导的方法将AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre和穿梭质粒pDC316-BMP-7转染入HEK293细胞,进行同源重组,得到腺病毒重组质粒Ad5-BMP-7,并在其中包装扩增病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HKC细胞感染效率的检测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明BMP-7基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.25 × 1010PFU/ml,对HKC有较强感染能力.结论 应用细胞内同源重组方法成功构建了含人BMP-7基因的重组腺病毒载体.     

肾移植早期巨细胞病毒感染对移植肾远期预后的影响

目的:探讨肾移植受者术后早期巨细胞病毒(CMV)感染与远期肾功能的关系. 方法:自1999年8月～2001年6月,根据肾移植术后6个月内CMV-pp65抗原血症指数(I)和持续时间,将96例随访达3年的肾移植受者分为CMV非感染组(I=0)、低感染组(I= 1～30)、短期高感染组(I >100,≤2周)和长期高感染组(I >100,≥8周),比较四组在肾移植6个月时肾功能、移植肾活检组织中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白和mRNA表达;随访3年期内肌酐清除率(Ccr)减损量、肾功不全发生率,并对出现肾功不全者在血肌酐(SCr)升高1个月内进行移植肾穿剌活检,以明确病因. 结果:在肾移植6个月时,四组肾功能无明显差异(P > 0.05),但"长期高感染组"肾组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达量明显大于其他3组;在肾移植3年时,"长期高感染组" Ccr下降了(16.2±7.2)ml/min,43.5%(10/23)患者出现肾功能不全,二者均明显大于其他3组(P < 0.01,P <0.05).肾功不全者,移植肾活检均证实为慢性移植肾肾病. 结论:肾移植术后早期长时间严重的CMV感染是影响移植肾远期肾功能、导致慢性移植肾肾病的重要原因.     

多孔止血淀粉的制备及其生物相容性

背景：目前临床应用的能对实质脏器迅速止血并且对其功能无影响的止血材料仍存在止血速度慢、具有毒性及价格昂贵等缺陷。 目的：制备一种多孔止血淀粉，观察其在动物体内的生物相容性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008—03／04在解放军第三军医大学实验动物中心完成。 材料：甘薯淀粉在淀粉酶作用下水解，并经交联、表面活性处理后，制成多孔止血淀粉。 方法：健康KM小鼠60只随机分成实验组和对照组，每组30只。所有动物在右股划出长约1cm，深约0．5cm的条形切口，实验组将1g无菌多孔止血淀粉填入其中，对照组不填塞。 主要观察指标：埋植后2，4，6，8，14d，2组各取6只，观察一般状况，检测血常规、肝肾功能及体液免疫学指标，并观察局部组织形态学变化。 结果：制备的多孔止血淀粉为球径约15μm大小的白色球状颗粒，表面布满直径约为1μm的小孔．小孔由表面向中心深入，孔的容积占颗粒体积50％左右。实验组和对照组血生化和免疫学等指标无显著差异（P〉0．05），肝肾组织切片显示无明显炎症反应，手术区肌肉组织第2天有少量炎性细胞浸润．4d后无明显炎症反应，未见明显纤维细胞包膜。 结论：动物体内实验显示，多孔止血淀粉无急慢性毒性、无排斥反应、无免疫反应、无过敏反应，具有良好的生物相容性。     

Simulect 和 Zenapax 应用于肾移植诱导治疗的5年临床观察

目的评价2剂Simulect和5剂Zenapax在肾移植中诱导治疗预防急性排斥反应(AR)的有效性、安全性以及对近、远期人/肾存活的影响。方法选择1999年4月~2001年4月首次肾移植患者102例,分成Simulect组(54例)和Zenapax组(48例),在三联免疫抑制剂基础上(环孢素A/FK506、骁悉、皮质激素)加用Simulect(术前2h和术后第4天分别予20mg静滴)或Zenapax(1mg.kg-1.d-1,最大剂量100mg,首剂术前2h,此后每2周1剂,共5剂)。观察术后3个月内肾功、AR、移植肾功能延迟恢复(DGF)、急性肾小管坏死情况;术后5年内肾功、排斥反应、并发症及人/肾存活情况。结果术后3个月内AR发生率明显降低(Simulect组:14.8%;Zenapax组:14.6%);首次AR发生时间延迟;激素治疗对大部分AR有效;5年内再次排斥反应发生率为9.3%(Simulect组)和6.3%(Zenapax组)。术后肾功能恢复明显加快,早期及远期肾功能良好。未出现细胞因子释放综合征,仅2例DGF。5年内,感染、糖尿病、高脂血症、恶性肿瘤等未见增加。5年人/肾存活良好,均达95%以上。结论2剂Simulect和5剂Zenapax预防肾移植术后AR的效果好、安全性高,有利于早期肾功能恢复和远期人/肾存活。     

HVEM重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的HVEM突变体和EGFP共表达复制缺陷型腺病毒栽体的构建与鉴定。方法RT-PCR获得人HVEM的cDNA。使其与LIGHT分子结合的表位点突变,保留与BTLA结合的关键位点。构建经修饰的HVEM基因的复制缺陷型腺病毒载体Adv-mHVEM—IRES2。EGFP并对其进行鉴定和转染效率测定。结果成功构建HVEM突变体和EGFP复制缺陷型腺病毒载体,经过测序与预期一致。该载体能够表达突变的HVEM和EGFP蛋白,体外培养细胞转染效率达到95％以上。结论构建的腺病毒载体能够共表达目的基因的产物HVEM突变体和EGFP蛋白,对体外细胞具有高效转染能力。     

BTLA介导的负调共刺激信号对小鼠心脏移植受体Treg的影响

目的 探讨人疱疹病毒侵入介导因子(HVEM)基因突变体腺病毒载体对小鼠心脏移植受体Treg(调节性T细胞)的影响.方法 HVEM基因突变体腺病毒载体转染心脏移植物,行颈部异位心脏移植后观察其对受体小鼠Treg数量和功能的影响,并检测该腺病毒对供受体混合淋巴细胞培养体系中IL6和TGF-β的影响.结果 HVEM突变体腺病毒载体转染心脏移植物后对移植受体Treg数量有增加,功能有增强的作用,移植物存活时间较对照组显著延长;该腺病毒处理供受体混合淋巴细胞培养体系后,培养上清液中IL-6的表达较对照组显著上调.结论 HVEM突变体腺病毒载体在延长小鼠心脏移植物存活同时提高受体Treg的数量,并显著上调了其相关细胞因子的表达,提示HVEM-BTLA通路通过干预受体Treg功能是延长移植物存活的可能机制.