负载供肾抗原的致耐受性树突状细胞延长大鼠移植肾存活时间

目的探讨负载供肾抗原的致耐受性受者树突状细胞(DCs)对移植肾存活时间的影响。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,Wistar大鼠为无关供者。将受者的骨髓分离培养,未经其它处理得到的DCs,将其作为DCs1;DCs1经CTLA-4Ig基因重组的复制缺陷型腺病毒(AdvCTLA-4Ig)转染后作为DCs2;DCs1先经BN大鼠供肾抗原负载后再进行AdvCTLA-4Ig转染,作为DCs3。将受者随机分为DCs1、DCs2、DCs3及对照组,每组6只。术前24h,前3组分别注入1×106个DCs1、DCs2和DCs3,对照组不注射DCs。肾移植后观察各组移植肾存活时间,术后第20d检测受者脾细胞对负载供肾抗原及无关供者肾脏抗原DCs的反应。结果DCs1、DCs2,DCs3和对照组的移植肾存活时间分别为(8.1±0.8)d、(8.8±0.9)d、(62.1±13.7)d和(8.6±0.9)d。DCs1、DCs2组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),DCs3组与对照组比较,移植肾存活时间显著延长(P<0.01)。肾移植术后,DCs3组脾细胞对负载供肾抗原的DCs反应明显低于对照组(P<0.01),而对负载无关供者抗原的DCs反应与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论负载供肾抗原的受者DCs经CTLA-4Ig基因修饰后具有致耐受性,可以抑制受者对供者抗原的免疫反应,明显延长移植肾的存活时间。     

口服供体脾细胞对大鼠移植肾的影响

背景：口服供体抗原诱导免疫耐受已被证实有显著效果,而脾脏为人体最大淋巴器官,富含T淋巴细胞,可提供丰富抗原。 目的：观察口服供体脾细胞对大鼠肾移植移植肾功能影响。 方法：肾移植前脾细胞组Lewis (RT11)大鼠采取口服灌胃5×105个BN (RT1n)大鼠供体脾细胞,1次/d,持续7 d;肾移植组Lewis (RT11)大鼠口服灌胃1 mL PBS为对照。 结果与结论：移植后第5天肾移植组出现移植肾排斥症状,脾细胞组平均存活时间长于肾移植组,移植后脾细胞组血肌酐、尿素氮水平升高明显慢于肾移植组;苏木精-伊红染色显示肾移植组移植肾发生急性排斥变化早于脾细胞组。说明口服供体脾细胞能诱导免疫耐受,延长移植肾存活时间。     

植物性胶黏剂的黏附性及生物相容性

背景：前期研究将从植物中提取的原材料加工制备出了一种黏性较强的可吸收性局部止血胶黏剂。 目的：检测局部止血的植物性胶黏剂对肾脏组织的黏附力,并检测其组织相容性。 方法：将不同浓度的植物性胶黏剂均匀涂抹在家兔肾脏表面,检测同一浓度在双侧肾脏不同部位的黏附力。将KM小鼠分为：实验组在大腿肌群切口内填入植物性胶黏剂,对照组切口未加入胶黏剂。 结果与结论：不同浓度的植物性胶黏剂有不同黏附力,1 g植物性胶黏剂粉末中加入0.6 mL蒸馏水组呈较浓糊状,且黏附力高。将胶黏剂埋植入小鼠体内后,皮肤切口愈合良好,实验组和对照组小鼠血生化、免疫学检测差异无显著性意义(P > 0.05),实验组小鼠手术区肌肉、肝脏和肾脏组织标本苏木精-伊红染色无明显炎症反应。表明植物性胶黏剂有良好的黏附性和组织相容性。     

肾移植受者活动性CMV感染的发生状况

目的明确肾移植患者术前CMV感染的发生率和术后活动性CMV感染的发生规律.方法检测27例健康成人、以及我院2002年3月至2003年6月138例尿毒症患者肾移植前血清抗CMV抗体(抗CMV-IgG、CMV-IgM);观察肾移植后CMV-pp65抗原血症的动态变化.结果27例健康成人血清抗CMV-IgM均为阴性、抗CMV-IgG的阳性率为70.4%、外周血CMV-pp65( )白细胞数为0～4个/5×10 4 WBC;尿毒症患者术前CMV-IgG、CMV-IgM阳性率分别为93.5%、7.1%,肾移植后外周血CMV-pp65( )白细胞数为0～2 280个/5×10 4 WBC(其中＞5者占87.0%)、其高峰期在术后第6～8周.结论肾移植受者术前CMV感染发生率明显高于健康人群,且至少有7.1%存在着活动性CMV感染;肾移植患者术后6个月内,活动性CMV感染发生率高达86.96%;术后第6～8周是活动性CMV感染最严重的时期.     

Foxp3转染对大鼠CD4~+T淋巴细胞体外增殖能力的影响

目的 探讨Foxp3基凶转染对大鼠CD4+CD25-T淋巴细胞体外增殖能力的影响.方法 以逆转录病毒载体介导roxp3基凶进入大鼠CD4+CD25-T淋巴细胞,以TGFβ诱导Foxp3基因表达.通过观察报告基因的表达水平及流式细胞仪检测评价转染效率,将转染Foxp3基因的大鼠CD4+CD25-T淋巴细胞、CD4+CD25+T淋巴细胞、大鼠脾脏单个核细胞分别与同系大鼠单个核细胞混合培养,液体闪烁法测定各组细胞增殖水平.结果 Foxp3组增殖水平(3 354.18±203.73)略高于调节性T细胞组(2 919.25 ±137.91),但明显低于空白对照组(12 706.06±967.47).结论 经逆转录病毒介导Foxp3基因可在CD4+CD25-T淋巴细胞高表达,并使该细胞获得与CD4+CD25+T淋巴细胞相似的免疫无能及免疫抑制特性.     

小鼠异位心脏移植模型的改良

目的探讨小鼠心脏移植模型的建立与改良。方法供体采用BLAB／c小鼠，受体采用C57小鼠。用24GACuff管法套扎供心肺动脉与颈外静脉，用自制Cuff管套扎供心升主动脉与颈总动脉。结果供心冷缺血时间少于15min，手术时间大大缩短，成功率明显提高。结论改进后的模型显著降低了手术难度，可用于移植免疫的各种研究。     

供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞对肾移植大鼠免疫状态的影响

目的 研究供体抗原特异性CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)对肾移植后大鼠免疫状态的影响.方法 常规分离Lewis和F344大鼠脾脏淋巴细胞,然后将Lewis大鼠淋巴细胞负载F344大鼠抗原,然后从负载抗原后的Lewis大鼠淋巴细胞悬液中用MACS磁珠分选法分离纯化供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞,并用流式检测分选Treg细胞纯度以及RT-PCR检测分选细胞的Foxp3基因表达.以F344、Lewis大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植动物模型,将供体抗原特异性Treg细胞经尾静脉注射入受者体内(治疗组,n=8),选取未注射组为对照组(n=8).于术前1d,术后15d检测移植后4组大鼠血清IL-10、IgG,并于术后15d MTT法检测受体脾细胞对供体抗原刺激的反应.结果 所分选之CD4 CD25 Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%,并检测到Foxp3表达.移植前治疗组和对照组大鼠血清中均无法检测到IL-10浓度.术后15d治疗组血清IL-10与对照组比较,明显增高(P＜0.01).对照组在术后15d血清IgG浓度已经显著升高,较术前差异有统计学意义(P＜0.05).而治疗组术后15d血清IgG浓度与术前相比有所降低,与术前相比差异无统计学意义(P》0.05),但与对照组相比较均差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组对供体脾细胞的刺激反应也明显低于Ⅰ组(P＜0.01).结论 供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞能显著促进体内IL-10的产生以及抑制免疫球蛋白IgG的产生,并且可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应.     

减少钙调素抑制剂改善移植肾功能

目的:了解减少或停用钙调素抑制剂能否改善肾移植后慢性移植物肾病(CAN)患者的肾功能。方法:1999年1月-2001年6月期间,将病理诊断为CAN(I级)肾功不全的96例肾移植患者随机分为A、B二组。A组(52例):在1~2周内将其钙调素抑制剂(CNI)减少至原剂量的三分之一或完全停用,同时适当增加硫唑嘌呤或霉酚酸酯的用量;B组(44例):CNI未作大幅度减量,仅适当增加硫唑嘌呤或霉酚酸酯的用量。对两组患者进行至少3年的随访,比较其移植肾功能、观察两组急性排斥反应有无差异等。结果:3年后A组有32例(61.8%)患者移植肾功能得以好转或不再继续恶化,而B组除4例(9.1%)移植肾功能维持在原有水平外,其他患者肾功能均进行性恶化。两组急性排斥反应发生率差异无显著性。结论:大幅度减少甚至停用钙调素抑制剂可使部分肾移植后慢性移植物肾病患者的肾功能得以改善或者防止其进行性恶化。这种药物调整是安全的。     

人ICOS胞外区腺病毒载体的构建与鉴定

目的利用细菌内同源重组法构建含ICOS胞外区基因的重组腺病毒。方法用基因工程的方法将ICOS胞外区的cDNA片段插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdtrack-cmv-ICOS,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,同源重组质粒PacⅠ酶切鉴定后用脂质体转染293细胞,包装成重组体腺病毒颗粒Ad-ICOS。采用PCR方法对重组腺病毒颗粒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测。通过Western Blot检测重组腺病毒感染后的293细胞上清中的ICOS胞外区蛋白。结果获得了重组人ICOS胞外区腺病毒载体颗粒。PCR检测表明重组腺病毒颗粒含有目的基因,滴度为2.1×1010pfu/ml。Western Blot检测到阳性目的条带。结论细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所制备的重组体腺病毒Ad-ICOS在体外能有效表达相应的基因产物,为今后对ICOS胞外区的深入研究奠定了基础。     

霉酚酸对致耐受性树突状细胞延长移植肾存活效应的影响

目的探讨霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对致耐受性树突状细胞(dendritic cells,DC)延长移植肾存活效应的影响。方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;在供体DC培养过程中加入3种浓度MPA,以CTLA-4Ig基因转染DC使之成为表达CTLA-4Ig的致耐受DC;观察DC形态变化并检测受体脾细胞对上述DC的刺激反应。将未处理的致耐受DC以及0.05μmol/L MPA处理DC于肾移植前72h分别注入受体(组1、组2),注入供体DC的受体为组3,未注入DC的受体为对照(组4),观察受体血肌酐变化和移植肾存活时间。结果MPA组DC形态老化延缓,脾细胞对3种浓度MPA处理的DC刺激反应均显著低于对未经MPA处理致耐受DC的刺激反应;与对照相比,组1、组2移植肾存活时间显著延长,差异有统计学意义(P<0.01),其中组2延长更为明显〔(81.1±14.6)d vs(8.9±0.8)d,P<0.001〕,组3存活时间显著缩短(5.3±0.6d,P<0.05)。术后45d后组2血肌酐水平明显低于组1。结论MPA预处理可降低致耐受DC的抗原提呈能力,提高其延长移植肾存活的效能。