蛋白质组学技术及其在肿瘤转移相关蛋白筛选中的应用

转移是恶性肿瘤的重要生物学行为，肿瘤转移过程的发生是多步骤、多因素、多基因共同参与的复杂病理过程。包括转移相关基因的突变、激活，肿瘤细胞的黏附、迁移、增殖，细胞外基质降解，组织免疫性及肿瘤血管增生因子等的变化并通过细胞基因表达调控机制的调节发生作用，最终由功能性蛋白表达来完成。近年来，蛋白质组学技术的应用和飞速发展，为生命活动的执行者一蛋白质的研究带来了广阔的前景。蛋白质组（proteome）是指细胞或组织在特定时间和空间上表达的基因组编码的全部蛋白质，蛋白质组学（proteomics）是研究细胞内全部蛋白质的组成和动态变化的一门新兴学科。     

反义寡核苷酸对Daudi细胞α2,6唾液酸的下调作用研究

 目的　研究反义寡核苷酸对Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞α2 ,6 唾液酸转移酶 (ST6GalI)的活性和细胞表面α2 ,6 唾液酸水平的下调作用。方法　以修饰后的ST6GalI的反义寡核苷酸处理Daudi细胞 ,以RT PCR检测Daudi细胞ST6GalImRNA的表达 ,荧光定量法测定ST6GalI的活性及以流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6 唾液酸的含量。结果　和对照组比较 ,以反义寡核苷酸处理的Daudi细胞ST6GalImRNA的表达下调 ,ST6GalI酶活性下降 ,并导致细胞表面α2 ,6 唾液酸水平降低。结论　反义寡核苷酸可有效降低Daudi细胞表面α2 ,6 唾液酸化水平 ,内源性减少α2 ,6 唾液酸对Daudi细胞CD2 2受体的屏蔽作用     

大肠癌组织paxillin mRNA表达及其临床病理意义

目的 检测桩蛋白(paxillin)mRNA在大肠癌及癌旁正常组织中的表达,并探讨其在大肠癌发生发展中的临床病理意义.方法 采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)检测41例大肠癌及癌旁正常组织中paxillin mRNA的表达.结果 paxiln mRNA在大肠癌组织中表达较高,而在癌旁正常组织中表达较低(P=0.000);有淋巴结转移者较无转移者paxillin mRNA表达高(P=0.000);癌组织浸润程度越深paxillin mRNA表达越高(P=0.007).结论 paxillin与大肠癌的浸润转移有关,可作为大肠癌发生、发展的预测指标之一.     

硬化性纤维母细胞瘤的研究现状

硬化性纤维母细胞瘤（desmoplastic fibroblastoma，DF），是一种罕见、良性、缓慢生长的纤维母细胞／肌纤维母细胞性软组织肿瘤，2002年在世界卫生组织（WHO）的肿瘤分类中列为良性纤维母细胞肿瘤／肌纤维母细胞性肿瘤。该病自1995年被EVANS首次命名，1年后被Nielsen重新命名为胶原纤维瘤（collagenous fibroma）。目前．国内外已有34篇关于DF共130例病例的文献报道，其中多数为个案或少数病例报道，仅有1篇文献为大宗病例的研究。现结合相关文献进行复习，从其临床特点、影像学特征、病理组织大体及组织学形态、超微结构、免疫表型、细胞遗传学、鉴别诊断及治疗方式等方面作一综述。     

踝蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

目的：检测踝蛋白（talin）在大肠癌组织中的表达及分布，并探讨其与大肠癌癌变、浸润、转移和分化等临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫荧光结合激光共聚焦扫描显微镜技术对41例配对大肠正常粘膜组织和原发大肠癌组织，以及19例区域淋巴结转移癌组织中的talin表达水平进行定量检测，并进行统计学分析。结果：talin蛋白主要位于胞质及胞膜，在正常粘膜组织及癌组织中均有分布。大肠正常粘膜组织中talin的表达水平明显高于大肠原发癌组织，经两相关样本检验，两者表达水平有非常显著性差异（P=0．000）。区域淋巴结转移癌组织与原发大肠癌组织相比较，其talin表达水平更加降低，经两独立样本检验，两者有非常显著性差异（P=0．000）；有淋巴结转移的大肠癌组织中talin表达水平明显低于无淋巴结转移的癌组织中talin表达，经两独立样本检验．两者有非常显著性差异（P=0．000）；肠壁浸润程度较深的大肠癌组织中talin表达水平明显低于浸润程度较浅的大肠癌组织，经两独立样本检验，两者有非常显著性差异（P=0．002），即talin表达水平与大肠癌浸润肠壁深度呈负相关；talin表达水平与大肠癌分化无相关性，经多独立样本检验，低、中及高分化大肠癌组织中talin表达水平无显著性差异（P=0．153）。结论：talin与大肠癌的癌变、浸润和转移有关．而与大肠癌的分化程度无明显相关性，talin可作为大肠癌发生、发展的预测指标之一。     

ED-L2-LMPl-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建及鏊定EB病毒LMPl基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体.方法 应用DNA重组技术,将EB病毒ED-L2启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上,筛选阳性克隆,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后,以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV△8.9、包膜基因VSVG和带目的 基因ED-L2-LMP1-EGFP载体共同转染到293FT包装细胞内包装病毒,荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况,收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度.PCR和免疫组化鉴定LMP1表达.结果 融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782 bp的ED-L2和1 300 bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒栽体中.转染重组ED-L2-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光;对该细胞PCR可以扩增出404 bp大小的LMP1基因片段和370 bp的EGFP基因片断;免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性.结论 成功构建了ED-L2-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体,为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础.     

留学生病理学实习课教学实践

在教学中教师要结合病理学实习课和留学生的特点，加强语言交流能力，尤其是医学英语的表达能力，建立良好的师生感情．是留学生教学取得成功的关键.     

阴阳莲提取物3,4'',5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖苷对人大肠癌细胞系的体外效应

目的:研究蓼科植物阴阳莲提取物3,4',5-三羟基芪-β-单-D-葡萄糖苷(3,4,5,-trihydroxystibene-3-β-mono-D-glucoside,THMG)对大肠癌细胞的体外生长特性、粘附性及浸润力的影响;从细胞层次探讨THMG抗转移作用的基本环节.方法:检测4种大肠癌细胞(HR8348,Hce8693,HT29,LoVo)在THMG0.4mmol/L,0.8mmol/L,1.6mmol/L,3.2mmol/L等浓度作用下的存活率、生长曲线、粘附率及浸润力.结果:在实验浓度下,THMG对4种大肠癌细胞的存活率、生长曲线无显著影响(P>0.05),在3.2mmol/L浓度时对高转移性的LoVo细胞的粘附抑制率为68.09%,浸润抑制率为89.95%,对低转移性的HT29细胞粘附抑制率为78.75%、浸润抑制率为93.31%,且随着浓度加大,粘附和浸润抑制率提高.结论:THMG可能通过抑制癌细胞粘附性和浸润力,发挥抗转移效应.     

C8orf4基因在大肠癌中的表达

目的：筛查大肠癌分化相关分子标志物。方法：应用美国Affymetrix HG-U133寡核苷酸芯片对不同分化程度大肠癌组织和正常大肠黏膜组织的基因表达谱进行检测。采用肿瘤样品分类法（T-class）对各样品进行基因分类。并应用实时荧光定量RT-PCR检测候选基因在不同分化程度大肠癌中的差异表达。结果：T-class分析获得分类精度100%的大肠癌分化差异表达基因＆ ESTs 8个。其中C8orf4基因（chromosome 8 open reading frame 4）经非多元统计分析，在大肠癌组较正常黏膜表达下调。实时荧光定量RT-PCR检测该基因在不同分化程度大肠癌组间表达，其标准化表达值与基因芯片该基因探针组信号值相关性分析，呈线性相关。两种方法检测C8orf4基因在不同分化程度大肠癌组表达趋势相符。结论：C8orf4基因与大肠癌分化密切相关，可作为大肠癌分化的候选分子标志物。     

临床细胞病理学教学设计与实施

从确定教学目标、课程设置、编写讲义、收集教学涂片及实习课安排等方面对新开课程临床细胞病理学进行了教学设计,并探讨了实施策略和体会.