短发夹状RNA对PC-3M细胞端粒酶逆转录酶基因表达和端粒酶活性的影响

目的:研究短发夹状RNA(shRNA)对PC 3M细胞中端粒酶逆转录酶(hTRT)基因表达及端粒酶活 性的影响。方法:构建针对hTRT基因的shRNA表达质粒psilencer TRT,在质脂体介导下转染人前列腺癌PC 3M细胞,应用RT PCR及免疫组织化学检测hTRTmRNA及蛋白表达水平,应用SYBR Green染色法检测端粒 酶活性的变化。结果:重组体psilencer TRT转染细胞24h和48h后显著下调hTRTmRNA及蛋白水平,作用 48h后,其抑制率分别为85.39%和79.17%,较空白对照组差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着时间的延 长,端粒酶活性亦有明显下降(P<0.01)。结论:利用短发夹状RNA干扰技术能有效抑制靶基因的表达,为前 列腺癌的基因治疗提供新思路。     

风疹病毒感染的临床应用研究

风疹病毒属于披膜病毒科风疹病毒属。该病毒为正链单股RNA病毒，其主要结构蛋白为E1、E2和C蛋白。E1和E2在病毒外膜为糖蛋自，是主要的保护性抗原，C为核蛋白。风疹病毒呈世界性分布，人是其重要宿主，妊娠早期感染，可能导致流产或胎儿畸形等，因此近年来被受优生研究者和临床学者的关注和重视。     

MicroRNAs及其在泌尿系肿瘤的研究进展

microRNAs（miRNAs）是一类分布十分广泛的内源性非编码RNA,在动物、植物、病毒中广泛存在。miRNAs与肿瘤的发生发展预后有关,并在肿瘤的增殖、分化及调亡等方面有重要的作用。结合最近相关文献,本文就miRNAs与泌尿系肿瘤方面的进展作简要概述。     

痔动脉结扎加痔上黏膜注吊外剥术治疗环状混合痔的临床观察

目的:探讨痔动脉结扎加痔上黏膜注吊外剥术治疗环状混合痔的临床疗效.方法:将80例环状混合痔分为两组.治疗组40例,采用痔动脉结扎加痔上黏膜注吊外剥术;对照组40例,采用传统外剥内扎术.术后观察创面愈合时间及并发症情况,术后均随访2年.结果:治疗组在术后疗效、愈合时间、术后并发症的发生率均优于对照组.结论:痔动脉结扎加痔上黏膜注吊外剥术不损伤齿线,能维持肛垫正常位置,降低了术后并发症的发生率,是治疗环状混合痔合理有效的术式.     

外剥内扎+内括约肌部分离断治疗环状混合痔20例分析

近年来，对肛肠疾病的诊断和治疗手段有了很大的发展。目前治疗环状混合痔首选的方法是PPH（痔上黏膜环切）术。但由于该手术费用昂贵，很大程度上限制了它的进一步推广普及，特别是在基层医院的推广普及。因而在很长一段时期内，外剥内扎仍然是治疗环状混合痔的主要术式。     

指屈肌腱滑车重建术

指屈肌腱腱鞘内含5个环状滑车，4个交叉滑车，约束指屈肌腱紧贴指骨掌面及指间关节屈伸运动轴滑动，确保手指关节能充分屈曲。其中，第2环状滑车（简称A2）作用最突出，其次是第4环状滑车（简称A4）。滑车损伤可致指屈肌腱远离指骨、绷起呈“弓弦”状，手指屈伸运动功能障碍，指间关节屈曲挛缩，需要修复与重建。     

靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的RNA干涉(RNAi)技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U251的EGFR表达后,在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA(shRNA)表达载体psiRNA-2400的构建,并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平,应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达,MTT法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68%;与对照组和psiRNA-scr转染组比较,细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G_0～G_1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.7%～13%,而进入G_2期细胞则增加了10.5%～11.7%。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长,而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达,在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此,shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。     

siRNA联合顺铂抑制骨肉瘤细胞增殖的研究

目的构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用。方法应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。半定量PCR和免疫荧光染色分别检测Survivin mRNA与蛋白的水平变化。Annexin V法检测细胞凋亡。MTT法检测顺铂对细胞的杀伤作用。结果构建Survivin基因siRNA真核表达载体PsiS。获得了稳定转染的细胞系。与MG63、阴性对照细胞比较,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓。MG63/PsiS细胞中Survivin的mRNA及蛋白表达明显减少。MG63/PsiS凋亡率增加为17.8%(P<0.01)。1 mg/L顺铂作用下,MG63/PsiS死亡率是其他各组的2.3倍(P<0.01)。结论特异性siRNA能够明显阻断Survivin基因的表达促进MG63细胞凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性。     

改良外剥内扎术治疗老年环状混合痔75例临床观察

目的总结改良外剥内扎术治疗老年环状混合痔的临床经验。方法对75例行改良外剥内扎术治疗老年环状混合痔患者资料进行回顾分析。结果术后75例在13～19天痊愈出院，平均16天，无1例肛门出现狭窄，失禁，黏液溢出，大出血等症状。结论改良外剥内扎术治疗老年混合痔，具有疗效好、创伤小、痛苦小、并发症和后遗症少等优点。