SARS冠状病毒致多器官感染的在体研究

目的　研究体内SARS冠状病毒(SARS CV)感染的靶细胞 ,为SARS CV致多器官损伤寻找依据。方法　依据SARS CV基因序列 ,合成 3个代表性寡核苷酸探针 ,采用核酸原位杂交和透射电镜观察相结合的方法 ,对 2例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例进行系统的SARS CV定位、分布及数量研究。结果　SARS病例多器官组织细胞中观测到SARS CV。肺组织内SARS CV主要位于终末细支气管黏膜上皮 ,Ⅰ、Ⅱ型肺泡上皮 ,部分巨噬细胞和毛细血管内皮细胞及个别淋巴细胞胞质内 ,原位杂交示呈全浆型或包涵体型分布 ,肺组织内平均阳性细胞数为每个 2 0 0倍视野 80± 2 5个 ;电镜下病毒颗粒大小为 10 0～ 15 0nm ,低电子密度核心 ,日晕或花环状包膜 ;肾组织内大约 15 %肾小管上皮细胞呈SARS CV阳性 ,以髓质较多 ,肾上腺组织内少部分实质细胞及窦状毛细血管内皮细胞内呈阳性杂交信号 ;胃、肠黏膜上皮及腺上皮细胞内检测到SARS CV颗粒 ,其中浅表 2 / 3黏膜检出率较高 ;电镜下少数心肌细胞内可见较多SARS CV颗粒 ,原位杂交示阳性心肌细胞呈灶性分布 ;胸、腹腔淋巴结内组织细胞 ,窦内皮细胞及极少数淋巴细胞内见SARS CV ;此外 ,少数睾丸曲细精管上皮及间质细胞内检测到SARS CV。结论　SARS CV在体内存在多种靶细胞 ,SARS CV可致以肺脏为     

噬菌体表面展示技术筛选乙型肝炎病毒前S1蛋白结合蛋白基因

目的 以乙型肝炎病毒(HBV)前s1蛋白为靶蛋白，寻找其相应的结合蛋白。方法 应用T7 cDNA文库噬菌体展示技术克隆与前s1蛋白具有结合作用的蛋白序列，命名为前s1结合蛋白(PreS1BP)。将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索，自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列。结果 初步确定PreS1BP即为神经胶质瘤抑制基因区候选基因2(GLTSCR2)，cDNA长为1436核苷酸，基因位于第19号染色体长臂13.3区(19q13.3)，长度11445碱基对(bp)，位于19号染色体10403483～10414989，PreS1BP基因含有13个外显子，具有12个内含子。结论 应用T7 cDNA文库噬菌体展示技术和生物信息学方法获得了HBV PreS1BP基因。     

院内感染监测管理系统在医院信息管理中的应用

医院计算机网络管理系统的建立与完善是信息化医院管理的必然结果,医院院内感染监测管理系统是我院自主研发的管理系统,是我院计算机应用步入整体性医院信息管理阶段的标志之一。该系统基于网络环境,实现了感染管理、登记、相关因素统计等监测项目所需的各种功能^[1]。系统的开发和应用,不仅能够对医院感染相关因素进行主动、连续、系统的监测分析,更为感染控制专职人员提供了极大的便利,提高了医院院内感染的管理水平^[2]。     

拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒多聚酶区基因突变的检测分析

目的建立以基因测序检测乙型肝炎病毒（HBV）多聚酶区基因突变的方法，并分析拉米夫定耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况。方法采用巢式PCR方法对174例拉米夫定耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增，对PCR产物进行直接测序，将YMDD突变阳性与阴性的病例分别进行HBV耐药基因突变的分析和比较。结果本研究154例YMDD突变阳性的患者中有10种突变类型，其中以rtM204I突变最多见，为46例（29．9％），其次为rtL180M／M204V（26．6％）、rtL180M／M204I（17．5％）、rtV173／L180M／M204V（13．0％）、rtM204V（2．6％）、rtL180M／M204V／M204I（5．8％）、rtV173L／L180M／M204V／M204I（1．3％）、rtV173L／M204IrtM204I／M204V（1．3％）、rtM204I／M204V（1．3％）。另外，rtM204V联合rtL180M或rtV173L的突变率较rtM204I联合rtL180M或rtV173L显著增高。从rtL180M突变角度来看，rtL180M与rtM204V的联合突变率最高，其次为rtL180M联合rtM204I突变，rtL180M与rtL173M的联合突变率最低。从rtV173L突变角度来看，rtV173L联合rtM204V或rtL180M突变的发生率均高于rtV173L联合rtM204I的突变率，且rtV173L突变多联合rtM204V和rtL180M突变同时发生。结论拉米夫定耐药株的氨基酸突变复杂多样，需要对拉米夫定耐药多个相关位点进行检测。     

乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白基因的筛选

目的 筛选并克隆人肝细胞中与乙型肝炎病毒前S2蛋白（HBVPreS2)相互作用的蛋白质基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）技术扩增HBVPreS2基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，PCR从中扩增出目的片段并测序，进行生物信息学分析。结果 成功克隆出HBVPreS2基因并在酵母细胞中表达，配合后选出既能在4缺（SD/-Trp-Leu-SAde-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖（X-α-gal)的4缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个，其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有12个，细胞色素C氧化酶Ⅱ有1个，细胞色素P450IVF亚基2个，细胞色素C氧化酶Ⅳ亚基同功酶1有2个，人血白蛋白3个，Na^ -K^ ATP的β1亚基1个，前清蛋白2个，植物血凝素半乳糖苷结合亚基1个，未知基因2个，结论 成功克隆出HBVPreS2蛋白的结合蛋白，为进一步研究HBVPreS2的作用提供了新线索。     

裸露DNA经胆道分支导入活体肝脏的局部表达

目的 经胆道分支逆行导入裸露DNA,观察目的基因在正常及急性损害大鼠局部肝脏的定量和定位表达.方法 运用D-氨基半乳糖制作大鼠急性肝损害模型;经胆管分支将Cy3荧光标记CMV β质粒通过胆道分支逆行导入局部肝脏,观察裸露DNA导入肝脏的情况.同时运用包含萤火虫荧光素基因质粒pGL3及包含大肠埃希氏菌β半乳糖苷酶基因质粒pCMV β逆行导入大鼠局部肝脏,定量检测荧光素酶和定位检测β半乳糖苷酶在肝脏的表达.应用非参数Kruskal-Wallis法秩和检验进行统计分析.结果 肝组织冰冻切片观察到Cy3荧光标记DNA在汇管区附近聚集.按100 μg/ml浓度进行基因导入,荧光素酶基因在正常大鼠肝脏,急性损害大鼠肝脏均有显著表达.大肠埃希氏菌β半乳糖苷酶定位检测结果显示正常大鼠肝脏及急性肝损害大鼠肝脏内有β半乳糖苷酶显著表达,并可见较多肝细胞表达β半乳糖苷酶. 结论 裸露DNA经胆道逆行导入正常及急性损害肝脏局部能获得较好表达,且无明显加重肝脏损害,该项方法为肝脏基因治疗的实验研究提供了良好的技术平台.     

熊去氧胆酸联合复方茵陈注射液治疗胆汁性肝硬化的效果及成本分析

目的 研究熊去氧胆酸联合复方茵陈注射液治疗原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）的临床疗效及所产生的成本.方法 86例原发性胆汁性肝硬化患者,分成单纯熊去氧胆酸（UDCA,13～15 mg·kg^-1·d^-1）组（56例）、熊去氧胆酸联合复方茵陈注射液组（30例）,疗程4周.治疗前、治疗后1、2、4周分别复查肝功能.采用配对设计t检验方法进行统计学分析.运用药物经济学成本-效果分析方法对这86例PBC的2种治疗方案在降黄效果方面进行回顾性分析评价.结果 86例患者治疗前主要表现为血清总胆红素（TBiL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）呈轻、中度升高.治疗后两组病例ALT、AST、TBiL指标均明显降低,但联合治疗组的上述指标下降时间比UDCA组快.结论 单纯UDCA治疗组及联合治疗组肝功能均有好转,但后者好转更迅速,变化更明显.     

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(core promoter)结合蛋白，为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体表面展示技术，以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子，对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程，经噬斑的PCR扩增后，构建克隆载体，最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果 噬菌体经富集后，从随机筛选的20个克隆中得到6个阳性克隆，成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索，确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白——羧肽酶N(CPN)。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白，分析了该蛋白的编码基因，为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径。     

中国北方汉族人原发性胆汁性肝硬变与HLA-DRB基因相关性的初步研究?

目的:初步探讨中国北方汉族人群原发性胆汁性肝硬变(PBC)患者与人类白细胞抗原(HLA)-DRB等位基因的相关性.方法:利用基因芯片技术对40例中国北方汉族PBC患者和67例健康对照人群进行了HLA-DRB等位基因的分型检测.两组年龄构成和男、女比例均无统计学差异.结果:本组PBC患者中HLA-DR7的出现频率为50%,远高于健康对照组的10.4%(χ2=20.77,P=0.000,RR=8.57),同时也高于文献报道的两组中国北方健康人群中的出现频率[分别为23.2%(N=342, P=0.000)和29%(N=255, P=0.008)].本组PBC患者中HLA-DR8的检出率为22.5%,明显高于健康对照组的7.5%(χ2=4.980,P=0.026,RR=3.60),同时也高于文献报道的两组中国北方健康人群中的出现频率[11.2%(N=342,P=0.038)和10.2%(N=255,P=0.025)].结论:HLA-DR7和DR8基因可能与中国北方人群的PBC发病有一定的相关性,其中DR7在国外文献中尚未见报道.     

白头翁药材中白头翁皂苷B4的测定

目的 建立测定白头翁药材中白头翁皂苷B4的方法.方法 比较回流法和药典超声提取法对白头翁药材中的白头翁皂苷B4的提取效果,筛选白头翁的最佳回流提取工艺.结果 白头翁的最佳提取工艺为90％甲醇8倍量,回流提取3次,1.0 h/次.在选定色谱条件下,白头翁皂苷B4在15.31～459.36μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为99.46％,RSD为0.98％(n=6).结论 该方法简便易行,可用于白头翁药材中白头翁皂苷B4的测定.