IL-6诱导血管内皮细胞纤溶相关蛋白的表达

目的:观察IL-6对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响.方法:用生长良好的第2、3代HUVECs细胞进行实验,用CCK-8测定IL-6(0.125、0.25、0.5、1.2 ng/ml)作用前后细胞活性;用发色底物法测定0.5 ng/ml IL-6组和对照组(不加IL-6)培养上清液中tPA、PAI-1活性;进一步用RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平.结果:与对照组相比, IL-6(≤0.5 ng/ml)对细胞增殖活性的影响无差异性.0.5 ng/ml IL-6组tPA活性在12～72 h显著升高(P<0.05),且显著上调tPA mRNA,12 h达到峰值,以后渐降,48 h mRNA达正常水平.而IL-6组PAI-1活性与PAI-1 mRNA表达与对照组无差异性.结论: IL-6可活化内皮细胞,显著上调HUVECs的tPA mRNA的转录和tPA分泌,诱发纤溶系统活化,而对PAI-1 mRNA或PAI-1活性无影响.IL-6的这种效应在炎症反应的病理生理过程中可能发挥重要作用.     

HCV CE2融合蛋白在家蚕培养细胞、蚕幼虫中的表达及其初步应用

目的:高效表达HCV CE2融合蛋白并进行初步应用. 方法:将2a型HCV全长CE2基因的cDNA重组于质粒pBacPAK8,构建重组转移载体pBacPAK-CE2,与经线性化修饰的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)DNA共转染家蚕培养细胞株,构建重组病毒. 双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组中目的片段的表达. 重组病毒感染BmN细胞株及五龄家蚕幼虫后,SDS-PAGE分析细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,HCV CE2融合蛋白的特异性条带. 并用间接ELISA法初步检测表达产物的生物活性. 结果:双酶切及PCR鉴定重组病毒基因组含有约1.6 kb的目的片段,重组病毒感染后的BmN细胞培养上清、细胞抽提物及幼虫体液样品中,均可见一Mr约90×103的特异性条带;用间接ELISA检测证明表达产物具有较好的免疫原性. 结论:HCV CE2融合基因在家蚕培养细胞及蚕幼虫中获得了高效表达,并具有生物活性,为进一步进行疫苗的研究及临床诊断试剂的开发奠定基础.     

知母皂苷BⅡ对Aβ_(25-35)诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用

目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及AChE(乙酰胆碱酯酶)活力。结果知母皂苷BⅡ10-4、10-5mol.L-1能明显增强Aβ25-35(20μmol.L-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用。结论知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关。     

HBsAg结合胰腺细胞蛋白基因的酵母双杂交技术筛选

目的 应用酵母双杂交技术筛选胰腺细胞cDNA文库中与HBsAg相互作用的结合蛋白的基因.方法扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,将其转人酵母菌Y187;诱饵质粒PGBKT7-HBSAg转入酵母菌AH109.将以上二者进行配合,在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade和X-a-Gal培养基上进行双重菌落筛选;提取阳性质粒转化大肠埃希菌DH5a并测序,在GenBank中进行生物信息学分析.结果 获得了6个与HBsAg相结合的蛋白,包括顺乌头酸酶、CDK5RAP3、羧肽酶B1、胰脂肪酶、辅脂肪酶、弹性蛋白酶.结论 筛选出的胰腺细胞蛋白与2型糖尿病等代谢性疾病有较密切关系,为进一步研究并阐明乙肝病毒(HBV)感染引发糖脂代谢紊乱机制提供了新的思路.     

视频导入式-任务驱动法在医学微生物学教学中的应用

公共卫生事件的跟踪调查新闻、纪录片、公益广告和公益歌曲等微生物学相关的视频资料可形象生动地展示知识点。采用与此相关的视频导入学习任务可有效驱动和提高学生的学习兴趣和学生的自主学习能力。本文从适用范围、实施过程要素及注意事项等多方面介绍了"视频导入式-任务驱动法"在医学微生物学教学中的应用情况,以期为提高医学微生物学的教学效果提供参考。     

改良式手工手术缝合法的应用

外科手术缝合是手术中重要的基本操作技术,是将已切开或外伤断裂的组织、器官等进行对合.随着科学的发展,临床上常使用吻合器,但吻合器易发生故障,缝合不全可导致一些严重并发症,且人体复杂的解剖结构,不允许每个手术部位都可以使用吻合器,故在临床上有很大的局限性[1-2].因此,临床手术过程中最常用的仍是传统手工缝合.本文根据临床经验将部分传统手工缝合加以改良介绍如下.     

淮北地区储藏环境粉螨孳生调查

<正>淮北地区气候温暖湿润,各种食品和其他储藏物数量较大,为粉螨的生长繁殖提供了条件。为防制粉螨对储藏物及人体的危害,笔者于2009年对淮北地区部分储藏物孳生粉螨情况进行了初步调查。     

细胞松弛素D与钙通道阻滞剂拮抗吡喹酮作用对血吸虫超微结构的影响

目的通过观察细胞松弛素D(cytochalasin D,CyD)与钙通道阻滞剂(calcium channel blockers,CCBs)拮抗吡喹酮(praziquantel,PZQ)体外杀日本血吸虫效应的虫体体表超微结构变化,探讨PZQ对血吸虫的药物靶点及作用机制。方法在日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)单性尾蚴感染昆明小鼠6w后,采用门静脉灌注法收集雄性成虫,体外培养。将虫体分别与CyD及CCBs预孵育1h,然后在培养液内加入临界致死剂量的PZQ(14μmol/L)孵育过夜(16h)。次晨,洗涤、更换培养液,继续培养48h收集虫体作扫描电镜观察。结果超微结构显示,经CyD拮抗PZQ复活后虫体皮层无损害,抱雌沟内壁轻微改变。CCBs组尼群地平和尼非地平拮抗PZQ复活虫体,皮层及抱雌沟内壁仅有轻度损伤。结论CyD与CCBs组尼群地平和尼非地平均可拮抗PZQ对日本血吸虫体表超微结构的损伤效应,提示PZQ对虫体体表的损伤并非药物直接作用所致,而是PZQ作用于血吸虫钙通道诱导虫体痉挛性麻痹后的继发效应,实验结果进一步证明了PZQ抗血吸虫的药物靶点可能与血吸虫的钙通道有关。     

野生型PTEN诱导卵巢癌SKOV3细胞生物特性改变

【目的】 探索野生型PTEN基因对卵巢癌细胞生物学特性的影响?【方法】 将野生型PTEN基因克隆到pAdxsi腺病毒载体并感染SKOV3细胞?荧光镜下检测腺病毒载体对SKOV3细胞的感染效率;用CCK-8法检测细胞增殖的抑制效率;RT-PCR与WB分别检测PTEN mRNA与蛋白表达水平变化;免疫化学法与间接荧光法检测PTEN在细胞内的定位及细胞内NEDD4-1和RAD51等分子表达? 【结果】 稳定转染PTEN后,24 h内PTEN分布于细胞质与核内,而72 h后则主要集中于细胞核内;显著增加细胞质内NEDD4-1和细核RAD51等分子表达? 【结论】 野生型PTEN可影响SKOV3细胞增殖,并诱导细胞表达RAD51与NEDD4-1分子,有利于细胞DNA修复与细胞增殖抑制