肿瘤靶向性腺病毒研究进展

腺病毒是目前恶性肿瘤基因治疗中应用最广泛的基因转移载体,但由于其缺乏靶向性而严重限制了其介导基因治疗的临床应用.开发具有肿瘤靶向性的病毒载体是腺病毒载体的发展方向与研究热点,而对腺病毒衣壳进行改造使其能够靶向性感染肿瘤细胞是靶向性腺病毒研究的重点.现综述近年来腺病毒载体的研究进展.     

超级白细胞介素-6重组慢病毒的构建及其对肝细胞的促增殖作用

目的 观察超级白细胞介素-6重组慢病毒对人正常肝细胞L-02的促增殖作用.方法 利用慢病毒表达质粒及其包装系统构建超级白细胞介素-6重组慢病毒(FIV-Hyper-IL-6)、IL-6重组慢病毒(FIV-IL-6)和空慢病毒载体(FIV),用嘌呤霉素筛选的方法测定其病毒滴度.将人肝细胞L-02分为4组:FIV-Hyper-IL-6组、FIV-IL-6组、FIV组及未感染组,各组分别感染其相应的重组慢病毒,采用四甲基偶氮唑盐法检测其对L-02细胞生长状态的影响;并用RT-PCR法检测重组慢病毒感染L-02细胞后产生的急性时相蛋白一结合珠蛋白mRNA表达量的变化.应用方差分析进行统计学分析.结果 构建出的各重组慢病毒能成功感染靶细胞,嘌呤霉素筛选法测得的各重组慢病毒的病毒滴度均为107pfu/ml.病毒颗粒感染L-02细胞后48h,细胞的促增殖作用(A值)FIV-Hyper-IL-6组为0.6267±0.0256,FIV-IL-6组、FIV组及未感染组分别为0.5563±0.0112、0.5040±0.0078、0.4790±0.0201,F=41.09,P值均<0.01,且随着时间的延长,对细胞的促增殖作用有所增加,并于感染后72h达到最高,为0.8000±0.0166.FIV-Hyper-IL-6组细胞结合珠蛋白mRNA吸光度值为0.7030±0.0106,FIV-IL-6组、FIV组及未感染组分别为0.3355±0.0093、0.1143±0.0153、0.1145±0.0076,q=57.5007,P值均<0.01.结论 构建的Hyper-IL-6重组慢病毒能够显著刺激L-02细胞表达结合珠蛋白,对L-02细胞有较强的促增殖作用.     

阻断肝再生增强因子表达对HepG2细胞转化生长因子-α及表皮生长因子受体表达的影响

目的用RNA干扰技术阻断人肝再生增强因子（human augmenter of liver regeneration,hALR）表达,观察人肝癌细胞HepG2中转化生长因子-α（transforming growth faetor-α,TGF-α）及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达是否受影响,以阐明hALR在促进肝癌细胞生长的相关细胞因子网络中的作用。方法将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B分别转染至HepG2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,计算转染效率。免疫细胞化学法检测转染细胞中hALR表达,确定抑制效果。根据转染质粒的不同,将HepG2细胞分为3组：转染组（转染pSIALR-A）、阴性对照组（转染pSIALR-B）和空白组（未转染重组质粒）。放射免疫法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞培养上清中TGF-α水平,Western blot法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞EGFR蛋白的表达。结果转染组、空白组和阴性对照组TGF-α分别为（5.27±0.86）pg／ml、（7.92±2.65）pg／ml和（6.50±1.28）pg／ml,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P％0.05）;EGFR相对表达量分别为0.946±0.136、1.115±0.606和1.131±0.509,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在促进肝癌细胞生长的细胞因子网络中,肝再生增强因子除了可以直接刺激肝癌细胞增殖外还可通过上调TGF-α及EGFR的表达水平参与肝癌的发生、发展。     

慢性乙型肝炎自然史研究进展

在过去10年,抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗药物种类和数量剧增,对HBV感染的自然史影响较大.但至今,慢性HBV感染仍然是肝硬化和肝癌发生的重要原因.慢性乙型肝炎(CHB)为一动态过程,其自然史可概括为5个期:免疫耐受期、活动期、非活动HBV携带期、HBeAg阴性CHB、HBsAg阴性期,但这5个期不一定连续出现.认识慢性HBV感染后的动态自然史,对慢性HBV感染者的处理、适时治疗方案的选择、早期预防和监测均具有重要意义.     

炎症干扰PPARγ-LXRα-ABCA1途径介导的肾小球系膜细胞胆固醇外流

目的:观察炎症能否干扰过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)-肝X受体α(LXRα)-三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)途径介导的人肾小球系膜细胞(HMCs)的胆固醇外流。方法:将HMCs分为4组:对照组、高脂组[细胞给予100 mg/L低密度脂蛋白(LDL)处理]、炎症组[细胞给予20μg/L肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理]、联合干预组(细胞给予20μg/L TNF-α+100 mg/L LDL处理)。采用实时定量PCR和W esternb lotting方法检测PPARγ、LXRα和ABCA1的mRNA及蛋白表达水平。用[3H]标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量。用油红O染色法及化学酶促-比色法观察HMCs中脂质积聚情况。结果:与对照组相比,高脂组PPARγ、LXRα和ABCA1 mRNA及蛋白的表达明显增加,单纯的炎症刺激可下调它们的表达,而联合干预组中上述各基因和蛋白表达量比高脂组明显下降。胆固醇外流测定结果显示:与对照组相比,高脂组胆固醇外流量增加,而炎症组胆固醇外流量降低,联合干预组比高脂组胆固醇外流量明显减少。油红O染色提示联合干预组细胞内脂质积聚明显高于其余3组。细胞内胆固醇含量测定亦显示炎症能进一步加重胞内脂质积聚。结论:炎症因子可通过抑制PPARγ-LXRα-ABCA1表达导致HMCs胆固醇外流减少,加重细胞内脂质积聚。     

ERK在ALR抑制免疫过程中的变化及意义

目的观察肝再生增强因子(ALR)对外周血单核细胞增殖时ERK的影响,以探明ALR免疫抑制相关机理。方法梯度离心法分离健康人外周单核细胞,用ConA 5μg/ml刺激细胞增殖,选定最佳研究时间;观察不同剂量ALR抑制功能,选用最佳抑制剂量;利用Western blot检测ALR抑制细胞增殖时ERK的磷酸化改变。结果 ConA刺激细胞增殖最佳时间是60 h,ALR能抑制细胞增殖,并呈剂量依赖关系,30μg/ml ALR抑制效果最显著;ALR对单核细胞无直接增殖作用。ConA能引起ERK含量和磷酸化明显增加,ALR则抑制ConA对ERK的刺激,以抑制ERK2最明显。结论 ALR可能通ERK的含量和抑制ERK2的磷酸化抑制细胞增殖。     

GRP78在HepG2细胞的亚细胞定位及真核表达

目的 构建GRP78的真核表达载体以检测GRP78在HEK293细胞中的表达和定位.方法采用激光共聚焦显微镜观察GILP78在HepG2细胞中的定位,用RT-PCR方法从HepG2细胞中扩增GRP78 cDNA序列,构建真核表达载体peDNA3.1-GRP78,转染HEK293细胞,分别用Western blotting和激光共聚焦显微镜检测GRP78在HEK293细胞中的表达和定位.结果 GRP78在HepG2细胞的胞膜和胞质均有表达,GRP78在细胞膜上均匀分布.双酶切鉴定和核酸序列分析证实pcDNA3.1-GRP78真核表达质粒构建成功,该表达质粒转染HEK293细胞后可以瞬时表达GRP78蛋白.结论 正常状态下,GRP78在HepG2细胞胞膜和胞质均有表达.pcDNA3.1-GRP78转染HEK293细胞后能瞬时表达GRP78蛋白,为进一步研究GRP78的功能提供了重要工具.     

金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE的研究现状

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中SdrE蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现 SdrE蛋白质的表达几乎不受环境因素（包括温度、金属离子）的影响,并且可能与S.aureus对甲氧西林的抵抗力有关,近年来发现SdrE蛋白质的磷酸化直接影响了S.aureus的毒性,同时,SdrE蛋白质能够通过黏附补体调节因子H来逃避宿主免疫反应,并且还能够独立诱导血小板发生聚集,已经发现SdrE蛋白质能够在骨骼感染、关节感染以及骨髓炎中发挥重要作用。本文主要分析了SdrE蛋白质的生物学功能,为基于SdrE蛋白质的新的特异性抗菌药物的开发指明方向和提供理论基础。