牛蒡子苷与苷元诱导人前列腺癌PC3细胞非凋亡性死亡的研究

[目的]观察牛蒡子苷(ARC)与牛蒡子苷元(ARG)对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响,并探讨其相关机制.[方法]采用不同浓度的ARC与ARG作用于PC3细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响;瑞姬氏染色观察用药前后细胞形态变化;Annexin V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(FITC/PI)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况;Western-blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase 3的表达情况.[结果]ARC与ARG均能抑制PC3细胞的增殖,此抑制作用具有时间和浓度依赖性,两药物作用48 h组细胞存活率均显著低于24 h组(P＜0.01);ARC与ARG处理组的细胞形态变化表现为细胞膜回缩,细胞质减少,胞膜紧贴胞核,胞液纤维网状结构;流式细胞术检测发现:与空白对照组比较,ARC组与ARG组可显著增加Annexin V-FITC/PI双染阳性率(P＜0.05或P＜0.01),PI单染阳性率在浓度为20μmol/L和5μmol/L时也显著增加(P＜0.01),但Annexin V-FITC单染阳性率均无显著变化(P＞0.05).Western-blot分析结果显示:ARC或ARG作用细胞48 h时,可显著降低Bcl-2表达水平(P＜0.01),但对Bax和Caspase-3蛋白的表达无显著影响(P＞0.05).[结论]ARC与ARG可诱导PC3细胞发生非凋亡性死亡,其作用机制可能与诱导Bcl-2表达下调相关.     

方剂配伍作用“耦合效应”的数理分析方法

方药配伍的“耦合”效用假说用以阐述方剂配伍中药物相互作用所产生的效用。针对方剂的结构及作用特点构建一种适合方剂多药物配伍组合、多指标评价特点，研究方药配伍的“耦合”效用及组方规律的方法，即“均匀设计（Uniform design）-偏最小二乘回归数学建模（systems modeling of partial least square regression）-多目标优化网格算法技术（grid method for multi-objective optimization algorithm）”（UD—PLS—GMO）的方法，使所建立的研究方法更能体现中医的整体观和系统观。在此基础上建立基于WINDOWS桌面操作系统开发的，窗口化操作界面的中药复方配伍研究软件。     

通痹灵总碱对T细胞内Th1型细胞因子表达的影响

目的 :研究通痹灵总碱 (TBL)对T细胞中Th1型细胞因子表达的影响 ,并揭示其抗炎机制 ,为临床用药提供理论依据。方法 :分离小鼠肠系膜淋巴结细胞 ,加入不同浓度的TBL作用 1h ,再加多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)和离子酶素 ,继续培养 4h收获细胞 ,进行双色荧光素标记 ,以流式细胞术对Th1型细胞因子INF γ和TNF α的表达进行分析。结果 :2 0 0mg/L 和 10 0mg/L的TBL ,能显著抑制T细胞内INF γ和TNF α的表达。结论 :TBL可抑制Th1型炎症性细胞因子的表达 ,可能是其治疗类风湿关节炎的免疫药理机制之一     

树豆菧类化合物longistylin A和longistylin C的检测

目的:建立以药物活性和专属性菧类成分longistylin A与longistylin C为评价指标的树豆(木豆)药材质量控制方法.方法:采用硅胶柱色谱分离纯化有关成分,光谱技术鉴定化学结构;反相高效液相色谱法测定指标成分的含量.结果:从树豆叶分离鉴定了2种指标成分longistylin A和longistylin C;采用Thermo BDS Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水(80:20)为流动相可使指标成分获得良好分离;longistylin A和longistylin C分别在0.002 88～0.057 6μg和0.011 2～0.224 μg呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.9％,97.2％,RSD分别为2.4％,2.2％.结论:建立了以树豆叶中药物活性菧类成分为指标的药物分析方法,可用于树豆(木豆)药材的质量控制.     

消聚膏敷贴神阙穴防治内毒素所致MODS的实验研究

目的观察消聚膏对内毒素所致多器官功能失常综合征(MODS)小鼠死亡率的影响并探讨其作用机理。方法将小鼠随机分为四组,按不同的方法治疗。以内毒素腹腔注射制成MODS小鼠模型,统计小鼠不同时段的死亡率;每组取存活小鼠取材活检。结果与空白组比较,腹腔注射内毒素的小鼠生存率明显降低,治疗组小鼠15h生存率高于造模组和对照组。病理观察提示治疗组小鼠肺、肝、肾和肠病理变化明显减轻。结论消聚膏敷贴能减轻内毒素腹腔注射小鼠肠道组织的病理损伤,对防治内毒素所致的小鼠多器官功能失常有一定的作用。     

靛蓝和靛玉红对小鼠T细胞活化与增殖的影响

目的:研究靛蓝(IB)和靛玉红(IR)对小鼠T细胞活化和增殖的影响.方法:以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子表达情况;通过2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠盐(WST-1)法测定细胞增殖;通过CFDA-SE染色流式细胞术检测增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI).结果:小鼠T细胞离体培养6 h后,对照组活化比率为(14.25±2.25)%,在ConA的刺激下小鼠T细胞活化显著(35.25±2.31)% (P<0.01),IB和IR分别显著降低活化,(26.88±0.99)%和(23.98±2.25)% (P<0.01).在ConA的刺激下,小鼠T细胞WST-1吸收度(1.28±0.09)显著高于对照组(0.33±0.02)(P<0.01).IB和IR分别显著降低了ConA引起的WST-1吸收度增加(P<0.01).在培养48 h后,空白对照组CFDA-SE流式细胞术检测结果仅显示单一亲代峰(parent),PI为1.0.ConA刺激下小鼠T细胞明显增殖,出现子一代和子二代峰,PI为1.36.在IB或IR作用下,ConA介导的小鼠T细胞增殖明显下降,亲代峰细胞数增多,子一代和二代的细胞数降低,PI均为1.22,低于ConA组.结论:靛蓝和靛玉红均可以显著的抑制ConA介导的小鼠T细胞的活化和增殖.     

中药艾可清体外抑制猴免疫缺陷病毒活性的观察

以猴免疫缺陷病毒（SIV）和相应的CEMx－174细胞系统为模型,以3-叠氮胸苷（azidothymidine,AZT）为阳性对照药物,以抗原阳性细胞抑制率、病毒产量、细胞病变和SIV－1p27抗原表达抑制率为指标,观察了以清热解毒中药（紫花地丁、夏枯草、黄芩等）为主组成的艾可清复方对SIV的体外抑制作用。结果表明：中药艾可清在亚细胞毒性浓度（1：320）对抗原阳性细胞抑制率为69．6％,病毒产量显著下降,SIV-1p27抗原表达抑制百分率为94．67％,基本可以抑制细胞病变。综合4项指标,艾可清抑制SIV活性ED50为1：1280。提示该方在体外具有明显的抑制SIV活性作用。