红景天苷对小鼠原代T淋巴细胞体外行为的影响

目的:分析红景天苷(Sal)对小鼠原代T淋巴细胞体外行为的影响。方法:无菌分离并培养BALB/c近交系小鼠淋巴结细胞,MTT比色法检测并分析Sal对小鼠T淋巴细胞活力的影响;荧光染料标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术(FCM)检测刀豆蛋白A(Con A)诱导作用下Sal对T淋巴细胞活化抗原CD69表达水平的影响。羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色分析T淋巴细胞体外增殖情况。2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)荧光染色检测小鼠T淋巴细胞胞内活性氧簇(ROS)生成。Di OC6(3)染色检测Sal对T淋巴细胞胞内线粒体活性的影响以及地塞米松(DEX)诱导作用下Sal对T淋巴细胞线粒体膜电位的影响。制备小鼠胸腺T淋巴细胞悬液,FCM检测DEX诱导作用下胸腺T淋巴细胞的凋亡率。结果:终浓度为80、160和320μmol/L的Sal均能提高T淋巴细胞活化抗原CD69的表达水平(P0.05)。Sal能促进Con A诱导72 h条件下T淋巴细胞体外增殖(P0.01),且能减少T淋巴细胞胞内ROS生成量(P0.05),对T淋巴细胞线粒体膜电位有保护作用(P0.01)。Sal能明显降低DEX诱导条件下的胸腺T淋巴细胞凋亡率(P0.01)。结论:Sal能够促进T淋巴细胞的体外活化和增殖,减少T淋巴细胞内ROS的产生,维持细胞内线粒体膜电位稳定性,抑制DEX诱导条件下胸腺T淋巴细胞的凋亡。     

银杏内酯B对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖与凋亡的影响

目的银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本文研究GB对小鼠T淋巴细胞活化、增殖及凋亡3大体外行为的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法分离小鼠淋巴细胞,培养前以不同浓度的GB预孵;以刀豆蛋白A(Con A)诱导细胞的活化与增殖,以荧光抗体双色标记(anti-CD3 mAb-PE/anti-CD69 mAb-FITC、anti-CD3 mAb-PE/anti-CD25 mAb-FITC)结合流式细胞术分别检测T淋巴细胞早、中期活化标志--表面抗原CD69与CD25的表达,以活体荧光染料CFDA-SE标记结合流式细胞术检测细胞增殖并用MTT法佐证;以地塞米松(Dex)诱导细胞的凋亡,以荧光染料双色标记[DiOC6(3)/PI]结合流式细胞术区别凋亡、死亡与活细胞群。结果 Con A刺激后6 h和24 h,T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分别大量表达,Con A刺激后48 h活化的T细胞增殖至第4代,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在Con A刺激前对细胞进行4 h预孵处理可以显著下调T细胞表面抗原CD69、CD25的表达并能有效抑制细胞增殖。Dex诱导后12 h细胞凋亡和死亡群显著增大,而经同样的GB预孵处理可以在一定程度上抑制细胞的凋亡进程,对细胞凋亡显示出一定的保护作用。结论 GB能有效抑制小鼠T淋巴细胞的活化与增殖,并且对细胞凋亡起到一定的保护作用,凭借GB对T细胞此3大行为出色的调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。     

肠道微生物群的病理生理学进展

Before the technique of advanced high-throughput sequencing comes up, less is known about the human gut microbiota. It has been understood that trillions of microbes, in which 99% are bacteria, inhabit the human gut, forming a complicated ecological community. The gut microbiota has a great impact on human physiology and susceptibility to disease through its integrative metabolic activities and interactions with the host. In physiology, gut microbiota contributes to the host acquisition of nutrition and energy from diets, promoting development and maturation of gastrointestinal tract and immune system, and protecting host from invasion of enteropathogens. In pathology, dysbiosis underlying altered gut microbiota is associated with the susceptibilities to various diseases, including inflammatory bowel disease, type 1 diabetes, asthma, obesity, metabolic syndrome, autism and cancer. Understanding of the factors that underlie alterations in the composition and function of gut microbiota will be helpful in the development of drugs and the design of therapies that target it. This goal is formidable. It is because that the compositions of gut microbiota are immensely diverse, varying between individuals in a population and fluctuating over time in an individual, especially during early development and diseases. Viewing the gut microbiota with an ecological perspective will provide new insights into how to improve our health by targeting this microbial community in clinical treatments.     

Forskolin对佛波醇酯类刺激的小鼠体外T淋巴细胞行为的影响

目的 分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69分子和中期活化标志CD25分子的影响,从而阐明其作用机制.方法 无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育48h后,运用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色技术和碘化丙锭(PI)染色技术结合流式细胞术、CRLLQuest 和ModFitLT软件,分别榆测Fomkolin对PDB+Ion刺激下小鼠CD3+T淋巴细胞增殖和周期的影响;与不同浓度的Forskolin孵育2 h、10 h,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测Fomkolin对PDB诱导下的小鼠CD3+T淋巴细胞CD69分子和CD25分子表达的影响.结果 Forskolin(10-7、10-6、10-5 mol·L-1)均能明显抑制PDB+Ion刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞的增殖并将细胞阻滞在G0/G1期;同时也能明显抑制单纯PDB刺激下的CD3+T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系.结论 提示Forskolin在CD3+T细胞活化过程中信号转导的某个环节上有抑制作用,从而通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂.     

橙皮素对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:研究橙皮素(Hes)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:用ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度Hes与T细胞共培养,利用荧光标记抗体双染色结合流式细胞术(FCM),检测各药物浓度Hes对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期活化抗原CD69的作用;以酶标仪结合MTT比色法检测Hes药物的细胞毒性和对ConA诱导的小鼠淋巴结来源的淋巴细胞增殖的影响;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合FCM检测Hes对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的作用,并应用ModFit软件分析其增殖指数(PI).结果:淋巴细胞的存活率说明0.2 mL/L DMSO和25～75 μmol/L范围内的Hes对小鼠T淋巴细胞无毒副作用;MTT法、CFDA-SE法、双抗体染色法检测Hes对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖和活化结果均显示,终浓度为25、50、75 μmol/L的Hes对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖和活化均有抑制作用且呈剂量依赖关系.结论:有望通过进一步的研究将Hes发展为免疫抑制药物.     

根皮素对小鼠T淋巴细胞体外活化、周期、Ca~(2+)离子内流以及凋亡的影响

目的:研究根皮素(Ph)对小鼠T淋巴细胞中期活化、细胞周期、Ca~(2+)离子内流以及凋亡的影响,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性.方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术(FCM)分析Ph对多克隆刺激剂(ConA)刺激下的小鼠T淋巴细胞CD25表达的影响;PI染色法检测Ph对T淋巴细胞周期的影响;Fluo-4/AM染色结合FCM分析Ph对T淋巴细胞Ca~(2+)离子内流的影响;calcein/Co~(2+)技术检测Ph对T淋巴细胞线粒体通透性转换(MPT)的影响,并用DIOC_6(3)染色检测其对线粒体膜电势(MMP)的影响.结果:Ph(40,60,80 μmol/L)对ConA刺激的T淋巴细胞CD25表达有显著的抑制作用(P＜0.01＝;Ph能抑制T淋巴细胞Ca~(2+)离子内流(P＜0.01＝;细胞周期分析显示,Ph能将T淋巴细胞抑制在S期;且Ph能够诱导和加速MPT,并导致MMP的显著下降.结论:Ph对小鼠T淋巴细胞活化和Ca~(2+)内流具有显著的抑制作用,并能将细胞抑制在S期,能通过线粒体途径诱导T淋巴细胞凋亡,可望发展成为一种新的免疫抑制药物.     

白血病干细胞相关抗原在急性白血病细胞中的表达

目的 探讨白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)相关抗原在不同亚型急性白血病细胞中的表达规律.方法 采用流式细胞术检测LSC相关抗原CD96,CD90,CD123,CD71等在50例不同亚型急性白血病细胞中的表达,包括急性粒细胞白血病未分化型(M1)、急性粒细胞白血病部分分化型(M2)、急性早幼粒细胞白血病(Ms)、急性粒-单核细胞白血病(M4)和急性B淋巴细胞白血病.结果 CD96在M.的表达率(90.00％)明显高于M2(18.18％)和急性B淋巴细胞白血病(20.00％)(P＜0.05);各亚型急性白血病均表达CD123,但差异无统计学意义(P＞0.05) ;CD71在急性髓细胞白血病各亚型中(M1、M2、M3和M4)阳性表达率分别为80.00％、72.73％、90.00％和100.00％,明显高于急性B淋巴细胞白血病(P＜0.05);CD90在急性B淋巴细胞白血病中阳性表达率为13.33％,高于急性髓细胞白血病(P＞0.05).结论 CD71与CD96的表达有亚型特异性,CD96可能具有指示系列分化和细胞分化程度的作用,CD71可用于区分急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病.     

补阳还五汤预处理大鼠对其脑死亡后肝脏的保护作用

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应,移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键[1].本研究旨在观察补阳还五汤(BYHWT)预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化和反应性氧族(ROS)的变化,探讨其对肝脏的保护机制.     

角质形成细胞与表皮干细胞双向电泳图谱差异分析

1.1 主要试剂与仪器 1.1 主要试剂与仪器 pH固相梯度干胶条(IPGstrip pH 3～10,长17 cm)购自广州威佳公司,dispase Ⅱ、表皮干细胞(ESC)培养基、FBS和DMEM培养基购自美国Gibco公司,角蛋白19购自美国San-ta Cruz公司.等电聚焦仪、垂直电泳系统、透射扫描仪(Im-age Scanner Ⅱ型)及扫描软件Lab Scan均购自美国通用公司,图像分析软件Image Master 2D Elite 5.0由美Amer-sham Biosciences公司提供,FACS Calibur型流式细胞仪购自美国BD公司.     

青藤碱对胶原诱导型关节大鼠滑膜细胞增殖及凋亡影响的研究

目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径。方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于W istar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组、甲氨蝶呤(M TX)治疗组和青藤碱(SIN O)治疗组,采用容积法和计分法分别评价后肢肿胀度和四肢关节炎症程度;左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(H E)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生和纤维组织增生的情况;对足肿胀和病理各项指标进行回归性分析。碱性磷酸酶标记法检测大鼠滑膜细胞凋亡;免疫组织化学法检测突变型p53的表达。比较M TX和SINO灌胃治疗后各项指标的差异。结果CIA大鼠造模后,炎症迅速发展,1周内即可达到肿胀高峰,然后逐渐消退,在第21～25天后又出现第2个炎症高峰。药物治疗17d后抑制CIA肢炎症的作用逐渐显现出来。M TX和SIN O都可明显抑制第2个炎症高峰,后肢肿胀度和四肢肿胀积分在35d与造模加生理盐水组差异有统计学意义(P<0.01);病理结果中,CIA大鼠关节表现为单个核炎症细胞浸润(包括中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞的浸润),滑膜细胞增生、纤维组织增生;足肿与淋巴细胞浸润,滑膜增生呈直线回归关系,其中以滑膜增生为主(P<0.01