中-重度压力性尿失禁仿生物理治疗与TVT-O手术疗效的对比研究

目的探讨仿生物理治疗及无张力经闭孔阴道吊带术(tension-free vaginal tape obturator technique,TVT-O)治疗压力性尿失禁的疗效,并行对比分析。方法选取确诊为中-重度压力性尿失禁的患者108例为研究对象,根据患者意愿分为非手术组及手术组,非手术组54例,应用Phenix USB4盆底功能治疗仪进行系统仿生物理治疗3疗程,行疗效分析;手术组54例,实施TVT-O术,行疗效分析。结果非手术组1个疗程仿生物理治疗后评估,44例有效,有效率81.48%,入组成员继续坚持2疗程仿生物理治疗,疗程结束后1年复查,52例有效,其中46例治愈,1年有效率96.30%,治愈率85.19%;手术组术后即时评估,50例有效,有效率92.59%,术后1年复查,49例有效,其中47例治愈,术后1年有效率90.74%,治愈率87.04%。非手术组治疗1疗程有效率显著低于TVT-O术后即时疗效,差异有统计学意义,P0.05;但两组治疗后1年有效率及治愈率比较,差异均无统计学意义(P0.05),且手术组患者出现了围手术期相关并发症及远期并发症。结论 SUI的仿生物理治疗是一项有效的保守治疗方法,能有效缓解症状甚至治愈,预防病情进一步加重,对于中-重度压力性尿失禁患者而言,其远期治疗效果与手术治疗效果相当,但能有效避免手术并发症,值得在临床广泛推广。     

人骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达

背景：人骨唾液蛋白基因在矿化组织以外的易发生骨转移的人乳腺癌中表达。临床观察显示骨转移处的乳腺癌细胞骨唾液蛋白的表达量要高于原发部位的乳腺癌细胞，因此骨唾液蛋白有可能与肿瘤特异性骨转移的关系密切。研究乳腺癌骨转移可为将来临床的预防和治疗提供新的药物靶点。目的：建立骨唾液蛋白的稳定表达乳腺癌细胞系，观察骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移的整个过程中的作用。设计：对照实验。单位：华南理工大学生物科学与工程学院，解放军广州军区广州总医院医学实验中心。材料：实验于2003-11／2004-03在解放军广州军区广州总医院医学实验室完成。质粒、菌种和细胞：pIRES2-EGFP载体质粒，E．Coli．Top10、含有人骨唾液蛋白基因全长的克隆载体pB-hBSP和发生特异性骨转移以及脑转移的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO和MDA-MB-23lBR。方法：将人骨唾液蛋白基因通过聚合酶链式反应的方法从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆出来，在其5’和3’端分别引入BglⅡ和PsiⅠ限制性酶切位点，定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP，构建重组载体pIRES2-hBSP-EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性脑转移和骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BR和MDA-MB-231BO中。主要观察指标：pIRES2-hBSP-EGFP重组表达载体的构建。重组表达载体pIRES2-hBSP-EGFP转染乳腺癌细胞。结果：①成功构建人骨唾液蛋白和绿色荧光蛋白非融合表达的真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP。②成功转染特异骨转移和脑转移的乳腺癌细胞株，可在荧光显微镜下观察到荧光蛋白标记，人骨唾液蛋白得到相应表达。结论：真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP的构建及转染可为骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移中的作用的体内、外研究奠定一定的基础。     

人参-三七-川芎提取物延缓过氧化氢诱导的内皮细胞衰老中线粒体氧化应激的作用

目的 通过观察人参-三七-川芎提取物（GNC）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老中线粒体氧化应激的影响,探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法 本研究以HUVECs作为研究对象,H₂O₂诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白组,H₂O₂组,H₂O₂+DMSO组（DMSO）,白藜芦醇组（Resv）及GNC提取物低（GNC-L）,中（GNC-M）,高（GNC-H）质量浓度组,除空白组,H₂O₂组外,其余各组分别给予DMSO 1 mL·L^-1,Resv 8 μmol·L^-1,GNC 400,300,200 mg·L^-1药物干预,24 h后除空白组外给予300 μmol·L^-1 H₂O₂诱导HUVECs衰老,再给予正常培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法鉴定细胞衰老程度,流式细胞仪分析细胞周期,采用Mito SOX RED荧光染色法测定细胞内线粒体活性氧（mtROS）水平,以JC-10为荧光探针检测细胞内线粒体膜电位变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测含锰超氧化物歧化酶（MnSOD）与磷酸化（p-）p66的蛋白表达。结果 SA-β-gal染色结果显示,与空白组比较,H₂O₂组SA-β-gal染色蓝染细胞显著增多（P<0.01）;与H₂O₂组比较,各浓度组SA-β-gal染色蓝染细胞显著减少（P<0.01）;细胞周期结果显示,与空白组比较,H₂O₂组G₀/G₁期细胞数量比例明显增多（P<0.05）,G₂/M期细胞比例明显减少（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC各组及Resv组G₀/G₁期细胞数量比例明显减少（P<0.05）,GNC-H组,Resv组在G₂/M期细胞比例明显增加（P<0.05）。线粒体ROS荧光结果显示,与空白组比较,H₂O₂组强度明显减弱（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC-H,GNC-M组强度明显增高（P<0.05）;线粒体膜电位结果显示,与空白组比较,H₂O₂组荧光强度显著下降（P<0.01）;与H₂O₂组比较,GNC-H,GNC-M,GNC-L组线粒体膜电位荧光强度显著增高（P<0.01）,Resv组明显增高（P<0.05）;Western blot结果显示,与空白组比较,H₂O₂组MnSOD含量明显降低（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC-H与GNC-M组表达明显增多（P<0.05）;与空白组比较,H₂O₂组p-p66含量显著增高（P<0.01）;与H₂O₂组比较,各用药组表达显著降低（P<0.01）,表明用药后可减轻细胞内线粒体氧化应激反应。结论 中药人参-三七-川芎提取物可以延缓H₂O₂诱导的血管内皮细胞的衰老,药物干预后,细胞线粒体活性氧、线粒体膜电位及相关蛋白MnSOD,p-p66蛋白发生明显改善,氧化应激反应减轻,其机制可能是中药通过抑制线粒体氧化应激反应延缓血管内皮细胞衰老的进程。     

人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用

目的:观察人参-三七-川芎提取物对延缓内皮微粒(EMPs)诱导的血管内皮细胞衰老的影响,并探索其作用机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,复制性衰老10~12代细胞作为衰老模型,实验分为年轻组(2~4代细胞)、衰老组(10~12代细胞)、单纯EMPs干预组(提取衰老细胞产生的EMPs来干预年轻细胞)以及中药低、中、高剂量组(200,300,400 mg·L-1)。结合衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期来判断细胞衰老程度。采用细胞活性和细胞增殖检测(CCK-8)法筛选给药浓度,两步离心法分离出EMPs,藻红蛋白(PE)CD31抗体或异硫氰酸荧光素(FITC)Annexin V标记分离得到的EMPs,并用流式细胞术进行定量,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与衰老组比较,中药给药组可显著降低衰老细胞SA-β-gal活性(P<0.01),使细胞周期S期阻滞得到恢复(P<0.01),并降低衰老细胞分泌CD31+EMPs及Annexin V+EMPs的数量(P<0.05)。与年轻组比较,单纯EMPs干预组可诱导年轻细胞SA-β-gal活性增强(P<0.01),细胞周期阻滞于S期(P<0.05),与衰老组比较,但在EMPs干预的同时给予中药干预后,可明显抑制EMPs介导增强的SA-β-gal活性(P<0.05),并使S期阻滞得到恢复。中药组还可明显抑制EMPs诱导的细胞内ROS增高(P<0.05,P<0.01)。结论:人参-三七-川芎提取物可通过影响EMPs延缓复制性血管内皮细胞衰老,其机制可能与抑制EMPs诱导的细胞内ROS水平增高有关。     

甲连盆腔胶囊对盆腔炎性后遗症大鼠子宫病理形态及TLR2、TLR4-NF-κB信号通路的影响

目的观察甲连盆腔胶囊对盆腔炎性后遗症大鼠子宫组织病理结构及Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)-核因子kappa B(NF-κB)信号通路相关蛋白的影响。方法选取雌性SD大鼠60只,随机分为空白组、假手术组、模型组、甲连盆腔胶囊组、妇科千金胶囊组,每组12只。正常组不做处理,假手术组仅开关腹,其余大鼠均采用苯酚胶浆法建立盆腔炎性后遗症大鼠模型。造模成功后,甲连盆腔胶囊组给予40 mg/mL的甲连盆腔胶囊混悬液18.75 mL/(kg·d)灌胃,妇科千金胶囊组予以40 mg/mL的妇科千金胶囊混悬液6.25 mL/(kg·d)灌服,空白组、假手术组、模型组大鼠予等容量蒸馏水灌胃,连续干预14 d。肉眼观察各组大鼠子宫外观情况;HE染色观察子宫组织病理形态改变;ELISA检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法检测子宫组织中TLR2、TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB蛋白表达水平。结果模型组大鼠子宫弯曲、变形、充血水肿,HE染色观察子宫组织结构紊乱、腺体萎缩,上皮细胞变性、坏死,大量炎性细胞浸润;而甲连盆腔胶囊组与妇科千金胶囊组子宫形态改变较轻,光镜下观察上皮细胞坏死脱落、腺体萎缩情况及炎性细胞浸润较模型组减轻。与空白组和假手术组比较,模型组血清TNF-α水平及子宫组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05);与模型组比较,甲连盆腔胶囊组和妇科千金胶囊组大鼠血清TNF-α水平及子宫组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05),甲连盆腔胶囊组与妇科千金胶囊组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论甲连盆腔胶囊能有效抑制盆腔炎性后遗症大鼠炎症反应,减轻组织损伤,其机制可能与调节TLR2/4-NF-κB信号通路相关。     

针刺对膝骨关节炎患者膝关节损伤与骨关节炎评分的影响

目的:验证针刺治疗膝骨关节炎(KOA)的临床疗效。方法:将42例KOA患者随机分为针刺组(21例,脱落1例)和假针刺组(21例,脱落1例)。针刺组从本课题组制定的半标准化针刺方案穴位库中选取5~6个局部穴位(犊鼻、内膝眼、鹤顶、阴陵泉、血海、足三里等)、3~4个远端穴位(风市、外丘、悬钟、足临泣等)进行常规针刺;假针刺组选取非经非穴浅刺,两组均留针30 min,每周治疗3次,共8周。分别于治疗前后及治疗后18周随访时记录两组患者膝关节损伤与骨关节炎评分(KOOS)。结果:与治疗前比较,治疗后及随访时两组患者KOOS 5个维度[疼痛、症状(除疼痛)、日常活动、体育与娱乐功能及生活质量]评分均升高(P<0.05),且针刺组治疗后及随访时疼痛及日常活动评分均高于假针刺组(P<0.05)。结论:针刺可减轻膝骨关节炎患者疼痛症状,提高其日常活动能力。     

双果喉乐汤通过调控ERK1/2-COX-2-PGE2 信号通路对急性咽炎模型大鼠的影响

目的:探讨双果喉乐汤改善急性咽炎大鼠的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、双果喉乐汤高、中、低剂量组,每组10只。除对照组外,其他各组大鼠建立急性咽炎模型。造模成功后,模型组、对照组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,地塞米松组、双果喉乐汤高、中、低剂量组分别灌胃相应剂量的药物,给药7 d。观察各组大鼠病理状态,检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2 (PGE2)含量,咽部组织中丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)和环氧合酶-2 (COX-2) mRNA表达及ERK1/2、p-ERK1/2和COX-2蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠咽部组织细胞排序紊乱,黏膜上皮有严重角化,可见大量炎性细胞浸润,上皮层增生明显,黏膜内血管扩张及出血,腺体数量增多;血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量、咽部组织中ERK1/2 mRNA和COX-2mRNA表达及咽部组织中p-ERK1/2和COX-2蛋白表达水平升高(P0.05)。与模型组比较,地塞米松组、双果喉乐汤高、中、低剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量、咽部组织中ERK1/2 mRNA和COX-2 m RNA表达及咽部组织中p-ERK1/2和COX-2蛋白表达水平降低(P0.05)。与地塞米松组比较,双果喉乐汤中、低剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量、咽部组织中ERK1/2 mRNA和COX-2 mRNA表达较高(P0.05);双果喉乐汤低剂量组大鼠咽部组织中p-ERK1/2及COX-2蛋白表达水平较高(P0.05);双果喉乐汤高剂量组大鼠血清中IL-1β、IL-6、PGE2含量及咽部组织中ERK1/2 mRNA表达较高(P0.05),COX-2 m RNA表达较低(P0.05)。与双果喉乐汤低剂量组比较,双果喉乐汤高、中剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量及咽部组织中ERK1/2 mRNA和COX-2 mRNA表达较低(P0.05);双果喉乐汤高剂量组大鼠咽部组织中p-ERK1/2及COX-2蛋白表达水平较低(P0.05)。结论:双果喉乐汤对氨水诱发的大鼠急性咽炎具有明显的改善作用,可能与调节ERK1/2-COX-2-PGE2信号通路有关。     

基于数据挖掘和网络药理学的颈动脉粥样硬化用药规律及作用机制研究

目的利用数据挖掘及网络药理学方法探讨中医药治疗颈动脉粥样硬化（Carotid atherosclerosis,CAS）的 用药规律和作用机制。方法收集中国知识资源总库（CNKI）中关于中医药治疗CAS 的相关文献,借助中医传 承辅助平台V2.5 挖掘用药规律,获得核心药物配伍及新组方。通过“中药系统药理学分析平台”（TCMSP）、 genecards 数据库获得核心药物配伍组治疗CAS 的主要靶点,再运用Cytoscape 软件中的Cluego 插件对主要靶 点进行KEGG 通路富集分析。揭示核心药物配伍治疗CAS 的潜在作用通路。结果在CNKI 中共筛选出47 首 处方,挖掘出14 个核心药物配伍及7 首新处方,赤芍、川芎、当归和红花作为核心药物配伍组,在治疗CAS 中主要通过IL-17 信号通路、HIF-1 信号通路、MAPK 信号通路等炎症通路以及血管内皮生长因子信号通路、 流体剪切应力与动脉粥样硬化等通路起作用。结论中药治疗CAS 以行气活血化瘀为主,核心药物配伍组治 疗CAS 的作用机制可能通过干预IL-17 信号通路、HIF-1 信号通路、MAPK 信号通路等炎症通路以及血管内皮 生长因子信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化等通路实现。     

脐血、孕妇外周血IL-18检测意义的初探

IL-18是一种多效应的细胞因子,在免疫系统和某些疾病状态的自身调节中起作用.IL-18的主要生物学活性是刺激T细胞的增殖,促进TH1免疫应答,诱生IFN-γ,增强FasL介导的细胞毒效应,且具有抗肿瘤活性及前炎症介质活性[1].目前,已经对IL-18在抗肿瘤、抗病毒、抗过敏等方面进行了广泛研究.有关IL-18在孕妇外周血和脐血中的含量及检测意义尚未见报道.我们用ABC-ELISA检测这两种标本中的IL-18含量,报道如下.     

针灸防治癌因性疲乏临床实践指南研究

目的：探索针灸防治癌因性疲乏的临床应用方案,为制定临床实践指南提供依据。方法：通过计算机检索国家知识基础设施数据库（CNKI）、中国学术期刊数据库（CSPD）、中文科技期刊数据库（CCD）、中国生物文献、PubMed、EMBASE、Cochrane Library等数据库,全面收集针灸疗法治疗癌因性疲乏的现代文献证据;通过人工检索49本古代医籍,收集关于针灸疗法治疗疲乏的古代文献证据;通过制定发放《针灸干预癌因性疲乏调查问卷》,收集针灸干预癌因性疲乏的现代一线专家经验。整合3方面证据形成针灸防治癌因性疲乏临床推荐方案。结果：现代文献共检索到225篇,其中中文文献141篇,英文文献84篇,经筛选,最终纳入14篇现代文献;古代医籍文献与之相关的条目共10项;临床专家问卷共收回52份。综合3方面研究结果发现针灸治疗癌因性疲乏常用针刺、艾灸、穴位按压、电针、经皮穴位电刺激等疗法;常用穴位为足三里、三阴交、关元、气海、太溪、合谷、中脘、百会、太冲、印堂、天枢。结论：综合3方面证据,形成针灸防治癌因性疲乏的临床推荐应用方案,强烈推荐使用针刺、艾灸、穴位按压等疗法;弱推荐使用经皮穴位电刺激、电针等疗法;推荐使用穴位为足三里、三阴交、关元、气海、太溪、合谷、中脘、内关、百会、太冲、印堂、天枢、神门等穴。